Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Белковый форез -- Что посоветуете? --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! KisA
Постоянный участник
SPb+Helsinki



 прочитанное сообщение 05.07.2006 21:03     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Прошу совета у биохимиков.
Мне было необходимо разогнать в ПААГ катионные пептиды с массой от 5 до 16 кДа. По аналогии взял методику разгонки гистонов Spiker, 1980 (ранее я сам белков вообще не гонял):
Основной рабочий гель — 15%-го ПААГ в 0,9 М СН3СООН с 2,5 М мочевины. Над ним полимеризована полоска формирующего геля: 7,5% ПААГ в 0,375 М СН3СООNa с 2,5 М мочевины. Электрофорез при повышенном напряжении — за 1 — 2 ч. ЭФ буфером служил 5%-ный (0,9 М) раствор уксусной кислоты с добавлением 2,5 М мочевины.
Форез гнал 1 ч при 160 В (длина геля 16 см). А результаты совсем не очень teapot.gif - пробы прошли только 1 см (даже в разделяющий гель не вошли).

Я прошу не бить сапогами за глупый вопрос - в чем я был не прав? Какое напряжение в данном случае можно считать "повышенным" - я вообще боялся, что пробы уйдут? Может другую методику для катионных пептидов посоветуете?

Заранее спасибо.
guest: ммм
IP-штамп: frHvyGooYAnV2
гость



 прочитанное сообщение 06.07.2006 10:54     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Я уточню, но вроде концентрации высоковаты сейчас по памяти не скажу буферную систему. И маркерную краску вы использовали или нет если использовали, то какую и сколько она пробежала. Если не использовали, то рекомендую метиленовый синий или бриллиантовый зеленый.
Участник оффлайн! Utcn
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 06.07.2006 11:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Подозрительно высокая конц-ия ацетата Na в "формирующем" геле. Непонятно, что он там такое будет формировать... Я бы его выкинул, и наносил в 6 М мочевине 0.1 М уксусной прямо на разделяющий гель. Гнать надо, по воспоминаниям юности, довольно долго при 200 В, не давая гелю нагреваться > 40 C. Мочевина в running buffer не обязательна, можно просто 0.9 М уксусная. Для лучшего разрешения можно добавить в гель Тритон Х100 - 0.1-0.5%, но это для гистонов...
guest: ммм
IP-штамп: frHvyGooYAnV2
гость



 прочитанное сообщение 07.07.2006 10:49     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Значитца так<c>,
- верхний гель 63мМ калий ацетатного, прости Господи, буфера с рН=6.8
-разделяющий гель 0.375М калий ацетатного буфера с рН=4.3 -это практически чистый уксус.
-ЭБ 0.35 моль глицин или аланин, 140мМ уксус, рН приблизительно 4.5(подводить не надо)

Буферы все готовить на Ледяной уксусной подтитровкой КОН, кроме ЭБ(это просто смесь указанных количеств)
Мочевину в ЭБ можно и не добавлять если она не полное Г, то из геля никуда не денется, а она хоть и дешевая, а на зря ее переводить не надо.

Метода взята из старого мануала Фармации(она же Хойфер, она же Амершам, она же общая электрическая smile.gif )
Участник оффлайн! A Chemist
Постоянный участник
Минск



 прочитанное сообщение 07.07.2006 11:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Подозрительно высокая конц-ия ацетата Na в "формирующем" геле.

Не "подозрительно", а катастрофически. Скорее всего, Вы проводили форез ацетат-ионов. А если хотите форезить белки, снижайте концентрации буферов в 20-50 раз.
Участник оффлайн! KisA
Постоянный участник
SPb+Helsinki



 прочитанное сообщение 07.07.2006 12:37     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Спасибо, люди добрые! Помогли чайнику!
smile.gif teapot.gif
Участник оффлайн! Polika

Kuopio



 прочитанное сообщение 11.07.2006 15:33     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

[Я бы его выкинул, и наносил в 6 М мочевине 0.1 М уксусной прямо на разделяющий гель.
[/quote]

Т е состав разделяющего геля оставить без изменений, а 6М мочевину с 0,1М уксусной использовать как буфер для нанесения, это имеется в виду? teapot.gif
Участник оффлайн! Utcn
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.07.2006 13:43     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Именно так.
Участник оффлайн! Polika

Kuopio



 прочитанное сообщение 13.07.2006 19:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Урра! Спасибо!! Получилось!!!
nigoal123
IP-штамп: fr4iy3.kHUw02
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  04.12.2021 11:37     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

For an article to work แทงบอล it has to be engaging enough สล็อต123 to read all the way through. nigoal123 the data available 123game from existing studies. คาสิโนออนไลน์ Remember how bored the examiner

must be after reading fifty exam papers. หวย Make it easier for them to get เว็บ 123 a good impression about your writing เว็บ 123 them to get a good impression แทงบอลออนไลน์ by entertaining them. สล็อต123 real life or made up examples, or make up quotes.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 09:34
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft