Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Alexus |
ЗЫ как нашел этот форум - немцы как-то обсуждали, что у русских есть хороший ресурс по молекулярной биологии, только он на русском и трудно с него информацию вытянуть. Сообщение было отредактировано Alexus - 08.01.2018 00:58 |
MMM Постоянный участник |
Во-первых в первую очередь нормальность фолдинга зависит от того в каком организме происходит синтез белка. Затем уже она зависит от свойств самого белка чем больше размер белка и больше в нем гидрофобных участков тем больше риск проблем с фолдингом Во-вторых какая версия белка предпочтительна определяется логикой исследования, т.е. зависит от его целей и задач, с другой стороны синтез мембранных белков и олигомеризующихся белков в неродственных организмах почти прямой путь к проблемам с растворимостью и неправильным фолдингом белка. Из выше сказанного следует, что подсказать вам может, разве что господь бог. Линкер это дело вкуса и во многом определяется третичной структурой обоих белков и их влиянием друг на друга. Предсказать что-то конкретное можно, только если уже был опыт с этими или близкородственными белками. Любой софт будет выдавать информацию с высоким рейтингом полезности только если он использует базу данных, в которой уже есть информация о конструкциях с вашим белком или близкородственным белком, в противном случае надежность предсказаний не высокая
|
Gariaev Постоянный участник |
|
Alexus |
(MMM @ 08.01.2018 06:31) -- Кто может подсказать - имеет ли смысл цеплять полную версию протеина(тот, что тримеризуется в активном состоянии) и будет ли происходить нормальный фолдинг? Во-первых в первую очередь нормальность фолдинга зависит от того в каком организме происходит синтез белка. Затем уже она зависит от свойств самого белка чем больше размер белка и больше в нем гидрофобных участков тем больше риск проблем с фолдингом Во-вторых какая версия белка предпочтительна определяется логикой исследования, т.е. зависит от его целей и задач, с другой стороны синтез мембранных белков и олигомеризующихся белков в неродственных организмах почти прямой путь к проблемам с растворимостью и неправильным фолдингом белка. Из выше сказанного следует, что подсказать вам может, разве что господь бог. Линкер это дело вкуса и во многом определяется третичной структурой обоих белков и их влиянием друг на друга. Предсказать что-то конкретное можно, только если уже был опыт с этими или близкородственными белками. Любой софт будет выдавать информацию с высоким рейтингом полезности только если он использует базу данных, в которой уже есть информация о конструкциях с вашим белком или близкородственным белком, в противном случае надежность предсказаний не высокая Спасибо за ответ. Синтез белка будет осуществляться в клетках яичника китайского хомячка (СНО), соответственно брал последовательности с пометкой murine, проблем с фолдингом нехимерных форм по идее возникнуть не должно. Раз с линкерами подгадать не получается, придется видимо пробовать различные комбинации. Еще такой вопрос - если в обоих белках присутствует сигнальная последовательность, то ее из второго протеина (который на СООН-конце гибрида) следует вырезать, верно я себе это представляю? Сообщение было отредактировано Alexus - 08.01.2018 16:48 |
Alexus |
(Gariaev @ 08.01.2018 09:35) Планирую заказать плазмиду у компании, с HIS-тэгом на конце последовательности (коллеги говорят попробовать cleavable версию - чтобы исключить влияние на конечный продукт после пурификации, не имею опыта утверждать, влияет ли этот маленький аминокислотный мотив на активность гибридного белка). Далее плазмида амплифицируется в трансформированной хемокомпетентной колонии кишечной палочки, затем липофектамином трансфецируются клетки СНО и далее синтез идет в такой транзиентной линии. По протоколу кажись были энхансеры на этом этапе, еще не пробовал ускоренный вариант. Потом очистка, гель, блот и специфические тесты на активность каждой части гибрида. |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |