Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* ПЦР ДНК из Guthrie cards
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 18.09.2002 23:08     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Уважаемые коллеги! Помогите советом
У меня не идет ПЦР фрагмента 640 п.о. из сухих пятен крови.
При этом: 1)ПЦР этого же фрагмента из ДНК, выделенной из лейкоцитов или мышц (печени, и т.д.) идет нормально.
2)ПЦР меньших фрагментов из пятен идет хорошо.
Пятна обрабатываются метанолом, либо инкубируются в воде.
Возможно, кто-то делал ПЦР длинных фрагментов из сухих пятен
Заранее спасибо
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 19.09.2002 02:43     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

<blockquote><font size="1" face="Verdana, Helvetica, sans-serif">цитата:
Автор - <Lake>:
Уважаемые коллеги! Помогите советом
У меня не идет ПЦР фрагмента 640 п.о. из сухих пятен крови.
При этом: 1)ПЦР этого же фрагмента из ДНК, выделенной из лейкоцитов или мышц (печени, и т.д.) идет нормально.
2)ПЦР меньших фрагментов из пятен идет хорошо.
Пятна обрабатываются метанолом, либо инкубируются в воде.
Возможно, кто-то делал ПЦР длинных фрагментов из сухих пятен
Заранее спасибо

</blockquote>
В крови много железа в порфирине, оно может ПЦР ингибировать. Правда, пункт 2 это не объясняет. Тем не менее, попробуй выделять ДНК со смолой Chelex-100, помогает. Метод специально для выделения ДНК из сухих пятен крови, используется в криминалистике. Работает очень быстро, достаточно прикипятить образец в воде со смолой и отобрать супернатант. Сама смола используется для очистки воды от примесей, найти ее у химиков не сложно.
Удачи!
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 27.09.2002 12:47     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

А может быть опишешь точный протокол этого выделения? ТОчное соотношение воды и смолы, сколько кипятить, сколько брать навеску? Или ссылочку на место где можно прочитать этот протокол?
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 28.09.2002 00:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

Вот статья:
Walsh P, Metsger D, Higuchi R. Chelex 100 as a medium for
simple extraction of DNA for PCR-based typing from forensic
material. Biotechniques 1991;10:506 –13.
Вот протокол:
Chelex Protocol
1) Place 200 µl of 5% (w/v) Chelex® 100 (BioRad) into either a Perkin Elmer 0.2ml thin walled PCR tubes or a Corning-Costar polypropylene 96-well PCR tray and place on ice. Remember to stir chelex with magnetic stir bar and use wide bore pipette tips to aspirate and dispense chelex solution.
2) Place an extremely small piece of tissue (0.3mm2) into each tube and centrifuge (~1000 rpm for 1 min.) to settle tissue and chelex.
3) Cover tubes with strip caps (Perkin Elmer) or silicone sealing mats (Corning-Costar) and incubate at 60o C for 20 minutes.
4) Place in thermal cycler at 103o C for 25 minutes and then soak at 10o C.
5) Spin (2000 rpm for 3 min.) to settle tissue and Chelex® 100 beads. Remove 100 ul supernatant and place in new reservoir tray. This reservoir tray holds the DNA template. Store the reservoir tray at 4o C until finished with the samples and then store at -20o C. The remaining chelex/tissue solution can be freezed down as a back up stock.
6) Determine empirically the volume of DNA template to be used for PCR (typically 1 or 2 µl, however the actually quantity of DNA will be unknown).
А вот ссылка по которой все это можно найти: www.google.com
;-)))
Участник оффлайн! Redactor
admin.
Берлин, Германия



 прочитанное сообщение 28.09.2002 01:21     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Мне, наконец, пришло в голову как не терять интересные темы Форума. Я поставил ссылку на эту тему из протокола "Выделение ДНК из крови".
Ко всем участникам форума:
я весь форум не читаю, если будет что полезное, не сочтите за труд послать ссылку: redactor@molbiol.ru .
Участник оффлайн! foma

St.Petersburg, Nepal - Pokhara



 прочитанное сообщение 02.10.2002 12:03     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

А кто-нибудь реально использовал Chelex-100 для работы? Действительно исключает ингибиторы и как эфективно?
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 02.10.2002 14:01     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

<blockquote><font size="1" face="Verdana, Helvetica, sans-serif">цитата:
Автор - foma:
А кто-нибудь реально использовал Chelex-100 для работы? Действительно исключает ингибиторы и как эфективно?
</blockquote>
Ну дык! Я же и использовал, работает.
Участник оффлайн! foma

St.Petersburg, Nepal - Pokhara



 прочитанное сообщение 02.10.2002 14:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

тогда каринку присылай быстрее, пожалуйста.
Участник оффлайн! foma

St.Petersburg, Nepal - Pokhara



 прочитанное сообщение 02.10.2002 14:29     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

картинка фореза есть?
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 02.10.2002 14:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

<blockquote><font size="1" face="Verdana, Helvetica, sans-serif">цитата:
Автор - foma:
тогда каринку присылай быстрее, пожалуйста.
</blockquote>
Ну вы даете! Это ж года 3-4 назад было, в России еще. Но метод работает, зуб даю ;-)))
Участник оффлайн! foma

St.Petersburg, Nepal - Pokhara



 прочитанное сообщение 03.10.2002 18:26     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  ICQ
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

А протокол использовался для выделения из сухих пятен? У меня просто тоже по-видимому проблемы с ингибиторами. Но исходно имеются пробы венозной крови - интересует лейкоцитарная фракция. как модифицировать протокол? как я понял в протокол нужно включить отмытый осадок лейкоцитов. Лизис-нагреванием в воде с катионообменником?
Участник оффлайн!




 прочитанное сообщение 06.10.2002 15:40     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

Слушай, тут всех делов часа на три, включая ПЦР. Я бы уже сам попробовал на твоем месте, никто ведь все-равно гарантию не даст, что в твоем случае метод будет 100% работать :-)

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 12.12.17 02:04
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft