Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Как валидировать очистку от ДНК рекомбинантного белка -- Удалить ДНК и подтвердить чистоту --
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 09.07.2018 19:22     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Добрый день всем!
Стоит задаяа - очистить рекомбинантный белок с His-tag от урезанных форм и агрегатов на силикогельевой колонке для HPLC с фенильной прививкой в градиенте 2M (NH3)2SO4, подкисленный 0.1% трифторуксусной кислотой / бидистилированная H2O . Белок и его урезанные формы и агрегаты предварительно получены солюбилизацией телец включения и очисткой на Ni-NTA агарозе (элюция имидазолом). Эксклюзивную хроматографию использовать нельзя, так как образца очень мало - он используется под иммунизацию мышей для гибридом. Образец находится в буфере с сахарозой (выпадает в осадок без сахарозы или глицерина при замораживании). Очищать получается, но в системе присутствует ДНК. ДНК фрагментировали ультразвуком, затем обрабатывали ДНК-азой. Но что-то осталось. Фенилка имеет слабый положительный заряд, снять ДНК с нее получалось в солевом буфере, блокирующем отрицательный заряд фосфатов, с градиентом. Колонка не убилась так как использовал предколонку. По спектру на 254 нм было ясно видно что идет ДНК. (Прибор Agilent 1100).
Что лучше делать:
1. Обработать ультразвуком, затем ДНКазой.
2. Осадить полиэтиленимином
3. Осадить + заряженным хроматографическим сорбентом (Q-сефароза, DEAE)
Пробовал методы 1 и 3. ДНКаза работет не полностью, возможно надо диализировать в буфер, в котором она работет лучше. Один ультразвук не вариант - он только фрагментирует ДНК, а не удаляет. при выполнении метода 3 белок связывется с сорбентом сильнее чем ДНК. Методом 2 не решил воспользоваться так как остаток полиэтиленимина может намертво сесть на фенилку.
4. Может как-то использовать центрипреп?
Как валидировать очистку?
Пробовал при помощи спектрофотометра как 254 нм так и сканировать спектр 200 - 300 нм. Но что-то выглядит неубедительно. Кстати, взаимодействуя с белком ДНК меняет спектр поглощения. Но это не главное.
Буду благодарен за любую помощь.

Сообщение было отредактировано KCN - 09.07.2018 19:23
Участник оффлайн! Panaev
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.07.2018 13:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

Не очень понял вопрос.
Валидируют обычно уже разработанный процесс, а вы не знаете, как от ДНК очиститься. Да еще и процесс далек даже от экспериментального уровня производства. Что там валидировать?
Вам таки разработать или валидировать?
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 10.07.2018 15:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

И то и другое. А валидируют при помощи PCR, где то так: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/28426392

Так же это изложено в USP, BP, EP.

Есть порог чувствительности метода, но даже если ПЦР не обнаруживает копий вектора, они все равно там присутствуют в подпороговом количистве. Более того, при промышленной очистке от ДНК, целые молекулы ДНК попадают в конечную фракцию белка. Поэтому, они будут медленно, но уверенно забивать колонку, особенно если колонка минипреапаративная, годная для аналитики. Логично, что без предколонки работать нельзя.
Или надо подбирать сорбент и буфер, чтобы высадить ДНК на самонабивной колонке на FPLC.

Сообщение было отредактировано KCN - 11.07.2018 05:54
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 10.07.2018 19:55     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Боже ж ты мой....
ну допустим, аббревиатуру rt-pcr даже в урюпинске применяют в смысле пцр с обратной транскрибцией. Обычно пишут qPCR.
ну допустим, вам еще и сам медод контроля нужно будет валидировать. А валидировать пцр доя контроля остаточной днк нетривиальная задача. Так как в отличие от ваших представлений у пцр чувствительность сильно выше критерия приемлемости. Сколько у вас там критерий приемлемости? 10 нг/доза или 5?
ну допустим, есть и другие suitable methods.
ну допустим, не надо так гордо размахивать юэспи и бипи. В родной гф 13 это тоже есть.
Ну и вершина - промышленная колонка минипрепаративная, годная для аналитики! Я это даже запишу где-нибудь. Вы точно понимаете, чем занимаетесь?
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 11.07.2018 06:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Так и пугайте в Урюпинске своей PCR пьяных медведей, в обнимку с ГФ13. У нас в Украине ваша ГФ13 является просто макулатурой, пригодной для того, чтобы заворачивать в нее сало. Так как не гармонизирована с EP и BP, частично с USP, в то время как ДФУ - большей частью гармонизирована, за исключением N - статей (Nationality).
Что касается минипрепаративной колонки - то вы когда-либо слышали, что такое масштабирование? Или низкие температуры тундры российской необъятной паталогически влияют на уши?

Запишите себе, и обязательно добавте к тому, что для очистки белка для иммунизации животных ПРОМЫШЛЕННАЯ колонка НЕ требуется, поскольку в промышленных масштабах животных НЕ иммунизируют. Из них получают гибридомы, из которых потом чистят антитела, вот там уже и используют промышленные колонки. Для очистки белка для иммунизации нужны какие-то микрограммы, но желательно, очень чистого белка, без агрегатов, урезанных форм и белков клеток хозяина.

Более того, в данной ситуации важна очистка белка от ДНК чтобы не убить колонку, а не из-за потенциально онкогенных эффектов на организм - мышек не жалко, у них и так иммунные клетки нужной специфичности появляются, даже если в белке будет ДНК.

"Вы точно понимаете, чем занимаетесь?"
- более чем вы себе представляете, в условиях весьма скудных ресурсов и оборудования.

Сообщение было отредактировано KCN - 11.07.2018 14:59
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 11.07.2018 08:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

Кстати, аббревиатура RT-PCR может обозначать два разных метода Real Time PCR и Reverse transcription PCR. Использовать обозначение qPCR (quantitative PCR) более корректно. Я имел ввиду Real Time PCR.
Reverse transcription PCR может выполняться и в обычном циклере, без детекции, с последующим разделением продуктов в агарозном геле. Это полуколичественный метод в такой постновке. Так что не всегда reverse transcription PCR = qPCR.

Сообщение было отредактировано KCN - 11.07.2018 08:53
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 11.07.2018 10:02     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

Кстати, микрограммы белка может даже лучше чистить на фенилке 250x4.7 мм, самой "толстой" из аналитических, так как на минипрепаративной он может выйти размытым - ведь его очень мало. Если бы белка было больше - я бы прогнал его через FPLC, используя гельфильтрационный сорбент.

Я уже чистил этот белок на HPLC, условия подобраны, но пришлось промывать предколнку отдельно , чтобы снять ДНК буфером с солью, экранирующей негативные заряды фосфатов.

ДНК приводит к существенному возрастанию давления , а когда сходит с сорбента, дает пик на 254 нм. И это после ультразвука и ДНК-азы EN 0521 DNA-se I Fermentas. Но больше эту эквилибристику делать как-то неохота.

Сообщение было отредактировано KCN - 11.07.2018 10:03
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 11.07.2018 21:13     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

(KCN @ 11.07.2018 04:02)
Ссылка на исходное сообщение  Так и пугайте в Урюпинске своей PCR пьяных медведей, в обнимку с ГФ13. У нас в Украине ваша ГФ13 является просто макулатурой, пригодной для того, чтобы заворачивать в нее сало. Так как не гармонизирована с EP и BP, частично с USP, в то время как ДФУ - большей частью гармонизирована, за исключением N - статей (Nationality).
Что касается минипрепаративной колонки - то вы когда-либо слышали, что такое масштабирование?  Или низкие температуры тундры российской необъятной паталогически влияют на уши?

Запишите себе, и обязательно добавте к тому, что для очистки белка для иммунизации животных ПРОМЫШЛЕННАЯ колонка НЕ требуется, поскольку в промышленных масштабах животных НЕ иммунизируют. Из них получают гибридомы, из которых потом чистят антитела, вот там уже и используют промышленные колонки. Для очистки белка для иммунизации нужны какие-то микрограммы, но желательно, очень чистого белка, без агрегатов, урезанных форм и белков клеток хозяина.

Более того, в данной ситуации важна очистка белка от ДНК чтобы не убить колонку, а не из-за потенциально онкогенных эффектов на организм - мышек не жалко, у них и так  иммунные клетки нужной специфичности появляются, даже если в белке будет ДНК.

"Вы точно понимаете, чем занимаетесь?"
- более чем вы себе представляете, в условиях весьма скудных ресурсов и оборудования.

Продолжайте заворачивать сало.
про промышленную хроматографию на аналитической колонке не я написал.

Впрочем, по теме сабжа - зачем вам в вашей кустарщине валидация? Ну почистили микрограммы, ну вкололи для получения гибридом. Валидация-то тут причем? Или слово красивое? Забудьте. Подберите условия очистаи на анионообменнике и работайте себе с миром на своей украине.
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 12.07.2018 07:57     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

Видимо, термин "валидация" и вас не оставляет равнодушным, так как действует как красная тряпка на быка ;-)

Что касается вашей ГФ13, до того как защитить диссертацию, я работал на фармкорпорации. И как ни странно, регистрировал в Украине субстанции - рекомбинантные белки in bulk, производимые одной небезизвестной фирмой из России, называть ее я не буду. Так как я был инженером-технологом в R&D, то моя часть была модуль 3 CTD, качество. Там была жуткая несходимость по всем параметрам с ведущими фармакопеями мира, не говорю уже о нашей ДФУ. Практически по всем испытаниям. Ваша ГФ является прямым потомком фармакопеи СССР, и она настолько уклонилась в своем развитии от мировых фармакопей, что начала создавать трудности для выхода ваших фармкомпаний на мировой рынок. Российское АНД не подошло. Пришлось писать свое АНД на контроль качества субстанции, уже согласно требованиям ЕР и ДФУ. Но вашу валидацию техпроцесса мы подтвердить не смогли. И валидировать аналитические методики - это тоже обязаность инженера технолога R&D, и геморрой с этим был еще тот. Тем не менее, российский продукт был качественный и испытания выдержал. Но это уже оффтопик.

Что касается ионообменников, то они связывают белок сильнее, чем ДНК. Уже проверил.
Спиртом высаждать тоже не вариант, но попробовать можно. Можно попробовать и высолить сульфатом аммония. Для "человеческого употребления" сульфат аммония в биотехнологии запрещен, по крайней мере у нас в Украине. Но мышкам колоть после него белок можно.

Но контролировать наличие ДНК все таки надо, чтобы не убить колонку. ПЦР и праймеров у меня нету, надо попробовать СФ. Есть какая-то формула, когда-то видел, в Скоупсе, в "Методах выделения белка", есть формула, подставляя значения поглощения на СФ на волнах 254 и 280 нм можно вычислить количество ДНК и степень связывания с белком. Надо найти и попробовать.
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.07.2018 08:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

(KCN @ 12.07.2018 05:57)
Ссылка на исходное сообщение  Видимо, термин "валидация" и вас не оставляет равнодушным, так как действует как красная тряпка на быка ;-)

Что касается вашей ГФ13, до того как защитить диссертацию, я работал на фармкорпорации. И как ни странно, регистрировал в Украине субстанции - рекомбинантные белки in bulk, производимые одной небезизвестной фирмой из России, называть ее я не буду. Так как я был инженером-технологом в R&D, то моя часть была модуль 3 CTD, качество.  Там была жуткая несходимость по всем параметрам с ведущими фармакопеями мира, не говорю уже о нашей ДФУ. Практически по всем испытаниям. Ваша ГФ является прямым потомком фармакопеи СССР, и она настолько уклонилась в своем развитии от мировых фармакопей, что начала создавать трудности для выхода ваших фармкомпаний на мировой рынок. Российское АНД не подошло. Пришлось писать свое АНД на контроль качества субстанции, уже согласно требованиям ЕР и ДФУ. Но вашу валидацию техпроцесса мы подтвердить не смогли. И валидировать аналитические методики - это тоже обязаность инженера технолога R&D, и геморрой с этим был еще тот. Тем не менее, российский продукт был качественный и испытания выдержал. Но это уже оффтопик.

Что касается ионообменников, то они связывают белок сильнее, чем ДНК. Уже проверил.
Спиртом высаждать тоже не вариант, но попробовать можно. Можно попробовать и высолить сульфатом аммония. Для "человеческого употребления" сульфат аммония в биотехнологии запрещен, по крайней мере у нас в Украине. Но мышкам колоть после него белок можно.

Но контролировать наличие ДНК все таки надо, чтобы не убить колонку. ПЦР и праймеров у меня нету, надо попробовать СФ. Есть какая-то формула, когда-то видел, в Скоупсе, в "Методах выделения белка", есть формула, подставляя значения поглощения на СФ на волнах 254 и 280 нм можно вычислить количество ДНК и степень связывания с белком. Надо найти и попробовать.


Как много слов ниочем. Попробуйте сокращать свою речь до смысла. И постарайтесь хотя бы на людях не демонстрировать клиническую русофобию. Это так же неприлично, как мастурбировать публично.
вы еще дипломы виалека какогонибудь тут выставите, чтобы все убедились, какой вы молодец. Ваши тексты говорят мне гораздо больше, чем ваше сиви.

слово "валидация" на меня никак не действует. Осмелюсь напомнить выдающемуся специалисту, что это слово ключевое в его же вопросе. Я то тут причем, что вы, видимо, пишите одно, а подразумеваете другое? Я мыслей читать не умею - спрошено про валидацию, отвечаю про валидацию.
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 12.07.2018 15:30     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Сначала уберите свои войска с окупированных территорий, а потом поговорим о русофобии. Лично я люблю творчество Пушкина, но не правительство Путлера и беснующуюся "вату".

Мысль в принципе одна: ваше ГФ такое унылое Г, что вы сами загоняете себя в рыночную изоляцию, без возможности выхода на мировые рынки. Хотя вам не привыкать. Впрочим, у вас все скатывается в унылое Г, потому как и все в вашей стране делается через Ж.

Если вы исходите желчью от зависти, видя что человек вас в чем-то превосходит - вы всего лишь сознаете свое ничтожество, и брызжите на него словесным поносом как шимпанзе кидается какашками из клетки. Ну что еще можно ожидать от такого ТОЛСТОГО, но увы - унылого тролля, как вы. Выймите бревно из своего глаза, прежде чем замечать соринку в чюжом. Признайтесь для себя, то что если кто-то имеет больший жизненный опыт, навыки и знания - это просто действует как яд на ваше гипертрофированное честолюбие.

И кончайте холиварить, тема все таки об удалении из пробы ДНК, и подтверждении оного, а не в закидывании "извечно младшего брата хохла" отборными русскими какашками по методу шимпанзе.
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 12.07.2018 15:58     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Лично мне уже и так понятно, что валидировать очистку согласно фармакопейным требованиям невозможно. Ввиду отсутствия ПЦР-аппарата и реактивов. Тему можно закрывать.
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 12.07.2018 16:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #13 множественное цитирование

PS:
vb - а ник вам лучше поменять: Полиграф Полиграфович Шариков вам больше подойдет. И не занимайтесь никогда валидацией, ибо это слово вызывает у вас острый приступ ментального поноса. Вам больше подойдет очищать Москву от бродячих котов, валидация - точно не для вас :-)
И прошу, не перенапрягайтесь с ответами, потому что от умственного напряжения человеческий гипофиз может ненароком отцепиться от "ватного" мозга, и тогда вы будете гавкать не на коллег на форуме, а снова на четырех лапах - на котов в подворотнях. :-)

Щиро зичу довгих років! Надобраніч, спіть сухенькі! :-)

Сообщение было отредактировано KCN - 12.07.2018 16:40
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 12.07.2018 21:11     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #14 множественное цитирование

(KCN @ 12.07.2018 13:30)
Ссылка на исходное сообщение  Сначала уберите свои войска с окупированных территорий, а потом поговорим о русофобии. Лично я люблю творчество Пушкина, но не правительство Путлера и беснующуюся "вату".

Мысль в принципе одна: ваше ГФ такое унылое Г,  что вы сами загоняете себя в рыночную изоляцию, без возможности выхода на мировые рынки. Хотя вам не привыкать. Впрочим, у вас все скатывается в унылое Г, потому как и все в вашей стране делается через Ж.

Если вы исходите желчью от зависти, видя что человек вас в чем-то превосходит - вы всего лишь сознаете свое ничтожество, и брызжите на него словесным поносом как шимпанзе кидается какашками из клетки. Ну что еще можно ожидать от такого ТОЛСТОГО, но увы - унылого тролля, как вы. Выймите бревно из своего глаза, прежде чем замечать соринку в чюжом. Признайтесь для себя, то что если кто-то имеет больший жизненный опыт, навыки и знания - это просто действует как яд на ваше гипертрофированное честолюбие.

И кончайте холиварить, тема все таки об удалении из пробы ДНК, и подтверждении оного, а не в закидывании "извечно младшего брата хохла"  отборными русскими какашками по методу шимпанзе.


Это просто прекрасно! То ли гф13 кончилась, то ли сало...
Видимо лично путин виноват в том, что вы не умеете чистить белки от днк и детектировать последнюю. Он же гад, не дает вам амплификатор. Эмбарго ввел. Бедные-бедные...

слушай, для укросрача здесь на форуме есть пара специальных тем. Я бы и те зарубил, но, видимо, они нужны для таких как вы, против природы не попрешь. Испражняйся там, а здесь подотри за собой.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): CowDoc
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 13.07.2018 05:47     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #15 множественное цитирование

Глубоко неуважаемый гражданин Шариков!

Тема была не про выделение белка, а про удаление ДНК и контроль оного.
Вынести контроль наличия ДНК в рекомбинантном белке на аутсорсинг за разумную плату не составило проблем. Так что поставленная задача решена.

Покупать циклер и реактивы к нему ради выполнения одной нерутинной задачи, возникающей раз в год - экономически НЕРЕНТАБЕЛЬНО.

Видимо, гипофиз все таки отцепился и вы продолжаете обгавкивать всех, кто разумнее и опытнее вас. Чтож, подтирать на форуме накиданые вами какашки - неблагодарное занятие, идите лучше гавкать на котов, они это оценят! ;-)

Сообщение было отредактировано KCN - 13.07.2018 06:45
Участник оффлайн! Bear
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 13.07.2018 14:57     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #16 множественное цитирование

Почитал ветку...

user posted image

На пустом месте...

Всего благодарностей: 3Поблагодарили (3): sceptique, CowDoc, LMP
Участник оффлайн! sceptique
Постоянный участник
временной жизни



 прочитанное сообщение 13.07.2018 15:33     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #17 множественное цитирование

Да тут модератор Аглая за порядком следит, потому можно и порусофобствовать. lol.gif

Особенно когда все методы вослед собственным мозгам зааутсорсили в гейропу. lol.gif

Сообщение было отредактировано sceptique - 13.07.2018 15:35
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение 14.07.2018 17:32     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #18 множественное цитирование

Кстати, я из этой самой Европы и пишу. У нас теперь безвиз :-)
Участник оффлайн! vb
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 15.07.2018 10:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #19 множественное цитирование

(KCN @ 14.07.2018 15:32)
Ссылка на исходное сообщение  Кстати, я из этой самой Европы и пишу. У нас теперь безвиз  :-)

Абрикосы поспели? Украинских гастеров массово приглашают на уборку?
Участник оффлайн! LMP
Постоянный участник



 прочитанное сообщение вчера, 00:00     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #20 множественное цитирование

(KCN @ 14.07.2018 15:32)
Ссылка на исходное сообщение  Кстати, я из этой самой Европы и пишу. У нас теперь безвиз  :-)
А при чем тут безвиз, если вы там работаете? confused.gif
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение вчера, 10:23     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #21 множественное цитирование

Нет, я работаю в Украине. В Европе я на отдыхе.
Для этого надо билеты на поезд туда и обратно,
биометрический паспорт гражданина Украины,
денег около 400 евро (с учетом дороги) на 5-7 дней,
и хорошее настроение.
Желательно наличие банковской карты со счетом в евро.
Максимальный срок пребывания до 90 дней без визы, если я не ошибаюсь. Но так долго я там торчать не думаю.
Даже загранпаспорт не нужен - собрался и поехал, как в деревню к дедушке за вашими этими абрикосами tongue.gif
Участник оффлайн! KCN
Участник



 прочитанное сообщение вчера, 10:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #22 множественное цитирование

Надеюсь что эта дурацкая и никому не нужная братоубийственная война скоро закончится и я смогу поехать и в Россию - с детства хочу посмотреть на Байкал. jump.gif
Сейчас посещения России, Крыма, Донбасса - нежелательны, потом начинаются всякие нежданчики и проблемы с органами...
НО ЭТО УЖЕ ЖЕСКИЙ ОФФТОПИК!
К теме, господа, к теме...

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Биофизика и матметоды в биологии · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 17.07.18 05:22
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft