Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Serg900 Участник |
У меня специфическая потребность выделить бенд РНК 700 пн из геля (после транскрипции In vitro). На авось попробовал на колонках для выделения ДНК из геля, но ничего не выделилось. Может кто даст ссылку на протокол очистки РНК на колонках, че то гугл сходу не помог) А еще, если просто растворить гель с бендом РНК в 100мкл связывающего буфера (NaI 6M?), а потом тупо добавить это дело в 6 мл гибридизационного буфера, как Вы, уважаемые форумчане, думаете сработает такая смесь в нозерне? |
ksm Постоянный участник |
|
Serg900 Участник |
|
ship Постоянный участник Moscow |
интересно зачем для Нозерна нужен РНК зонд, а не ДНК зонд? |
Serg900 Участник |
(ship @ 18.10.2016 18:07) после in vitro транскрипции выделял китом miRNAeasy, думаю для фрагмента 700 можно и RNeasy исползовать. А вы думаете что после транскрипции у вас много разных фрагментов получается? вы это на геле проверяли? интересно зачем для Нозерна нужен РНК зонд, а не ДНК зонд? Чувствительность РНК зонда на порядок выше ДНК зонда, плюс я могу использовать смысловые зонды как контроль. Да проблема в двойном бенде. ПЦР матрица (с кДНК) содержит еле заметный второй более короткий амплифициремый фрагмент, который в транскрипции дает наряду с основным зондом довольно приличное количество короткого. Я не уверен, что это неспецифика и думал проверить оба бенда как зонды по отдельности.. |
ship Постоянный участник Moscow |
(Serg900 @ 18.10.2016 16:18) Чувствительность РНК зонда на порядок выше ДНК зонда, плюс я могу использовать смысловые зонды как контроль. Да проблема в двойном бенде. ПЦР матрица (с кДНК) содержит еле заметный второй более короткий амплифициремый фрагмент, который в транскрипции дает наряду с основным зондом довольно приличное количество короткого. Я не уверен, что это неспецифика и думал проверить оба бенда как зонды по отдельности.. ну так может проще вырезать и выделить в чистом виде нужную полосу ПЦР матрицы для транскрипции, нежели чем ломать голову над разделением продууктов ин витро транскрипции? и делать зонды независимо с ккаждой полосы полосы кДН матрицы? |
Serg900 Участник |
|
ksm Постоянный участник |
у вас много РНК кстати? Сообщение было отредактировано ksm - 18.10.2016 19:04 |
Serg900 Участник |
|
Serg900 Участник |
|
nigoal123 IP-штамп: frAWeMdOsBSXM гость |
organic traffic from |
Guest IP-штамп: frAWeMdOsBSXM гость |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |