molbiol.ru -> Выделение лейкоцитарной фракции

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Выделение лейкоцитарной фракции -- deleted by Дядя ФАКСер --

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

Centaurea

Москва

21.05.2012 15:04

URL #1

Всем здравствуйте!

Помогите, пожалуйста, разобраться с методикой выделения лейкоцитов из крови.
Объем крови 5-6 мл. Предполагается выделить из крови лимфоциты/моноциты и нейтрофилы с помощью их разделения на градиенте плотности.
В наличии имеется только LSM 1,077.
Насколько я понял из литературы для выделения нейтрофилов необходим фиколл пл-тью 1,120, но вот время и обороты центрифуги (?) при этом не понятны.
Можно ли вместо фиколла (LSM) использовать сахарозу?
Как избавиться от тромбоцитов?

Если кто-то работал или знает как выделить данные фракции клеток из крови, пожалуйста, напишите.

guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость

21.05.2012 18:29

URL #2

--насколько я понял из литературы для выделения нейтрофилов необходим фиколл пл-тью 1,120, но вот время и обороты центрифуги (?) при этом не понятны.

20мин 1000g

-Можно ли вместо фиколла (LSM) использовать сахарозу?
Нет

--Как избавиться от тромбоцитов?
Несколько промывок PBS на низких g 300-500.

Centaurea

Москва

22.05.2012 13:27

URL #3

А кто-нибудь может более подробно объяснить почему для создания градиента плотности используется именно фиколл?

Centaurea

Москва

22.05.2012 16:15

URL #4

Еще несколько вопросов, если можно:
1) Если я хочу выделить нейтрофилы и лимфоциты/моноциты из крови человека, то мне лучше разделять их в два этапа с фиколлом разной плотности или на двойном градиенте?
2) Как осуществляется отмывка в PBS? Там тоже будет расслоение PBS и клеток?

guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость

22.05.2012 16:58

URL #5

--А кто-нибудь может более подробно объяснить почему для создания градиента плотности используется именно фиколл?

Осмос фиколл полимер и по определению имеет низкое осмотическое давление при высокой плотности, сахароза при высокой плотности имеет осмос больше чем осмос физ раствора клетки - полопаются. кроме того фиколл способствует агрегации эритроцитов

guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость

22.05.2012 17:02

URL #6

-1) Если я хочу выделить нейтрофилы и лимфоциты/моноциты из крови человека, то мне лучше разделять их в два этапа с фиколлом разной плотности или на двойном градиенте?

Не знаю, так их часто на 1.077 выделяют, а потом просто фракцию эритроцитов хлоридом аммония жах и все - выживают только нейтрофилы

-2) Как осуществляется отмывка в PBS? Там тоже будет расслоение PBS и клеток?

Вы клетки хоть раз фуговали?
там будет осадок из больших клеток(целевая фракция) и не севшая суспензия маленьких клеток-тромбоцитов.

Centaurea

Москва

22.05.2012 17:10

URL #7

"1) Если я хочу выделить нейтрофилы и лимфоциты/моноциты из крови человека, то мне лучше разделять их в два этапа с фиколлом разной плотности или на двойном градиенте?

Не знаю, так их часто на 1.077 выделяют, а потом просто фракцию эритроцитов хлоридом аммония жах и все - выживают только нейтрофилы"

А хлорид аммония не убьет нейтрофилы?
Мне их потом еще на активность смотреть и ДНК выделять.

guest: ммм
IP-штамп: frwHRv5zEzGDY
гость

22.05.2012 17:37

URL #8

--А хлорид аммония не убьет нейтрофилы?

Это стандартная процедура. И вообще почитайте журнал КРОВЬ на эту тему.

Поблагодарили (1): Centaurea

Riba

06.06.2012 22:00

URL #9

Если Вам нужна только фракция нейтрофилов, то ее лучше выделять в двойном градиенте плотности

Guest
IP-штамп: frn5QqQNq0L9g
гость

07.06.2012 03:29

URL #10

Мало крови!!! Больше надо. Человечья кровь? С поллитра начинайте.

Поблагодарили (1): Дядя ФАКСер

Centaurea

Москва

28.06.2012 11:32

URL #11

Больших объемов крови не дают. Работаю с тем, что есть.
Центрифугировал 30 мин. при 3000 об./мин (2053g), но половинаэритроцитов не проходят через фиколл 1,119.
На флаконе с фиколлом написано, что хранить надо при t=4 С, а при какой температуре надо крутить на нем клетки?
После разделения клеток, я их крашу по Романовскому-Гимзе, клеток на предметном стекле получается очень мало и они меняют свою форму. Может быть из-за неправильной фиксации (96% этанол на 10 мин). Кто-нибудь может подсказать, как правильно фиксировать клетки? метанола и осмиевой кислоты в лаборатории нет.

Агроном
Постоянный участник

28.06.2012 11:52

URL #12

Крутить при комнатной (18-22градуса). Клетки, возможно, смываются с предметного стекла из за отсутствия белков плазмы, так как в цельной крови эти белки при фиксации денатурируют и приклеивают клетки к стеклу.

watchesbiz
Постоянный участник

09.12.2021 17:05

URL #13

http://replicarolexwatches.simpsite.nl/
https://www.smore.com/rj7kh-best-replica-watches
https://www.athleticsnation.com/users/Replicarolexwatches
https://pastebin.pl/view/ab0e458a
https://mix.com/watcheshutukcom
https://www.woddal.com/post/359216_tiny-acc...nybody-039.html
https://share.naturalnews.com/posts/3904099
https://demo.wowonder.com/post/214429_the-i...-producers.html
https://rapichat.com/post/5369_our-purpose-...ible-there.html
https://dashburst.com/replicarolexwatches/1
https://sway.office.com/KifcQvn36MK821G8
https://flipboard.com/@replicarolex24
https://getpocket.com/redirect?url=https%3A...eshut.uk.com%2F
https://www.openstreetmap.org/user/Hints%20...20Rolex%20Watch

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.