Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Low и High Stringency Buffers
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Olezhek
Постоянный участник
Tsukuba, Japan/КФУ, РФ



 прочитанное сообщение 15.01.2003 09:23     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Просветите пожалуйста в чем суть отмывки мембраны после гибридизации для Саузерна и Нозерна в этих буферах. Именно интересно как они неспецифичные сигналы смывают..

Суть в том что я как-то передержал в High.... час целый, и все банды смылись кроме одной, почему-то
:roll:

Спасибо!
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 15.01.2003 18:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Очень просто. High буфер - с низкой ионной силой, температура плавления ДНК понижается, проба отмывается от фрагментов с
невысокой гомологией, остается только там, где гомология высока.
Так что у Вас все получилось как надо. Если хотите выявить фрагменты с низкой гомологией, возьмите Low (там ионная сила повыше). А можете и просто варьировать температуру отмывки без изменеия состава буферов. Возьмете погорячее - отмоете почти все, похолоднее - выявите даже низкогомологичные фрагменты.
Кстати, если Вы используете кит, то варьирование
High-Low может определяться и не ионной силой, а какой-нибудь мочевиной.
Участник оффлайн! win
Постоянный участник
RU



 прочитанное сообщение 15.01.2003 19:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Привет.
Смысл, вероятно, в том, что чем выше концентрация соли в буффере, тем стабильнее дуплексы. Ну и соответственно, чем ближе раствор к дистилляту, тем легче эти дуплексы диссоциируют. Т.о. отмывка в более жёстких (чем гибридизация) условиях, т.е. в менее концентрированном солевом растворе позволяет смыть неспецифично (слабо) свясавшиеся молекулы зонда. Ну, например, если помыть в воде - смоется, видимо, все.
Советую почитать:
http://www.biochem.roche.com/fst/products....iochemistry.cfm
Я, кстати, занимаюсь темже и имею ряд встечных вопросов.
Не хочется загружать форум. Может, обсудим mailom
(я: malekanastassia@hotmail.com)


[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 15.01.2003 19:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Уважаемая Win,
я могу Вам написать, но чем Вам не нравится форум?
Не переживайте - он специально для нас создан (спасибо авторам),
а если обсуждать по e-mail, то рискуем принять ошибочное мнение.
А так - товарищи поправят, если что не так.
Участник оффлайн! win
Постоянный участник
RU



 прочитанное сообщение 15.01.2003 19:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Дорогой Guest.
Меня слегка насторожило лишь то, что мои вопросы не будут соответствовать теме, которую заявил Olezhek, и детальное обсуждение обычно сводится к обмену протоколами... Хотя, конечно, Вы правы. Итак.
Я пытаюсь проделать RNA-RNA in situ hybridisation on tissue. И основной проблемой оказалось правильно подготовить срезы. После нанесения на стекло и перед фиксацией их принято сушить около часа при комнатной Т. И я сильно подозреваю, что в это время все RNA became digested by RNAse . Затем, условия фиксации...тут вообщe сотни вариантов...Хочется понять, есть лы какоы-нибудь исходний, базисний способ. И если есть - каков он.


[Текст переведён с транслита]

[Текст переведён с транслита]
Участник оффлайн! Olezhek
Постоянный участник
Tsukuba, Japan/КФУ, РФ



 прочитанное сообщение 15.01.2003 21:28     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Мы вот только что закончили именно на срезах и именно РНК-РНК, мне кажется очень хорший протокол выложен на на www.biochem.roche.com - как правильно было указано. В нашем случае критичной оказалась обработка срезов протеазой К, видимо тип тканей таков был - эмбриончики крабов...

У меня же остается еще с прошлого раза вопрос об использовании РНК проб для Саузерна, и их специфики...в смысле изменения базисного Рошешного протокола для ДНК-ДНК, или же все сводится к изменению температуры гибридизации?
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 16.01.2003 12:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

К сожалению, не имел дела с РНК. Однако, могу посоветовать,
прежде гибридизации срезов убедиться, что у Вас все в порядке
со всеми пробами, растворами, усоловиями и.т.д. Сделайте контрольную гибридизацию на мембране, а если там все ОК, то тогда смотреть, что со срезами - использовать ингибиторы РНКаз или что-нибудь в этом роде.
Carbide Drilling Inserts
IP-штамп: frxgiSAsc0sVA
гость



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  30.03.2023 09:14     Сообщение для модератора       
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

The clever thing http://various-styles.blog.jp/ to do tungsten long rods is special inserts to order your products right here http://easytouse.blog.jp/ through carbide inserts this website. And you will be combining top-notch quality with a very accessible price.As a fashion cemented carbide inserts fan for a trendy and stylish central and intermediate inserts product, one of the carbide inserts product http://various-styles.doorblog.jp/ is carbide inserts a rare choice. cemented carbide inserts carbide insert Take action and add one more jewelry tungsten long rods to your valuable collection!
Участник оффлайн! Jaipurescort7
Постоянный участник
Jaipur



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  08.05.2023 07:10     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Welcome To Hot Models in Udaipur

I am Rashmika From Udaipur Escort Service Agancy . Im a goddess with a gorgeous body and fiery personality, my passion in the bedroom will knock you socks off. I'm the girl that will make all your dreams come true and I want to take you to heaven and back.

https://www.rashmika.co.in
https://rashmika.co.in/ajmer-escorts
https://rashmika.co.in/jodhpur-escorts
https://rashmika.co.in/jaipur-escorts
https://rashmika.co.in/kota-escorts
https://rashmika.co.in/abu-road-escorts
https://rashmika.co.in/mount-abu-escorts
https://rashmika.co.in/sikar-escorts
https://rashmika.co.in/alwar-escorts
https://rashmika.co.in/jaisalmer-escorts
https://rashmika.co.in/bikaner-escorts
https://rashmika.co.in/pushkar-escorts
https://rashmika.co.in/chittorgarh-escorts

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 28.03.24 13:16
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft