Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
|
|
|
Оно красит с неплохой чувствительностью (маркеры в стандартных аликвотах для кумасси видны хорощо) и обратимо, то есть последующая блокировка полностью Понсо удаляет. А с Амидо Черным проблема - он не удаляется никак. Может я его неправильно приготовил? на 100 мл 0.25 г амидо черного 15 мл уксусной кислоты 30 мл спирта С понсом такая пропись нормально работает. А с Амидо черным даже мембрана перекорежилась. |
|
условиях без последствий для антигена. Т.е. после окраски белка, краситель можно смыть и окрасить белок антителами по стандартной Western методике. Что касается кумасси и амидо черного: Самый чувствительный из них кумасси, но им можно красить только ПВДФ-мембраны, потому что, на нитроцеллюлезе он дает несмываемый фон. Эти красители садятся на белок практически необратимо, т.е. ими можно красить маркер мол. веса отдельно от антительного блота, но не пробу на блоте. Если нужно покрасить тотальный белок в пробе на блот, то лучше это делать в отдельном форезном геле кумасей или серебром . Пропись на амидо черный такая: АЧ - 0.2% в/о метанол - 40% о/о ук - 10% о/о вода - остальное качать в руках 3-5' отмвыка фона метанол - 40% о/о ук - 10% о/о вода - остальное ВНИМАНИЕ! нитроцеллюлоза в зависимости от марки может сжимается в 40% метаноле. Поэтому, чем меньше время контакта мембраны с краской и отмывкой, те меньше вероятность изменения ее размеров. С ПВДФ этого не происходит. Окраска кумасси такая же как в геле, но отмывка, как в амидо черном. Пока!! |
|
А вот мембрану красить не советую. Не знаю почему, то ли эпитопы портятся, то ли что еще, но часто Вы уже не можете probe your membrane with appropriate antibody. |
|
Кумассями мембрану красить не след. Как и амидо черным. Это приводит к ужасающему результату. Вряд ли портятся эпитопы, но факт, что такую мембрану можно выкинуть - она не красится антителами. |
moonlife3009 United Kingdom |
|
Ufa1688 Постоянный участник |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |