Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* очистка РНК на колонках
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Serg900
Участник



 прочитанное сообщение 18.10.2016 14:08     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Добрый день, господа!

У меня специфическая потребность выделить бенд РНК 700 пн из геля (после транскрипции In vitro). На авось попробовал на колонках для выделения ДНК из геля, но ничего не выделилось. Может кто даст ссылку на протокол очистки РНК на колонках, че то гугл сходу не помог) А еще, если просто растворить гель с бендом РНК в 100мкл связывающего буфера (NaI 6M?), а потом тупо добавить это дело в 6 мл гибридизационного буфера, как Вы, уважаемые форумчане, думаете сработает такая смесь в нозерне?
Участник оффлайн! ksm
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.10.2016 14:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

в гибридизационный буфер разве не ссДНК льтют? зачем резать из геля, если РНК предварительно просто разделяют в геле и после этого переносят? ну, вырежите фрагмент мембраны в районе 700 пн
Участник оффлайн! Serg900
Участник



 прочитанное сообщение 18.10.2016 15:38     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Это РНК зонд.
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 18.10.2016 18:07     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

после in vitro транскрипции выделял китом miRNAeasy, думаю для фрагмента 700 можно и RNeasy исползовать. А вы думаете что после транскрипции у вас много разных фрагментов получается? вы это на геле проверяли?
интересно зачем для Нозерна нужен РНК зонд, а не ДНК зонд?
Участник оффлайн! Serg900
Участник



 прочитанное сообщение 18.10.2016 18:18     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(ship @ 18.10.2016 18:07)
Ссылка на исходное сообщение  после in vitro транскрипции выделял китом miRNAeasy, думаю для фрагмента 700 можно и RNeasy исползовать.  А вы думаете что после транскрипции у вас много разных фрагментов получается? вы это на геле проверяли?
интересно зачем для Нозерна нужен РНК зонд, а не ДНК зонд?

Чувствительность РНК зонда на порядок выше ДНК зонда, плюс я могу использовать смысловые зонды как контроль. Да проблема в двойном бенде. ПЦР матрица (с кДНК) содержит еле заметный второй более короткий амплифициремый фрагмент, который в транскрипции дает наряду с основным зондом довольно приличное количество короткого. Я не уверен, что это неспецифика и думал проверить оба бенда как зонды по отдельности..
Участник оффлайн! ship
Постоянный участник
Moscow



 прочитанное сообщение 18.10.2016 18:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(Serg900 @ 18.10.2016 16:18)
Ссылка на исходное сообщение  Чувствительность РНК зонда на порядок выше ДНК зонда, плюс я могу использовать смысловые зонды как контроль. Да проблема в двойном бенде. ПЦР матрица (с кДНК) содержит еле заметный второй более короткий амплифициремый фрагмент, который в транскрипции дает наряду с основным зондом довольно приличное количество короткого. Я не уверен, что это неспецифика и думал проверить оба бенда как зонды по отдельности..

ну так может проще вырезать и выделить в чистом виде нужную полосу ПЦР матрицы для транскрипции, нежели чем ломать голову над разделением продууктов ин витро транскрипции?
и делать зонды независимо с ккаждой полосы полосы кДН матрицы?
Участник оффлайн! Serg900
Участник



 прочитанное сообщение 18.10.2016 18:49     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Второго бенда в ПЦР матрице очень мало, можно ненароком зависнуть. Но может придется так делать, если ничего не посоветуют
Участник оффлайн! ksm
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.10.2016 19:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

GlassMilk и аналоги. AMPure не знаю, как с иодидом... возможно G-25 микроколонки. я бы сначала попробовал как вы писали, залить все в гибридизационный буфер.
у вас много РНК кстати?

Сообщение было отредактировано ksm - 18.10.2016 19:04
Участник оффлайн! Serg900
Участник



 прочитанное сообщение 18.10.2016 21:15     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Да, зонда хватает, а для гибридизации надо совсем немного. Наверно, все таки попробую с буфером для растворения геля. Он кстати вроде из гуанидина.
Участник оффлайн! Serg900
Участник



 прочитанное сообщение 26.10.2016 17:37     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

Делюсь результатом. Зонд, вырезанный из геля и растворённый в гуанидине работает.

Всего благодарностей: 2Поблагодарили (2): berm, ksm
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  24.11.2021 15:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

https://app.ex.co/stories/bestreplicawatche...-regime-for-you
https://rolexrelicawatches.hpage.com/replica-watches-uk.html
https://www.cgmimm.com/articles/hints-to-he...lica-watches-uk
https://www.deviantart.com/fakerolexwatches...es-UK-871090193
https://replicawatches24.exposure.co/best-r...eplicawatches24
https://knowyourmeme.com/users/replicawatchesuk
https://www.scoop.it/topic/bestreplicawatch...ica-rolex-watch
https://uberant.com/article/1268140-hints-o...ca-rolex-watch/
https://devpost.com/watcheshutuk
https://www.ted.com/profiles/26540630/about
https://drive.google.com/file/d/1uTx90WraSJ...iew?usp=sharing
https://ibb.co/hgfZwb0
https://writer.zohopublic.com/writer/publis...10192bd4c742ceb
https://replicawatches24.mystrikingly.com/b...ica-rolex-watch
https://my.desktopnexus.com/ReplicawatchesU...a-rolex--31049/
https://sway.office.com/Tqm7mC7s0VWLhKAl
nigoal123
IP-штамп: frAWeMdOsBSXM
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  19.05.2022 06:44     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Anyone can connect บาคาร่าออนไลน์ with their audience slot xo through blogging and enjoy 11hilo you who your readers are. สล็อต the myriad benefits that 123GOAL blogging provides

organic traffic from nigoal from the first sentence.ลิงค์รับทรัพย์ search engines promotional พ ริ ต ตี้ เกม มิ่ง content for social media ราคา บอล and recognition from a new Hotgraph audience you haven’t tapped into yet.
Guest
IP-штамп: frAWeMdOsBSXM
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  19.05.2022 10:45     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

For the past 15 years, India Pggame123 and China have vied 88ktc for favourable diplomatic สล็อต123 and trade relations 123bets with Sri Lanka thanks 11hilo to its strategic location in the Indian หวยปิงปอง ocean. While popular perception สล็อต123 indicated China had outpaced India, the 123VEGA recent economic and Dreamgaming political turmoil in Sri Lanka seems to ปั่นสล็อต have given India's foreign policy.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 11:40
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft