molbiol.ru -> T-cells: полилизиновая подложка

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* T-cells: полилизиновая подложка -- как влияет на состояние клеток? --

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Olgitta
Участник

04.07.2007 16:38

URL #1

Уважаемые специалисты,
помогите пожалуйста, в решении следующей задачи:
мы хотим работать с Т-клетками (или полным пулом ПМНК, но интересуют, в первую очередь, именно Т-клетки), флуор. микроскопия, смотреть, например, кальциевый ответ. Вопрос: как клетки относятся к тому, что их сажают например, на полилизин? Может ли это приводить к их активации или наоборот? И вообще, грамотно ли изучать функциональное состояние суспензионных культур таким образом?
Заранее большое спасибо.

Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum

04.07.2007 17:28

URL #2

Лучше- без подложки.

Cells-nnm
Постоянный участник

05.07.2007 01:10

URL #3

you don't need poly-L-lysin in this case (suspension culture)
don't cover plastic

Olgitta
Участник

05.07.2007 17:56

URL #4

Господа, я не сильна в микроскопии, но как работать с суспензией клеток? Они же уплывут из фокуса! В прямом смысле этого слова!
Внесение любого лиганда - перемешивание. Или я чего-то не догоняю?
Это же не проточник!

pchelinka
Участник

06.07.2007 18:34

URL #5

для этого нужны предметное и покровное стекла. (не знаю насколько, конечно, все изменилось за последнюю пятилетку)

капните каплю из свежеразмешанной суспенизии на предметное стекло и накройте покровным, тока большую каплю не надо, а то покровное тоже будет плавать - и под микроскоп.
если ничего такого не имеете, то сходите к клеточникам, покажут, я думаю.
лучше конечно к изначально притертому покровному стеклу (к предметному) каплю добавлять , чтобы не было избытка жидкости, который придется удалять фильровальной бумагой, типа притираете сначала покровное к предметному, а потом на край капельку и входит туда ровно столько сколько нужно.

Olgitta
Участник

06.07.2007 21:41

URL #6

Покровные стекла - это чудесно. А потом мне необходимо добавить лиганд и посмотреть, как на него отвечают клетки. Например, кинетику кальциевого сигнала при активации TCR. Время развития ответа - несколько минут. А для некоторых веществ - деятков секунд. И???

V
Участник
N-sk

06.07.2007 22:18

URL #7

А к проточнику доступа нет? Такие вещи хорошо проточкой смотреть. Вы попробуйте поискать методики на Molecular Probes, там много чего полезного найти можно

pchelinka
Участник

06.07.2007 23:54

URL #8

(Olgitta @ 06.07.2007 22:41)

не сразу поняла, что кинетику хотите.

guest: .
IP-штамп: frwImFNi3mYdM
гость

07.07.2007 11:51

URL #9

Наверное, в вашем случае можно сажать на полилизин.
http://www.seas.upenn.edu/~chenlab/pdf/49_...donBBRC2005.pdf

Dayadya FACSer s naladonnka
IP-штамп: frfKI84B9NWII
гость

07.07.2007 13:28

URL #10

Никуда сажат не надо.
Берется кит , ставится ехперимент- и все меряется на проточном цытометре. Кинетику он мерит позволяет.

А извраты с визуалным контролем и микроскопом- фтопку!

guest: .
IP-штамп: frwImFNi3mYdM
гость

07.07.2007 15:55

URL #11

Согласен с тезисом:
"А извраты с визуалным контролем и микроскопом- фтопку!"

Я против измерения количества по флуоресценции на микроскопе, правильно это сделать сложнее чем на проточном цитометре. Т.е. если вся задача состоит в наблюдении по флуорисценции ответа клеток на стимул, то микроскоп использовать не стоит. Но задача полностью не описана, могут быть варианты.

Olgitta
Участник

07.07.2007 22:09

URL #12

Господа, спасибо всем за ответы и советы. Я вобщем неплохо разбираюсь в проточной цитометрии. Замечательная вещь. Когда надо померить среднее по больнице. Но мне в данной задаче нужна именно микроскопия. Надеялась, что это делает кто-нибудь... :(

Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum

07.07.2007 22:59

URL #13

(Olgitta @ 07.07.2007 20:09)

Господа, спасибо всем за ответы и советы. Я вобщем неплохо разбираюсь в проточной цитометрии. Замечательная вещь. Когда надо померить среднее по больнице.

Раз Вы так считаете- значит Вы совершенно не разбираетесь в проточной цитометрии. Ну, может быть на уровне "CD4-CD8" типирования, разве что....

pchelinka
Участник

08.07.2007 08:01

URL #14

если из 1000 клеток 10% оказались в суб.G1, к примеру, 50% в G1, 30% в S фазе, а остальные в G2M, то какое будет .... среднее??

(сорьки, я не очень хорошо в проточке разбираюсь

)

Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum

08.07.2007 13:24

URL #15

Что значит- среднее?- Просто 3 сабсета есть.

Olgitta
Участник

08.07.2007 14:05

URL #16

Я, конечно, не гений цитометрии, не отношусь к числу людей, которые всю жизнь только этим и занимаются, ничего кроме своего любимого BD не видя. Тем не менее, кинетику на проточнике я мерила. Если даже отвлечься от относительно абстрактных для большинства биологов представлений о том, что 2 одинаковых клеток не бывает, и каждая отвечает по-своему, есть, на мой взгляд, и чисто технические проблемы. Ну самая простая: каково минимальное время, на Ваш взгляд, от момента, пока вы внесли свой лиганд в пробирку, перемешали, сунули в прибор, и начали мерить кинетку?
Если у Вас желание помочь, а не наезжать, просветите меня, пожалуйста!

А если эта проблема не решается, то возвращаюсь к вопросу о полилизине.

Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum

08.07.2007 17:23

URL #17

(Olgitta @ 08.07.2007 12:05)

Ну самая простая: каково минимальное время, на Ваш взгляд, от момента, пока вы внесли свой лиганд в пробирку, перемешали, сунули в прибор, и начали мерить кинетку?

2-3 cекунды

pchelinka
Участник

08.07.2007 18:37

URL #18

(Дядя ФАКСер @ 08.07.2007 14:24)

Что значит- среднее?- Просто 3 сабсета есть.

как пить дать

( задумалась на "средним по больнице", ну не важно вобщем)

Оlgittа, по поводу вашего вопроса о минимальном времени для внесения лиганда, его перемешивания и начала замера кинетики, а есть ли возможность поставить пробирку (кювету) в прибор, а потом только в нее капнуть лиганд т.е. добавлять прямо в приборе? перемешать там же? ну то есть я не знаю на чем именно вы хотите мерить. И не уверена, есть возможность магнитную мешалку на дно бросить - перемешивать самому не придется таким образом.

Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum

08.07.2007 20:32

URL #19

(pchelinka @ 08.07.2007 16:37)

а есть ли возможность поставить пробирку (кювету) в прибор, а потом только в нее капнуть лиганд т.е. добавлять прямо в приборе? перемешать там же? ну то есть я не знаю на чем именно вы хотите мерить. И не уверена, есть возможность магнитную мешалку на дно бросить - перемешивать самому не придется таким образом.

1) В пробирку

Если капнуть не то во флоу-чамбер - значит разобрать прибор

Да и в пробирку можно капнуть только до ее установки ( так как герметизируется при заборе образца - так уж устроен тракт проточный)
2) Перемешать- без проблем.Хотя - от модели цитометра зависит
3) магнитная мешалка- не пойдет

Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость

09.07.2007 07:27

URL #20

(Olgitta @ 07.07.2007 22:09)

Вам бы к Говарду Шапиро , Збигневу или П.Робинсону в лапки

они б вам показали "болъницу"

Поблагодарили (1): Дядя ФАКСер

Guest
IP-штамп: fr45uHVgO7WZ2
гость

09.07.2007 07:39

URL #21

(Olgitta @ 07.07.2007 22:09)

Тут у меня проблемка человечи хромосомки посортировать на БД старплюсе

типа нубер 9 хромосому в пробирочку

http://www.pubmedcentral.nih.gov/picrender...47&blobtype=pdf

Olgitta
Участник

09.07.2007 11:29

URL #22

2 мистер Факсер:
Вижу 2 варианта:
1) мы с Вами явно на разных моделях проточников работали
2) у Вас очень бысто руки двигаются.
Я вроде не совсем тормоз, но в 2-3- секунды ни при каких раскладах уложится не получается

Дядя ФАКСер
Постоянный участник
Nothern Maccaronia, Ticinum

11.07.2007 10:18

URL #23

(Olgitta @ 09.07.2007 09:29)

1) Я работаю на BD Canto II (в основном). А так же на - FACScalibur
2) Да нормально руки двигаются: капнул, щелкнул- вставил- включил забор

nigoal123
IP-штамп: frAafNuYANUh2
гость

21.05.2022 07:31

URL #24

Writing an article takes บาคาร่าออนไลน์ a lot of effort on the slot xo side of the writer. 11hilo Content writers สล็อต freelance writers and 123GOAL copywriters are people

who have mastered the nigoal without which they ลิงค์รับทรัพย์ would not be able to พ ริ ต ตี้ เกม มิ่ง content for social media ราคา บอล make their mark as Hotgraph a writer of any kind.

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.