Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Химерныe протеины -- вопрос по синтезу --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Alexus




 прочитанное сообщение 08.01.2018 00:55     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование
Информация
Доброго времени суток, коллеги. Так случилось, что я ни разу не молекулярный биолог (врач-нефролог), но в рамках написания  PhD работаю в лаборатории, как это часто бывает. Лаборатория в Германии, и порядки работы в ней несколько отличаются от того, с чем я раньше имел дело. Мне нужна консультация знающих людей. Ситуация следующая: есть два белка, их нужно соединить в один химерный, при этом естественно по возможности сохраняя активность обеих частей белка. Теперь вопросы от чайника в этой области: первый белок, RANKL, существует как тример, фиксированный на мембране и в виде секретируемой формы. изначально я планирую работать с секретируемой, так как это мономер и молекула значительно меньше. Кто может подсказать - имеет ли смысл цеплять полную версию протеина (тот, что тримеризуется в активном состоянии) и будет ли происходить нормальный фолдинг? Если да, то второй протеин надо присоединять с  NH2- конца? Или это в принципе идея не очень. Далее вопрос по линкерам - кто какие использует, или это чисто эмпирический путь подбора? Изучил литературу по этой теме, решил остановиться на ригидных альфа-спиральных линкерах (может, есть лучше?) остался вопрос по поводу его размера (информация у разных авторов сильно отличается - от 2 аминокислотных остатков до 20 и более). Был бы сильно благодарен за любые источники по этой теме (желательно книги на русском/англ, на немецком тяжко такое неспециалисту переваривать), также интересует софт, которым вы пользуетесь при дизайне протеинов. Исходные аминокислотные последовательности беру на унипроте, но вот как грамотно дальше с этим работать? надо ли загружать эту последовательность в какую-либо программу, или достаточно ограничиться тем, что дает сайт + модификация с учетом всяких радостей вроде сигнальных последовательностей и  KDEL-хвостов? надо ли добавлять в последовательность консенсусы Козак, или это сделает фирма, у которой заказываются плазмиды? Сорри за сумбур, буду благодарен за помощь.

ЗЫ как нашел этот форум - немцы как-то обсуждали, что у русских есть хороший ресурс по молекулярной биологии, только он на русском и трудно с него информацию вытянуть.

Сообщение было отредактировано Alexus - 08.01.2018 00:58
Участник оффлайн! MMM
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.01.2018 05:31     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

-- Кто может подсказать - имеет ли смысл цеплять полную версию протеина(тот, что тримеризуется в активном состоянии) и будет ли происходить нормальный фолдинг?
Во-первых в первую очередь нормальность фолдинга зависит от того в каком организме происходит синтез белка. Затем уже она зависит от свойств самого белка чем больше размер белка и больше в нем гидрофобных участков тем больше риск проблем с фолдингом
Во-вторых какая версия белка предпочтительна определяется логикой исследования, т.е. зависит от его целей и задач, с другой стороны синтез мембранных белков и олигомеризующихся белков в неродственных организмах почти прямой путь к проблемам с растворимостью и неправильным фолдингом белка.
Из выше сказанного следует, что подсказать вам может, разве что господь бог.
Линкер это дело вкуса и во многом определяется третичной структурой обоих белков и их влиянием друг на друга. Предсказать что-то конкретное можно, только если уже был опыт с этими или близкородственными белками. Любой софт будет выдавать информацию с высоким рейтингом полезности только если он использует базу данных, в которой уже есть информация о конструкциях с вашим белком или близкородственным белком, в противном случае надежность предсказаний не высокая

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): Alexus
Участник оффлайн! Gariaev
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 08.01.2018 08:35     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Как получаете эти белки?
Участник оффлайн! Alexus




 прочитанное сообщение 08.01.2018 12:39     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

(MMM @ 08.01.2018 06:31)
Ссылка на исходное сообщение  -- Кто может подсказать - имеет ли смысл цеплять полную версию протеина(тот, что тримеризуется в активном состоянии) и будет ли происходить нормальный фолдинг?
Во-первых в первую очередь нормальность фолдинга зависит от того в каком организме происходит синтез белка. Затем уже она зависит от свойств самого белка чем больше размер белка и больше в нем гидрофобных участков тем больше риск проблем с фолдингом
Во-вторых какая версия белка предпочтительна определяется логикой исследования, т.е. зависит от его целей и задач, с другой стороны синтез мембранных белков и олигомеризующихся белков в неродственных организмах почти прямой путь к проблемам с растворимостью и неправильным фолдингом белка.
Из выше сказанного следует, что подсказать вам может, разве что господь бог.
Линкер это дело вкуса и во многом определяется третичной структурой обоих белков и их влиянием друг на друга. Предсказать что-то конкретное можно, только если уже был опыт с этими или близкородственными белками. Любой софт будет выдавать информацию с высоким рейтингом полезности только если он использует базу данных, в которой уже есть информация о конструкциях с вашим белком или близкородственным белком, в противном случае надежность предсказаний не высокая

Спасибо за ответ. Синтез белка будет осуществляться в клетках яичника китайского хомячка (СНО), соответственно брал последовательности с пометкой murine, проблем с фолдингом нехимерных форм по идее возникнуть не должно. Раз с линкерами подгадать не получается, придется видимо пробовать различные комбинации. Еще такой вопрос - если в обоих белках присутствует сигнальная последовательность, то ее из второго протеина (который на СООН-конце гибрида) следует вырезать, верно я себе это представляю?

Сообщение было отредактировано Alexus - 08.01.2018 16:48
Участник оффлайн! Alexus




 прочитанное сообщение 08.01.2018 12:47     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

(Gariaev @ 08.01.2018 09:35)
Ссылка на исходное сообщение  Как получаете эти белки?

Планирую заказать плазмиду у компании, с HIS-тэгом на конце последовательности (коллеги говорят попробовать cleavable версию - чтобы исключить влияние на конечный продукт после пурификации, не имею опыта утверждать, влияет ли этот маленький аминокислотный мотив на активность гибридного белка). Далее плазмида амплифицируется в трансформированной хемокомпетентной колонии кишечной палочки, затем липофектамином трансфецируются клетки СНО и далее синтез идет в такой транзиентной линии. По протоколу кажись были энхансеры на этом этапе, еще не пробовал ускоренный вариант. Потом очистка, гель, блот и специфические тесты на активность каждой части гибрида.
Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  20.11.2021 18:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

https://wanelo.co/replicarolexwatches
https://musescore.com/fakerolexwatches
https://www.racked.com/users/Replicarolexwatches
https://sketchfab.com/Rolexrelicawatches
http://www.video-bookmark.com/bookmark/433...eplica-watches/
https://www.slideserve.com/ReplicawatchesUK...pt-presentation
https://www.theverge.com/users/Replicarolexwatches
https://www.yumpu.com/en/document/read/6532...lica-watches-uk
https://online.flippingbook.com/view/152275247/
https://www.instapaper.com/p/8767342
https://www.bigblueview.com/users/Replicarolexwatches
https://weheartit.com/watcheshutuk
https://sites.google.com/view/replicarolexwatches24/home
https://www.indiehackers.com/post/hints-on-...atch-113aef73a9
http://replicawatchesuk.esportsify.com/for...ica-rolex-watch

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 18.04.24 03:17
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft