Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Проблемы с ПЦР в реальном времени. -- Сигнал в контроле --
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
guest: Алекса
IP-штамп: frjSx8r9LmZ92
гость



 прочитанное сообщение 18.12.2013 17:52     Сообщение для модератора       

(arndt @ 18.12.2013 11:02)




а-ха-ха lol.gif действительно lol.gif
бранд пошел легким путем, просто впихнул оксид титана в пластик. Обалдеть.
Ну хорошо хоть, не все производители так делают.
Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.12.2013 18:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: Алекса @ 18.12.2013 17:46)
Ссылка на исходное сообщение  зачем?
Для вашего прибора низкопрофильные нужны.

Кстати, у аксигена нет высокопрофильных. У них только со стандартным (средним профилем), наверное, их и имеете ввиду.

Скорее всего Вы правы. Не я заказывал. Я говорил, что нужны низкопрофильные.
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.12.2013 19:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Redman @ 18.12.2013 18:00)
Ссылка на исходное сообщение  Купили высокопрофильные стрипы и закрываем их крышками, все аксигеновское. Сигнал видно - все хорошо. С маслом кривые покрасивше выходят.
По халатности, моей в том числе, форез ставился в той же комнате, где раскапывался ПЦР, а еще в этой комнате выделяем ДНК и растворяли ДНК быка(около 5г). Теперь праймеры+микс - выходят на 10 циклов позже чем праймеры+микс+ДНК. Но кривые плавления отличаются.
Как с этим бороться? Уже месяц, как форез переехал в другую комнату. ДНК выделяем в этой комнате, но под вытяжкой. Раскапываем в ламинарном боксе, но без обдува.
Ясно, что было грубое нарушение. Было предложение взять озонатор, чтобы он все окислил. Можно УФ ламп в комнату натащить... Если что, то через месяц будем капать в другой комнате. Немного смущает, что кривые плавления отличаются в контроле и опыте, на разных праймерах.


главно потом не будет жалко за бесцелно прожитые годы положите в негатив контрол один нанограм спермы соломона smile.gif
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.12.2013 19:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Redman @ 18.12.2013 18:00)
Ссылка на исходное сообщение  Купили высокопрофильные стрипы и закрываем их крышками, все аксигеновское. Сигнал видно - все хорошо. С маслом кривые покрасивше выходят.
По халатности, моей в том числе, форез ставился в той же комнате, где раскапывался ПЦР, а еще в этой комнате выделяем ДНК и растворяли ДНК быка(около 5г). Теперь праймеры+микс - выходят на 10 циклов позже чем праймеры+микс+ДНК. Но кривые плавления отличаются.
Как с этим бороться? Уже месяц, как форез переехал в другую комнату. ДНК выделяем в этой комнате, но под вытяжкой. Раскапываем в ламинарном боксе, но без обдува.
Ясно, что было грубое нарушение. Было предложение взять озонатор, чтобы он все окислил. Можно УФ ламп в комнату натащить... Если что, то через месяц будем капать в другой комнате. Немного смущает, что кривые плавления отличаются в контроле и опыте, на разных праймерах.


на сибрах всегда димеры - заточить сибр без димеров высший пилотаж это вам на ТакМан smile.gif
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.12.2013 20:15     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: Алекса @ 18.12.2013 18:52)
Ссылка на исходное сообщение  а-ха-ха lol.gif  действительно lol.gif
бранд пошел легким путем, просто впихнул оксид титана в пластик. Обалдеть.
Ну хорошо хоть, не все производители так делают.

дак весь "белый ПЦР пластик" с титаном например Еппендорф
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.12.2013 20:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: Алекса @ 18.12.2013 18:52)
Ссылка на исходное сообщение  а-ха-ха lol.gif  действительно lol.gif
бранд пошел легким путем, просто впихнул оксид титана в пластик. Обалдеть.
Ну хорошо хоть, не все производители так делают.


не вижу конкретики - какие производители белого ПЦР пластика не исползуют титан поименно
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.12.2013 20:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(guest: Алекса @ 18.12.2013 18:52)
Ссылка на исходное сообщение  а-ха-ха lol.gif  действительно lol.gif
бранд пошел легким путем, просто впихнул оксид титана в пластик. Обалдеть.
Ну хорошо хоть, не все производители так делают.


ну АБИ никогда не делала "белые плашки " для Реалтайма - чего АБИ побороть слабо - так пошло махало белыми плашками ? smile.gif
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 18.12.2013 20:47     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Redman @ 18.12.2013 18:00)
Ссылка на исходное сообщение  Купили высокопрофильные стрипы и закрываем их крышками, все аксигеновское. Сигнал видно - все хорошо. С маслом кривые покрасивше выходят.
По халатности, моей в том числе, форез ставился в той же комнате, где раскапывался ПЦР, а еще в этой комнате выделяем ДНК и растворяли ДНК быка(около 5г). Теперь праймеры+микс - выходят на 10 циклов позже чем праймеры+микс+ДНК. Но кривые плавления отличаются.
Как с этим бороться? Уже месяц, как форез переехал в другую комнату. ДНК выделяем в этой комнате, но под вытяжкой. Раскапываем в ламинарном боксе, но без обдува.
Ясно, что было грубое нарушение. Было предложение взять озонатор, чтобы он все окислил. Можно УФ ламп в комнату натащить... Если что, то через месяц будем капать в другой комнате. Немного смущает, что кривые плавления отличаются в контроле и опыте, на разных праймерах.


у вас прибор страшно старый и корявый на этой чудовище вы просто зазря потратите молодость вместо науки вы тратите времы на то почему у Жигулей летит шаровая опора frown.gif
Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.12.2013 08:54     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(arndt @ 18.12.2013 20:47)
Ссылка на исходное сообщение  у вас прибор страшно старый и корявый на этой чудовище вы просто зазря потратите молодость вместо науки вы тратите времы на то почему у Жигулей летит шаровая опора frown.gif

Так Вы думаете, что никакого загрязнения нет, а вся беда в приборе и димерах?
Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.12.2013 08:56     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(arndt @ 18.12.2013 19:08)
Ссылка на исходное сообщение  главно потом не будет жалко за бесцелно прожитые годы положите в негатив контрол один нанограм спермы соломона smile.gif

Это слишком тонко для меня. Ничего не понял confused.gif
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.12.2013 11:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Redman @ 19.12.2013 09:54)
Ссылка на исходное сообщение  Так Вы думаете, что никакого загрязнения нет, а вся беда в приборе и димерах?


выже мелткурв ставите - пик вашего продукта осталное димеры мултимеры

купите топ-10 сибр мастермиксов и закажите 5 пар праймеров на ваш таргет
Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.12.2013 11:06     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(arndt @ 18.12.2013 19:12)
Ссылка на исходное сообщение  на сибрах всегда димеры - заточить сибр без димеров высший пилотаж это вам на ТакМан smile.gif

Проверку ставили на роторджине6000. Там никакого продукта в эппендорфах без днк не наблюдали.
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 19.12.2013 11:53     Сообщение для модератора         Личное письмо

(arndt @ 18.12.2013 21:15)
Ссылка на исходное сообщение  дак весь "белый ПЦР пластик" с титаном например Еппендорф

А почему бы не делать с золотом, но металлическим. И красивее будет, наверное, заблестит. wink.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 19.12.2013 12:00     Сообщение для модератора         Личное письмо

(arndt @ 18.12.2013 20:12)
Ссылка на исходное сообщение  на сибрах всегда димеры - заточить сибр без димеров высший пилотаж это вам на ТакМан smile.gif

... выбрать идеальные праймеры (без димеров) практически невозможно, а Сибр их обнаруживает на "мелткурвах". А молодежь твоих тонких соломоновых намеков не понимает. smile.gif
Guest
IP-штамп: frjSx8r9LmZ92
гость



 прочитанное сообщение 19.12.2013 12:06     Сообщение для модератора       

(-Ъ- @ 19.12.2013 11:53)
Ссылка на исходное сообщение  А почему бы не делать с золотом, но металлическим. И красивее будет, наверное, заблестит. wink.gif


про соломона-то все ясно. А вот тут что-то совсем тонкое. Мне непонятно ))))
guest: Алекса
IP-штамп: frjSx8r9LmZ92
гость



 прочитанное сообщение 19.12.2013 12:13     Сообщение для модератора       

(arndt @ 18.12.2013 20:34)
Ссылка на исходное сообщение  ну АБИ никогда не делала "белые плашки " для Реалтайма - чего АБИ побороть слабо - так пошло махало белыми плашками ? smile.gif



mol.gif ну не надо уж молиться всю жизнь на АБИ. Не всегда и не везде они "впереди планеты всей" smile.gif

и потом, такие монстры как АБИ больше половины продуктов сами не производят.
guest: Алекса
IP-штамп: frjSx8r9LmZ92
гость



 прочитанное сообщение 19.12.2013 12:15     Сообщение для модератора       

(arndt @ 18.12.2013 20:19)
Ссылка на исходное сообщение  не вижу конкретики - какие производители белого ПЦР пластика не исползуют титан поименно



пардоньте, так сходу боюсь соврать... поищу shuffle.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 19.12.2013 12:39     Сообщение для модератора         Личное письмо

(Guest @ 19.12.2013 13:06)
Ссылка на исходное сообщение  про соломона-то все ясно. А вот тут что-то совсем тонкое. Мне непонятно ))))

Нанозолото добавляют в реакционную смесь для проводимости, а почему бы нет и в пластик тоже. smile.gif
Вообще-то я имел ввиду Redman
Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.12.2013 14:48     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(arndt @ 18.12.2013 19:12)
Ссылка на исходное сообщение  на сибрах всегда димеры - заточить сибр без димеров высший пилотаж это вам на ТакМан smile.gif

У нас есть и такман. Сегодня-завтра вымываем лабораторию - и поставим еще на них.
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.12.2013 16:36     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Redman @ 19.12.2013 15:48)
Ссылка на исходное сообщение  У нас есть и такман. Сегодня-завтра вымываем лабораторию - и поставим еще на них.


мои любимые мастермиксы

ТакМан - квантика особенно на геномке держит до 150 нфнограм геномки на 20 миклов все осталные отдыхают

СИБР - Биолайн , без димеров и сурпризов

ЕваГреен - биорад
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 19.12.2013 16:47     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Redman @ 19.12.2013 15:48)
Ссылка на исходное сообщение  У нас есть и такман. Сегодня-завтра вымываем лабораторию - и поставим еще на них.


зачем мыть лабу пипеткой направо налево не размахивай у меня форез и реалтайм в одной комнате никаких проблем
Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.12.2013 00:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(arndt @ 19.12.2013 16:47)
Ссылка на исходное сообщение  зачем мыть лабу пипеткой направо налево не размахивай у меня форез и реалтайм в одной комнате никаких проблем

Дак в том то и дело, что не размахиваю. И носы новые с фильтрами и наборы. И в шкафу ламинарном раскапываю. Хотя была мысль, что это все от кривых ручек или слабой головушки. frown.gif
Будем работать smile.gif
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.12.2013 05:50     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Redman @ 20.12.2013 01:08)
Ссылка на исходное сообщение  Дак в том то и дело, что не размахиваю. И носы новые с фильтрами и наборы. И в шкафу ламинарном раскапываю. Хотя была мысль, что это все от кривых ручек или слабой головушки. frown.gif
Будем работать  smile.gif


с 1998 первый раз вижу что пср в ламинарах smile.gif

ТакМан 35-40 минут

СИБР с кривой плавления 50-55

еффективность 95-105 %

десятикратные стандартные разведения матрицы и кривые на сцену smile.gif
Участник оффлайн! arndt
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.12.2013 06:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(Redman @ 20.12.2013 01:08)
Ссылка на исходное сообщение  Дак в том то и дело, что не размахиваю. И носы новые с фильтрами и наборы. И в шкафу ламинарном раскапываю. Хотя была мысль, что это все от кривых ручек или слабой головушки. frown.gif
Будем работать  smile.gif


вопрос народу у кого есть первый коммерчесский циклер Перкин Елмера образца 1987 куплю дорого
Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 20.12.2013 13:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(arndt @ 20.12.2013 05:50)
Ссылка на исходное сообщение  с 1998 первый раз вижу что пср в ламинарах smile.gif

ТакМан 35-40 минут

СИБР  с кривой плавления 50-55

еффективность 95-105 %

десятикратные стандартные разведения матрицы и кривые на сцену smile.gif

Мы так капать начали только после того, как начал лезть сигнал в контроле.
Такман мне не дали. Делал то же самое... и получил то же самое. wall.gif

Сообщение было отредактировано Redman - 20.12.2013 14:01
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 20.12.2013 17:18     Сообщение для модератора         Личное письмо

(arndt @ 20.12.2013 07:14)
Ссылка на исходное сообщение  вопрос народу у кого есть первый коммерчесский циклер Перкин Елмера образца 1987 куплю дорого

confused.gif На фига? Купи на ебае, говорят там бывают. smile.gif
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 20.12.2013 17:19     Сообщение для модератора         Личное письмо

(Redman @ 20.12.2013 01:08)
Ссылка на исходное сообщение  Дак в том то и дело, что не размахиваю. И носы новые с фильтрами и наборы. И в шкафу ламинарном раскапываю. Хотя была мысль, что это все от кривых ручек или слабой головушки. frown.gif
Будем работать  smile.gif

Мысли интересные, но главное - правильные! smile.gif
kloun
IP-штамп: frz4Hw2duM8Wk
гость



 прочитанное сообщение 22.12.2013 08:29     Сообщение для модератора       

(arndt @ 20.12.2013 06:14)
Ссылка на исходное сообщение  вопрос народу у кого есть первый коммерчесский циклер Перкин Елмера образца 1987 куплю дорого

Нужно искать эту машину Baby Blue - но нет её на Ебэе - за неё точно к пенсии много денег дадут:
http://www.sciencemuseum.org.uk/images/I025/10287482.aspx
Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.12.2013 17:31     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

(arndt @ 20.12.2013 05:50)
Ссылка на исходное сообщение  с 1998 первый раз вижу что пср в ламинарах smile.gif

ТакМан 35-40 минут

СИБР  с кривой плавления 50-55

еффективность 95-105 %

десятикратные стандартные разведения матрицы и кривые на сцену smile.gif

Такман, то мне дали, но он не оптимизирован... Не уверен можно ли его оптимизировать в данных условиях.
50-55 - это время всей реакции? мы используем трёхшаговый цикл с удержанием по 25(52) 25(72det) 30(95) (40 циклов) и плавление 50-98 с шагом 0.5 градуса - это у нас занимает чуть менее трех часов.
Сегодня искал, мб какой праймер не будет давать сигналов - все, что отжигалось при заданной температуре, дало сигнал в смеси без ДНК.
Такое впечатление, что мы что-то упускаем.

Сообщение было отредактировано Redman - 23.12.2013 17:47
Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.12.2013 14:25     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Вчера коммерческий набор достали Амплисенс на ДНК вирусы. Вот что получилось:
Первый график(FAM) - это стандарты. На втором(HEX) стандарты, а циан и розовый - пробы.

Картинки:
картинка: ___.jpg
___.jpg — (97.31к)   

Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 25.12.2013 14:34     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

А вот с праймерами, которые заказывали у синтола. Я так понимаю, что дело таки в контаминации?

Картинки:
картинка: Telo.jpg
Telo.jpg — (124.39к)   

Участник оффлайн! avial
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 26.12.2013 01:09     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Дело прежде всего в крайне хреново идущей ПЦР, как мне кажется.
Участник оффлайн! Redman
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 23.01.2014 15:42     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Всем спасибо за помощь. Все получилось. Действительно, оказалось, что у нас все хорошо. В оригинальном протоколе авторы амплифицируют всего 25 циклов и использовали другие температуры отжига. Ставим все в стрипах на Синтоловских миксах с маслом и без(с маслом кривые плавление получше получаются). Пробовали термосаитификовские - та же эффективность. Ставим в монохромном мультиплексе - в геле две нужные полосы.
Guest
IP-штамп: fr0cSKW7.X7b6
гость



 прочитанное сообщение 09.08.2014 20:17     Сообщение для модератора       

http://biopharmexpert.ru/product/b50601-pl...zkii-profil-40/

вот плашки подходят -
для MJ Research Inc. PTC-200 DNA Engine Chromo4 96 x 0.2ml
MJ Research Inc. PTC-220 DNA Engine Dyad Chromo4 96 x 0.2ml
MJ Research Inc. PTC-221 DNA Engine Disciple Chromo4 96 x 0.2ml
Bio-Rad Laboratories DNA Engine Chromo4 96 x 0.2ml
и других Хромо4 , я так понимаю приборы все одни и те же.

3500р за 25 плашек.
Участник оффлайн! st3




 прочитанное сообщение 11.08.2014 16:37     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

Нужна помощь. Купили BioRad Icycler с оптическим блоком реалтайм (см фото).
Покупали б/у интернет магазине. При поставке "забыли" положить блок питания для оптического блока. Нужна распиновка 9-пин разъема питания. Может кто-то сможет замерить. Благодарность не будет знать границ.

Файл/ы:

скачать файл ____.zip
размер: 14.91мб
кол-во скачиваний: 146


Участник оффлайн! watchesbiz
Постоянный участник



 прочитанное сообщение Сообщение на английском  27.11.2021 07:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail

http://www.authorstream.com/Replicawatches24/
https://about.me/Replicawatches24
https://moz.com/community/users/17050093
https://trello.com/rolexrelicawatches/activity
https://replicarolexwatches.dreamwidth.org/365.html
https://visual.ly/users/watcheshutuk/portfolio
https://www.viki.com/users/watcheshutuk_549/about
https://www.academia.edu/s/14bdb7d4fe?source=link
https://www.slideshare.net/Nowseore/guide-o...ex-watch-online
https://audiomack.com/rolexrelicawatches
https://soundcloud.com/replicarolexwatches
https://www.bagtheweb.com/u/fakerolexwatches/profile
https://www.flipsnack.com/ReplicawatchesUK/...ca-watches.html
https://www.4shared.com/office/zA4L7Rmzea/G...hase_a_Fak.html?
https://codepen.io/Rolexrelicawatches/full/abBEzaQ

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 29.03.24 09:18
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft