Rambler's Top100
Лёгкая версия форума* Виртуальная клавиатура  English  
Molbiol.ru | О проекте | Справочник | Методы | Растворы | Расчёты | Литература | Орг.вопросы
Web | Фирмы | Coffee break | Картинки | Работы и услуги | Биржа труда | Междисциплинарный биологический онлайн-журналZbio-wiki

NG SEQUENCING · ЖИЗНЬ РАСТЕНИЙ · БИОХИМИЯ · ГОРОДСКИЕ КОМАРЫ · А.А.ЛЮБИЩЕВ · ЗООМУЗЕЙ


Темы за 24 часа  [ Вход* | Регистрация* ]  
   



Форум: 
 

Щёлкните, чтобы внести в Избранные Темы* Вертикальный электрофорез
ИнтерЛабСервис - передовые технологии молекулярной диагностики
Операции: Хочу стать куратором* · Подписаться на тему* · Отправить страницу по e-mail · Версия для печати*
Внешний вид:* Схема · [ Стандартный ] · +Перв.сообщ.


 
Добавить сообщение в темуСоздать новую темуСоздать голосование
Участник оффлайн! Анастейша




 прочитанное сообщение 02.10.2017 11:19     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #1 множественное цитирование

Здравствуйте))ставила вертикальный электрофорез(полиакриламидный гель),это мой не первый гель,всегда все нормально было.сейчас вот такая картина.при приготовлении ПААГ придерживалась следующей методике: (ACRILAMIDE 2K = 2,32ГР, BTS-ACRYLAMIDE = 0,08гр, TAE 50x = 400 мкр, Н2О = довели до 40 мл)
1.перемешали на магнитной мешалке полиакриламидную смесь до полного растворения, добавили 40 мкл ТЕМЕDа,
2.отлили 5 мл на пробку и поставили обратно на магнитную мешалку,
3.к 5 мл добавили 12 мкл ТЕМЕDа и 62 мкл PSA 10% и перемешали,
4.залили пробку в камеру,
5.к оставшиеся 35 мл полиакриламидной смеси добавили 293 PSA 10%, перемешали и залили в камеру,
6.оставили полимеризоваться,
7.по истечению времени (минут 40) внесли пцр пробы по 5 мкл и 2 мкл маркера,
8.электрофорез шёл 1 час 20 минут, сняли гель под струёй воды,
9.выдержали гель в бромистом этидии 5 минут,
10.положили гель на трансиллюминатор и получили следующую картину:

Картинки:
P9297310.JPG - кликните, чтобы открыть увеличенную картинку
P9297310.JPG — (1.36мб)   

Участник оффлайн! ksm
Постоянный участник



 прочитанное сообщение 02.10.2017 13:41     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #2 множественное цитирование

да вам нужно премию выписать!!!
Участник оффлайн! Ivalex
Участник



 прочитанное сообщение 02.10.2017 13:45     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #3 множественное цитирование

Мне кажется, или вы забыли такую маленькую деталь как вопрос? Или это гордость творца?

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): vb
Участник оффлайн! Анастейша




 прочитанное сообщение 02.10.2017 14:44     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #4 множественное цитирование

вопрос заключается в том,почему он получился таким нечетким и пятнистым, в чём может быть причина?))
Участник оффлайн! dk
Постоянный участник
Россия



 прочитанное сообщение 02.10.2017 14:57     Сообщение для модератора         Фотография  Личное письмо  Отправить e-mail  Web-адрес
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #5 множественное цитирование

Анастейша, а что Вы хотите от участников форума-то? На геле, вроде как микросателлиты (или фрагменты)? Вроде всё видно. Кроме опечаток типа acrylamide и bis-acrylamide, ну я бы ещё красил 15 минут.
Участник оффлайн! Ivalex
Участник



 прочитанное сообщение 02.10.2017 15:04     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #6 множественное цитирование

(Анастейша @ 02.10.2017 15:44)
Ссылка на исходное сообщение  вопрос заключается в том,почему он получился таким нечетким и пятнистым, в чём может быть причина?))


Пятнистый потому что грязный. Стекла плохо мылись или что-то еще.
Сравнение с серебряным крашением, конечно, некорректное, но вот у нас был плохой тиосульфат, от него была куча пятен. Поменяли - стало хорошо smile.gif

А сам гель достаточно четкий, остальное - работа в графическом редакторе для улучшения визуализации результата. Контраст, цвета, все такое.
Участник оффлайн! X34




 прочитанное сообщение 02.10.2017 15:12     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #7 множественное цитирование

не, нучо вы налетели. неплохой гель, я лет 20 назад такие же гонял, когда сибирской зелени не было красили серебром, а там бывало фон покруче был.
а вам анастасия над бы к шефу подойти и тонко намекнуть, что де 21-й век на дворе, хорош этидием молодых симпатичных барышней травить
Участник оффлайн! X34




 прочитанное сообщение 02.10.2017 15:16     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #8 множественное цитирование

(гель @ 02.10.2017 15:18)
Ссылка на исходное сообщение  ну ландно чиго на девушку наехали ну касяк у меня однажды китайсский аспирант за ночь умудрился обламать все ухи на вертикольных гелях  smile.gif

а вот за это в 90-х просто убивали
Участник оффлайн! Анастейша




 прочитанное сообщение 02.10.2017 15:49     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #9 множественное цитирование

нам выбирать не приходится,что Москва пришлёт,такой химией и пользуемся))не смотря на наши рекомендации,присылают не то что просим)
Участник оффлайн! Анастейша




 прочитанное сообщение 02.10.2017 15:52     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #10 множественное цитирование

да мы всё прогнали через фотошоп и более или менее всё стало на свои места,но эти пятна меня смущают,я думаю,что это ещё могли пузыри воздуха попасть между гелем и стеклом при заливании бромистым этидием.мне просто интересно послушать мнения участников,что могло бы быть)
Участник оффлайн! -Ъ-
Постоянный участник
Москва



 прочитанное сообщение 02.10.2017 16:10     Сообщение для модератора         Личное письмо
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #11 множественное цитирование

Стекла у вас были пыльные и облапанные-облизанные no.gif ПААГ любит ТВЕ.
После этидия 10-15 мин отмачивайте (отмывайте) в воде в два захода.
И вообще, с ДНК еще в прошлом веке работали на агарозе, 3-4%. АА, если не денатурирующий, все размеры фрагментов искажает в зависимости от состава.

Всего благодарностей: 1Поблагодарили (1): dk
Участник оффлайн! Анастейша




 прочитанное сообщение 02.10.2017 16:14     Сообщение для модератора         Личное письмо  Отправить e-mail
Цитировать Поместить сообщение в колонку новостей  URL #12 множественное цитирование

а почему бы и не бромистый этидий,чем он вам так не угодил?))

*




Кнопка "Транслит" перекодирует
текст из транслита в кирилицу.
Правила перекодировки здесь;
текст в квадратных скобках'[]'
не преобразуется.
Имя:

 преобразовывать смайлики · показать смайлики
Назначение кнопок:

   Поблагодарить автора сообщения — поблагодарить автора
   Удалить сообщение — удалить
   Редактировать сообщение — редактировать
   Поместить сообщение в колонку новостей — поместить в колонку новостей
   Цитировать — цитировать сообщение
   не входит в цитирование/входит в цитирование — цитировать несколько
   Отметить СПАМ-сообщение — обозначить спам
   Сообщение для модератора — связь с модератором
   Участник онлайн!/Участник оффлайн! — автор онлайн/оффлайн
   Фотография — фотография автора

   - остальные обозначения -
 
   *
« Предыдущая тема · Молекулярная и клеточная биология · Следующая тема »
Быстрый ответДобавить сообщение в темуСоздать новую тему

Rambler   molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов              

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
Ваш форум  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама  ·  Дата и время: 17.10.17 05:07
Bridged By IpbWiki: Integration Of Invision Power Board and MediaWiki © GlobalSoft