Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Опять про "легендарную" NdeI
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Ёлкин
IP-штамп: frHqxY1nyEVJo
гость



 прочитанное сообщение 13.07.2006 16:24     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Бодаемся с вектором pET28a. NdeI (Roche, 2003) его благополучно режет, но обратно на себя вектор не лигируется.

Для проверки делал следующее:
- рестрикция одинаковых количеств вектора pET28a NdeI, XhoI, KpnI в своих буферах (к слову сказать, KpnI еще 1991 года, но работает без проблем).
- фенол, переосаждение
- форез (три одинаковых линейных молекулы, никакого шмера)
- лигирование на себя
- еще раз фенол
- форез (после лигирования векторы, порезанные XhoI и KpnI переходят в кольцевую форму, NdeI - нет. Нуклеаза его ест, что ли?)

Форум читал, в сиквенсе MCS все сайты на месте.

Как же эта рестриктаза вообще работает? Или вообще от нее отказаться?
Участник оффлайн! Ольга Л.




 прочитанное сообщение 13.07.2006 16:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

А мы Ферментасовской Nde пользуемся, не сказать что суперэффективно, но лигируется без проблем.
Участник оффлайн! guestA
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 13.07.2006 18:28     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Буквально недавно использовала NdeI для клонирования по этому сайту в pET. Но рестриктаза у меня от Fermentas, и она прекрасно сработала, все залигировалось, нужные клоны получены. yes.gif
На конференции люди из Fermentas рассказывали, что они применяют к выпускаемым ими рестриктазам супер-строгий контроль чистоты, и по их тестам некоторые рестриктазы других производителей (NEB, Roche и др.) выходят "грязными", с примесями ДНКаз в частности. Они даже слайды показывали, какие именно рестриктазы каких именно фирм не прошли их тестов на чистоту, но я не запомнила конкретных названий. smile.gif
Возможно, вам просто попалась не совсем удачная фасовка NdeI.
Ёлкин
IP-штамп: frHqxY1nyEVJo
гость



 прочитанное сообщение 13.07.2006 19:01     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Угу, работает, значит... Попрошу, пожалуй, у соседей заведомо рабочего фермента на одну рестрикцию - вдруг действительно грязь?
gostya_
IP-штамп: fr/VzflylhA.g
гость



 прочитанное сообщение 14.07.2006 05:18     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

а зачем вам вектор обратно на себя confused.gif с NdeI проблема в том, что у нее две буквы на липком конце торчат, у "нормальных" ферментов - 4, а у NotI - 6, и все GC, это моя любовь shuffle.gif но не все естественно имеют последовательность ATG, так что... либо то либо се
gostya_
IP-штамп: fr/VzflylhA.g
гость



 прочитанное сообщение 14.07.2006 05:21     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

упс... у NotI тоже 4, но они как 6 wink.gif
Guest
IP-штамп: frHqxY1nyEVJo
гость



 прочитанное сообщение 14.07.2006 11:22     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

(gostya_ @ 14.07.2006 05:18)
Ссылка на исходное сообщение  а зачем вам вектор обратно на себя  confused.gif


Это был контроль; в одном случае мне этот ATG в сайте очень нужен, вот и проверяю, как оно...
А на двунуклеотидных выступах эффективность лигирования не сильно отличается от четверок. Вот, говорят, с однонуклеотидными - есть проблема.
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 14.07.2006 11:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

с NdeI проблема в том, что у нее две буквы на липком конце торчат, у "нормальных" ферментов - 4, а у NotI - 6, и все GC, это моя любовь

где это у Not I 6 букв- нормальные 4- посмотрите в каталоге!!!!!!!!
Участник оффлайн! curious67
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 14.07.2006 11:43     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

4 как 6? Т.е. стоит рубь 20, а пьется как за рубь 40, так что ль? Странные у Вас понятия
nigoal123
IP-штамп: fr4iy3.kHUw02
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  04.12.2021 11:37     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

For an article to work แทงบอล it has to be engaging enough สล็อต123 to read all the way through. nigoal123 the data available 123game from existing studies. คาสิโนออนไลน์ Remember how bored the examiner

must be after reading fifty exam papers. หวย Make it easier for them to get เว็บ 123 a good impression about your writing เว็บ 123 them to get a good impression แทงบอลออนไลน์ by entertaining them. สล็อต123 real life or made up examples, or make up quotes.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 06:31
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft