Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Zbio-wiki NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ Темы за 24 часа [ Вход* | Регистрация* ] Форум: | |
guest: ммм IP-штамп: frwHRv5zEzGDY гость |
Гуга! Здесь ингибитор фосфатаз ванадат, разве что. Мой вам совет добавить в форез и во все буфера: сэмпл, для переноса, инкубации и тд. ЭДТА до 1мМ. Очень помогает от фосфатаз дешево и сердито. -а я использовала молоко в случае вторичного антитела. Неужели это имеет значение?! А вы сами то подумайте основной белок молока это что? - КАЗЕИН. А казеин один из самых фосфорилированных белков. Желатин еще можно вместо BSA. |
Tom1 Постоянный участник |
(Liudmila @ 05.08.2010 09:16) Том1, спасибо за внимание! 1.Оцениваю увеличение фосфорилирования качественно, на глазок. 2.Использую антитела к фосфопептидам. 3. Да, присутствуют: использую апротинин, леупептин, ортованадат и ПМСФ. Несколько лет назад эта методика работала в этой же научной группе, а теперь в моих руках - не получается. Обнаружила в интернете, что в случае антител против фосфопептидов надо использовать БСА вместо молока на всех этапах обработки блота, а я использовала молоко в случае вторичного антитела. Неужели это имеет значение?! 1. я бы насыпал кроме вандата исчо и флорит натрия и ортофосфат натрия. 2. НИКАКОГО МОЛОКА!!!!!! ТОЛьКО БСА!!!!! в молоке полным полно фосфобелков и большауя веротность что ваши антела туда и уходят. 3. что бы я обязательно сдлел бы поставил контроль на фосфорелирование ваших белков схема такая : ИП ваших белков делите на три части и одну не обрабатываите фосфотазой, вторая треть + фосфотаза и третья +фосфотаза+ ингибиторы и смотрите все вестерном..... |
Liudmila IP-штамп: frpzMrmKUuRMg гость |
Учту ваши советы! |
Shikooo Постоянный участник |
|
guest: Ufa1688 IP-штамп: fr4iy3.kHUw02 гость |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
Shikooo Постоянный участник |
|
guest: 123vega IP-штамп: frXqkB4MpP2jQ гость |
|
Macanbola IP-штамп: frxwqRM9LKN8w гость |
|
ZMskyuza IP-штамп: frFRfUNajCjsA гость |
|
ZMskyuza IP-штамп: frFRfUNajCjsA гость |
|
ZMskyuza IP-штамп: frFRfUNajCjsA гость |
|
ZMskyuza IP-штамп: frFRfUNajCjsA гость |
|
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема » |