Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
Olezhek Постоянный участник Tsukuba, Japan/КФУ, РФ |
Суть в том что я как-то передержал в High.... час целый, и все банды смылись кроме одной, почему-то :roll: Спасибо! |
win Постоянный участник RU |
Смысл, вероятно, в том, что чем выше концентрация соли в буффере, тем стабильнее дуплексы. Ну и соответственно, чем ближе раствор к дистилляту, тем легче эти дуплексы диссоциируют. Т.о. отмывка в более жёстких (чем гибридизация) условиях, т.е. в менее концентрированном солевом растворе позволяет смыть неспецифично (слабо) свясавшиеся молекулы зонда. Ну, например, если помыть в воде - смоется, видимо, все. Советую почитать: http://www.biochem.roche.com/fst/products....iochemistry.cfm Я, кстати, занимаюсь темже и имею ряд встечных вопросов. Не хочется загружать форум. Может, обсудим mailom (я: malekanastassia@hotmail.com) [Текст переведён с транслита] |
|
я могу Вам написать, но чем Вам не нравится форум? Не переживайте - он специально для нас создан (спасибо авторам), а если обсуждать по e-mail, то рискуем принять ошибочное мнение. А так - товарищи поправят, если что не так. |
win Постоянный участник RU |
Меня слегка насторожило лишь то, что мои вопросы не будут соответствовать теме, которую заявил Olezhek, и детальное обсуждение обычно сводится к обмену протоколами... Хотя, конечно, Вы правы. Итак. Я пытаюсь проделать RNA-RNA in situ hybridisation on tissue. И основной проблемой оказалось правильно подготовить срезы. После нанесения на стекло и перед фиксацией их принято сушить около часа при комнатной Т. И я сильно подозреваю, что в это время все RNA became digested by RNAse . Затем, условия фиксации...тут вообщe сотни вариантов...Хочется понять, есть лы какоы-нибудь исходний, базисний способ. И если есть - каков он. [Текст переведён с транслита] [Текст переведён с транслита] |
Olezhek Постоянный участник Tsukuba, Japan/КФУ, РФ |
У меня же остается еще с прошлого раза вопрос об использовании РНК проб для Саузерна, и их специфики...в смысле изменения базисного Рошешного протокола для ДНК-ДНК, или же все сводится к изменению температуры гибридизации? |
|
прежде гибридизации срезов убедиться, что у Вас все в порядке со всеми пробами, растворами, усоловиями и.т.д. Сделайте контрольную гибридизацию на мембране, а если там все ОК, то тогда смотреть, что со срезами - использовать ингибиторы РНКаз или что-нибудь в этом роде. |
Carbide Drilling Inserts IP-штамп: frxgiSAsc0sVA гость |
|
Jaipurescort7 Постоянный участник Jaipur |
I am Rashmika From Udaipur Escort Service Agancy . Im a goddess with a gorgeous body and fiery personality, my passion in the bedroom will knock you socks off. I'm the girl that will make all your dreams come true and I want to take you to heaven and back. |
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |