molbiol.ru -> Селективный нокаут внутриклеточных белков с использованием убиквитин-протеасомной системы

> Все форумы > Тематические форумы > Колонка новостей

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Селективный нокаут внутриклеточных белков с использованием убиквитин-протеасомной системы

Кураторы темы:* Serpent
Чёрный список: watchesbiz, eshafatima, jalily5, jane smith, merckseo, xigel19038, гости, vrida2, nidramulta, mehreensiddique, seomind
NB! в теме нельзя обсуждать тех, кто внесён в чёрный список
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Serpent
Постоянный участник
RU-->IT

23.03.2014 19:28

URL #1

Методы, позволяющие осуществлять удаление определенного внутриклеточного белка, т.е. белковый нокаут, крайне востребованы как в фундаментальной биологии, так и, в перспективе, в молекулярной медицине. В биомедицинской литературе уже достаточно давно обсуждается возможность использовать для белкового нокаута убиквитин-протеасомную систему (УПС), представляющую собой основной механизм селективной деградации белков в эукариотической клетке.

В рамках данной системы энзиматический каскад, включающий ферменты Е1, E2 и убиквитинлигазу Е3, катализирует присоединение к белкам, подлежащим деградации, полиубиквитиновой цепи определенной структуры. Эта цепь затем узнается протеасомой, которая непосредственно осуществляет деградацию белка-мишени. Воздействуя на данный процесс, теоретически возможно направить на путь деградации отдельные выбранные белки. Так, некоторые вирусы используют различные механизмы для изменения активности УПС в поражаемых клетках в своих целях. Попытки использовать УПС для селективного нокаута белков предпринимались и различными исследовательскими группами, однако до настоящего времени было опубликовано лишь несколько примеров такого подхода, в силу разных причин применимых лишь к небольшому числу белков.

В опубликованной в Journal of Biological Chemistry статье группа исследователей из университета Корнелла под руководством Matthew DeLisa представила оригинальный метод, который претендует на универсальность и может использоваться для элиминации практически любых внутриклеточных белков. Метод основан на «перепрограммировании» УПС с использованием химерных ферментов, осуществляющих убиквитилирование выбранных белков и их направление на путь протеасомной деградации.

Модульно-иерархический принцип организации каскада убиквитилирования позволил достигнуть цели с помощью модификации лишь 1 компонента системы – убиквитинлигазы E3. Основой послужила убиквитинлигаза CHIP. Этот фермент довольно хорошо охарактеризован и отвечает за убиквитилирование большого числа внутриклеточных белков, распознавание которых происходит с участием домена TPR. В описываемом эксперименте этот домен был удален и заменен искусственными конструкциями, которые авторы называют «дизайнерскими связывающими белками» (designer binding proteins, DBP). В качестве таких распознающих белок-субстрат модулей использовались одноцепочечные Fv-фрагменты антител, или Fv-интратела (intrabodies) и так называемые монотела (monobodies), основанные на использовании фибронектиновых доменов III типа. В отличие от обычных антител, интратела и монотела сохраняют активность в денатурирующих условиях и поэтому способны связывать свои «антигены» с высокой специфичностью и аффиностью внутри клетки.

По аналогии с антителами, авторы называют созданные ими химерные белковые конструкции «убиквителами» (ubiquibodies). Для проверки работоспособности метода использовались химеры, включающие интратела к бета-галактозидазе и монотела к мальтоза-связывающему белку MBP. В экспериментах in vivo с использованием котрансфекции белков-мишеней и специфичных к ним убиквител в 3 клеточных линиях авторам удалось продемонстрировать эффективный нокаут выбранных белков. При этом уровень эндогенных субстратов убиквитинлигазы CHIP дикого типа оставался неизменным. Масс-спектрометрические исследования подтвердили, что убиквитела катализировали присоединение к белкам-мишеням именно того типа полиубиквитиновых цепей, который помечает внутриклеточные белки для протеасомной деградации. При этом степень элиминации белка-мишени напрямую зависела от концентрации плазмид, кодирующих убиквитела.

Использование предлагаемого метода поможет существенно упростить исследования эффектов полной или частичной элиминации того или иного белка в клетке. Кроме того, данная технология имеет большой потенциал для разработки новых терапевтических подходов, основанных на селективной элиминации аберрантных белков, например, в случае некоторых видов рака и нейродегенеративных заболеваний.

Источник: Portnoff AD, Stephens EA, Varner JD, Delisa MP. Ubiquibodies, synthetic e3 ubiquitin ligases endowed with unnatural substrate specificity for targeted protein silencing. J Biol Chem. 2014. 289(11):7844-55.

Подпись к рисунку: Схема работы УПС в естественных (слева) и в модифицированных (справа) условиях. В первом случае ферменты Е1, Е2 и Е3 катализируют присоединение убиквитина к нативным субстратам (S), которые затем подвергаются деградации в протеасоме. Во втором случае химерный фермент Е3-DBP убиквитилирует заданный белок-мишень (T).
Рисунок из обсуждаемой статьи.

Поблагодарили (10): xenopus, epsylonit, Vadim Sharov, Replikant, DaDa-Bu, LMP, Miss Marple, inview, Lanik, Cyclon

Сообщение в колонке новостей, раздел "Наука: общая и молекулярная биология"
24.03.2014 09:23

otis123

14.07.2022 07:05

URL #2

Убиквитин-протеасомная система (УПС) является ключевым клеточным путем, который регулирует деградацию белков в ответ на клеточный стресс. UPS состоит из нескольких отдельных компонентов, включая framed game ферменты убиквитин-лигазы, убиквитин-конъюгирующие ферменты и протеасомы. Убиквитинирование - это посттрансляционная модификация, используемая большинством эукариотических клеток для маркировки белков с целью их деградации. Известно по крайней among us мере 18 ферментов E3 убиквитин-лигазы, которые могут активироваться различными сигнальными путями и приводить к пометке белков-мишеней для деградации.

Сообщение было отредактировано otis123 - 09.09.2022 04:19

herri1234

15.08.2022 12:02

URL #3

Your lien claim is not finished when you file it. It's only starting. You must follow through and prove to the gartic phone bank that your claim is valid before they will remove the phrazle lien. This means contacting the property owner and documenting everything you've done so far to take care of your lien claim.

ReginaDudash

12.10.2022 12:36

URL #4

The method is based on UPS reprogramming bbva compass bank hours using chimeric enzymes that ubiquitylate selected proteins and direct them to the proteasome degradation pathway.

466773030
Постоянный участник

18.10.2022 06:27

URL #5

marshall
marshall 音響
音響 marshall
marshall emberton
marshall stanmore ii
marshall 耳機
marshall acton ii
marshall 官網
marshall 藍芽喇叭
marshall 音箱
marshall stockwell
marshall 台灣
marshall 喇叭
marshall 音響門市
marshall 代購
marshall mode ii
marshall kilburn ii
marshall emberton奶油白
marshall emberton 白
marshall major iv
marshall willen 台灣
藍芽音響 marshall
marshall 藍芽耳機

Ufa1688
Постоянный участник

21.10.2022 16:37

URL #6

This morning ufa1688 just after 8 a.m UFA1688 he followed that up with ลิงค์รับทรัพย์ Cross as quickly as possible ufabet เข้าสู่ระบบ ทางเข้า onto the left bank ยูฟ่า1688 the eastern side 123goa of river Dnipro.123goa Hours later, the Russian-backed 123VEGA administration went so far as to close เครดิตฟรี off all entry to the right bank of the สล็อตออนไลน์ Dnipro River for seven days.

thomasmore1

30.11.2022 16:09

URL #7

Here you will see a holder saying 'Enter staggering code or gift voucher'. Pop your coupon in and your hold supports will be applied.
Visit:
Bookkeeping Services UK
Tax Advisor Near Me
Payroll Services
Vat Online Services
Business Consultant
Online Self Assessment
Kashflow Login
Company Car Tax Calculator
Interest Calculator UK

watchesonline89
Постоянный участник

08.12.2022 09:41

URL #8

https://62e8ce2ae5d50.site123.me/
https://www.vingle.net/posts/4647029
https://eatsleepride.com/c/383272
https://anotepad.com/notes/prkpsawt
https://demo.wowonder.com/1665548793521727_195426
https://linktr.ee/omegawatches89
https://omegawatches89.gumroad.com/p/reason...replica-watches
https://omegawatches93.mystrikingly.com/
https://writer.zoho.com/writer/open/k3enw04...fea14e95e0ee806
https://www.edocr.com/v/rakkz4oq/omegawatch...-replica-online
https://diigo.com/0pigfx
https://62e8ce2ae5d50.site123.me/blog/reaso...replica-watches
https://www.worldranklist.com/preview/bookm...s-Online-Store-
https://omegawatches89-95.webselfsite.net/contact
https://form.jotform.com/223252982096057

Ujjainescort7
Постоянный участник
Ujjain

10.02.2023 09:48

URL #9

rankxone
Постоянный участник

05.03.2023 20:03

URL #10

Broom making machines are commonly used in large-scale broom manufacturing operations. However, they can also be used by small businesses and individuals who want to produce brooms in bulk. broom making machine

Ufa1688
Постоянный участник

18.06.2023 16:05

URL #11

The research ทาง เข้า ufabet มือ ถือ by the United Nations ufa1688 Office on Drugs and Crime ราคาบอล (UNODC) found that meth seizures ลิงค์รับทรัพย์ in East and Southeast ALL-BET Asia, which spiked to record nigoal123 highs during the pandemic UFA1688 as cartels switched to bigger ufabet เข้าสู่ระบบ ทางเข้า and riskier bulk shipments 123goal returned to pre-Covid แฮนดิแคป คือ numbers last year.

rankxone
Постоянный участник

14.12.2023 20:01

URL #12

As a leading player in the semiconductor industry, Southchip has been instrumental in shaping the landscape of modern electronics. Southchip

rankxone
Постоянный участник

17.12.2023 13:57

URL #13

The rise of online casinos has been nothing short of spectacular, providing a virtual gateway to the adrenaline-pumping world of gambling. 안전카지노

rankxone
Постоянный участник

21.12.2023 15:24

URL #14

If you aspire to master the art of tailoring and transform fabrics into exquisite garments, Chennai Fashion Institute is your ultimate destination. In this article, we delve into the reasons why Chennai Fashion Institute stands out among tailoring institutes in Chennai and why it's the preferred choice for those who are serious about honing their tailoring skills. Tailoring Institutes in Chennai

rankxone
Постоянный участник

15.01.2024 10:48

URL #15

Explore advanced courses and technical training options at our institute. From embroidery to garment designing, we offer a diverse range of courses to cater to your specific interests. Dress Stitching Class in Chennai

rankxone
Постоянный участник

15.01.2024 12:05

URL #16

Thanks to these professionals, our home is now wildlife-resistant. Can't express how grateful we are for their prevention strategies. Wildlife Removal Mississauga

rankxone
Постоянный участник

15.01.2024 12:30

URL #17

AI agents have enhanced our team's agility, allowing us to pivot and adapt to changing circumstances with speed and precision. AI Agent Collaboration Tools

rankxone
Постоянный участник

15.01.2024 20:32

URL #18

Viral marketing aims to create content that spreads rapidly through online platforms, leveraging social sharing and word-of-mouth. Ai

rankxone
Постоянный участник

26.01.2024 16:54

URL #19

Say goodbye to the headache of scheduling – all-day junk car removal is available whenever you need it. cash for junk cars

rankxone
Постоянный участник

02.02.2024 16:41

URL #20

Moreover, Taskade AI is not just about managing tasks; it's about redefining them. The platform offers dynamic workflow generation, allowing you to create custom, AI-powered workflows that cater to your unique requirements. From generating comprehensive project plans to simplifying complex processes into manageable tasks, Taskade AI is your go-to solution for intelligent task management. AI Tasks

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.