Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* silver staining проблемка
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Clouds




 прочитанное сообщение 22.09.2005 11:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Подскажите, что не так?
Приобрели кит для silver staining (Amersham Biosciences). В инструкции к киту написано, что его можно использовать для окраски гелей содержащих SDS и мочевину. При окрашивании этим китов геля содержащего SDS и мочевину получили низкую чувствительность окрашивания: 100нг против обещаных 0,2-0,6нг.
Методика кита основана на статье Heukeshoven J., Demick R. Electrophoresis 6(1985):
fixation:этанол-уксусная - 30 мин;
sensitizing: этанол, глютаральдегид тиосульфат натрия, ацетат натрия - 30мин; washing: mQ вода3*5 мин;
silver reaction: нитрат серебра, формальдегид - 20 мин;
washing:mQ вода 2*1 мин;
developing: карбонат натрия, формальдегид - 2-5 мин (я держала намного больше, чтоб хоть что-то проявилось).
Длительная отмывка геля от SDS не проводилась т.к. об этом в ките ничего небыло написано. Сама окраска проводилась строго по иструкции если не считать увеличения времени проявки.
Как можно увеличить чувствительность окраски?
Участник оффлайн! Oleg Klychnikov
Постоянный участник
Moscow/Amsterdam->Leiden



 прочитанное сообщение 22.09.2005 12:25     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

попробуйте перейти на другой формальдегид... и тиосульфат
обычно, из китов мы пользовали только серебро...
все остальное выбрасывали...
а 100 нг Вы можете и на кумасях увидеть легко

Сообщение было отредактировано Oleg Klychnikov - 22.09.2005 12:26
Участник оффлайн! Oleg Klychnikov
Постоянный участник
Moscow/Amsterdam->Leiden



 прочитанное сообщение 22.09.2005 12:28     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

и, кстати, больше я люблю ацетоновый метод...
ИМХО быстрее и воспроизводимей... поищите здесь
он уже обсуждался
де-факто, однин из лучших методов, совместимых
с МС - это метод Шевченко и Со
Shevchenko, A et al. Anal Chem. 1996 68(5): 850-8

Сообщение было отредактировано Oleg Klychnikov - 22.09.2005 12:46
Участник оффлайн! Comrad600
Участник



 прочитанное сообщение 27.09.2005 23:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Мы отказались от серебра. больно трудоёмко, не предсказуемо и несравнимо. передержал пол минуты и все "засветилось".
Мы перешли на Colloidaл blue с очень очень долгой окраской на шейкере (около 4-5 суток.) Дефиниция нас устроила (и чувствительность) (это 2д гели)
Участник оффлайн! imers
Участник
Москва



 прочитанное сообщение 28.09.2005 02:18     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Попробуйте отмывать после серебра перед проявкой гораздо меньше - не по одной минуте, а секунд по 10 максимум. Чтобы это быстро сделать - приготовьте 2 чистые кюветы с водой и 1 - с содой, и гель быстро перебрасывайте.
Чтобы избежать быстрого почернения геля при проявке - используйте _очень_холодный_ раствор соды (можно даже с кусочками льда), в крайнем случае - свежевынутый с +4. Да, а тиосульфат в р-р соды Вы разве не добавляете?
Участник оффлайн! Derro
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 28.09.2005 10:51     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

И еще попробуйте исключить уксусную кислоту на стадии fixation. Если гель толстый (1 мм), то в серебре можно подольше подержать. И как уже было сказано, меньшее время отмывки после серебра.
Участник оффлайн! Masha11




 прочитанное сообщение 09.08.2006 20:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

и зачем покупать кит??? можно все растворчики приготовить самим. в процессе окрашивания гелей. а гели вы потом не трипсинолизируете?
Участник оффлайн! Mac-1
Постоянный участник
оттуда



 прочитанное сообщение 10.08.2006 10:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

Судя по приведенному времени обработки (суммарно - чуть больше часа со всеми помывками), эта пропись для проявления гелей для FastSystem. Толщина таких гелей - 0.1 мм Если у вас гели потолще, то сами понимаете...
Попробуйте увеличить все сроки как минимум в 2 раза. Сенсибилизацию - не менее 1 часа, нитрат серебра - 30-40 мин (на холоду в холодном Ag). Помывки после сенсибилизации по 10 мин, причем воды - не менее 200 мл, и не 3 раза, а раз 5-6 итд
А с серебром, действительно плохо, самый больший "грех" у него - нелинейность окраски (нет прямой зависмости между количеством белка и интенсивностью окраски). из коллоидного Кумасси самый лучший, что я пробовал - Пирсовский Code Blue, он намного чувствительнее, чем, например, коллоидный Кумасси БайоРада, особенно с последующей выдержкой в уксусе.
nigoal123
IP-штамп: fr4iy3.kHUw02
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  04.12.2021 11:36     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

For an article to work แทงบอล it has to be engaging enough สล็อต123 to read all the way through. nigoal123 the data available 123game from existing studies. คาสิโนออนไลน์ Remember how bored the examiner

must be after reading fifty exam papers. หวย Make it easier for them to get เว็บ 123 a good impression about your writing เว็บ 123 them to get a good impression แทงบอลออนไลน์ by entertaining them. สล็อต123 real life or made up examples, or make up quotes.

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 19.03.24 14:48
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft