molbiol.ru -> Специфичность праймеров

> Все форумы > Тематические форумы > Молекулярная и клеточная биология

Zbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ

Правила FAQ* Поиск* Участники* Календарь* Избранные темы* Форум Форумов*

Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ]

Форум:

* Специфичность праймеров

Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.

GOG
IP-штамп: frrO7QvrSVOQ6
гость

19.03.2010 13:32

URL #1

Подскажите, какими параметрами можно оценить специфичность отжига праймеров при ПЦР-РВ с SybrGreenI? Просто нужно сравнить множество праймеров по уровню специфичности их отжига

-Ъ-
Постоянный участник
Москва

19.03.2010 14:47

URL #2

Специфичность праймеров определяют сравнивая выход (и невыход) ПЦР продукта в широком диапазоне температур отжига на близко- и далекородственной матрице ДНК. Не знаю как и ответить - так заумно задали вопрос. И по Бласту проверяете, само собой...
Если реакцию не заингибируете избытком Сибра, конечно.

GOG
IP-штамп: frrO7QvrSVOQ6
гость

20.03.2010 14:00

URL #3

Попытаюсь объяснить задачу поподробнее:
Мы будем пришивать к олигонуклеотидам вещество - Х. И нам необходимо узнать как оно повлияет на специфичность отжига праймеров (будем брать большую выборку) праймеров при фиксированной температуре. Так вот проанализировать как это вещество влияет на димерообразование, шпилькообразование и другую неспецифичную хрень. Для этого необходимо выбрать параметры, по которым, необходимо оценить уровень образования неспецифики(димеры, петли).

Statin
Постоянный участник

20.03.2010 16:50

URL #4

После ПЦР (если ПЦР выходит) плавите продукт и по кривой плавления смотрите наличие неспецифики.

GOG
IP-штамп: frrO7QvrSVOQ6
гость

20.03.2010 17:14

URL #5

(Statin @ 20.03.2010 16:50)

После ПЦР (если ПЦР выходит) плавите продукт и по кривой плавления смотрите наличие неспецифики.

Да..большое спасибо...такая мысль у меня была...но насколько это корректно и какие данные указывать в отчете: количество, ширину и высоту пиков?

Statin
Постоянный участник

20.03.2010 23:29

URL #6

В идеале должен быть один достаточно острый пик, наличие других пиков и будет свидетельствовать о неспецифике, если продукты низкомолекулярные, как-то димеры праймеров, то плавится они будут на низких температурах. Чем больше пиков, тем больше димеров. Вам нужно подбирать праймеры так, чтобы продукты были примерно одинаковой длины.

patrol
Участник

22.03.2010 10:38

URL #7

нанесите на форез и всё увидете

yamiren
Участник

22.03.2010 15:25

URL #8

(patrol @ 22.03.2010 13:38)

нанесите на форез и всё увидете

Лучше уж плавление, один раз можно форез - сравнить с пиком - потом только melt curve

nigoal123
IP-штамп: fr/1ZkUsuBQOE
гость

07.12.2021 11:27

URL #9

there are so many objectives แทงบอล of Article Writing on various สล็อต123 topics like society, nigoal123 persons, locations 123game rising-issues. คาสิโนออนไลน์ and technical developments.

It influences some readers. หวย and some may fail in audience เว็บ 123 perception because of messiness เว็บ 123 to least important. แทงบอลออนไลน์ in your article writing. สล็อต123 So, following the correct format of writing

Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.

Имя:

Отправка сообщений использует JavaScript операции. В вашем броузере не
установлено/отключено выполнение JavaScript программ. Используйте Netscape Navigator
или Internet Explorer (не ранее 3 версии); убедитесь, что выполнение JavaScript
программ разрешено в настройках вашего броузера.