Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Ёлкин IP-штамп: frHqxY1nyEVJo гость |
Для проверки делал следующее: - рестрикция одинаковых количеств вектора pET28a NdeI, XhoI, KpnI в своих буферах (к слову сказать, KpnI еще 1991 года, но работает без проблем). - фенол, переосаждение - форез (три одинаковых линейных молекулы, никакого шмера) - лигирование на себя - еще раз фенол - форез (после лигирования векторы, порезанные XhoI и KpnI переходят в кольцевую форму, NdeI - нет. Нуклеаза его ест, что ли?) Форум читал, в сиквенсе MCS все сайты на месте. Как же эта рестриктаза вообще работает? Или вообще от нее отказаться? |
Ольга Л. |
|
guestA Постоянный участник |
На конференции люди из Fermentas рассказывали, что они применяют к выпускаемым ими рестриктазам супер-строгий контроль чистоты, и по их тестам некоторые рестриктазы других производителей (NEB, Roche и др.) выходят "грязными", с примесями ДНКаз в частности. Они даже слайды показывали, какие именно рестриктазы каких именно фирм не прошли их тестов на чистоту, но я не запомнила конкретных названий. Возможно, вам просто попалась не совсем удачная фасовка NdeI. |
Ёлкин IP-штамп: frHqxY1nyEVJo гость |
|
gostya_ IP-штамп: fr/VzflylhA.g гость |
|
gostya_ IP-штамп: fr/VzflylhA.g гость |
|
Guest IP-штамп: frHqxY1nyEVJo гость |
(gostya_ @ 14.07.2006 05:18) Это был контроль; в одном случае мне этот ATG в сайте очень нужен, вот и проверяю, как оно... А на двунуклеотидных выступах эффективность лигирования не сильно отличается от четверок. Вот, говорят, с однонуклеотидными - есть проблема. |
curious67 Постоянный участник |
где это у Not I 6 букв- нормальные 4- посмотрите в каталоге!!!!!!!! |
curious67 Постоянный участник |
|
nigoal123 IP-штамп: fr4iy3.kHUw02 гость |
must be after reading fifty exam papers. |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |