Полная версия страницы  English  

очередной тупой вопрос

gargulia, 31.10.2012 01:18
Выделяем из асцита крысиного макрофаги и культивируем их с опухолевыми клетками. Пока что пристреливаемся, поэтому используем как можно проще методики. Проблема: нужно дифференцировать МФ в данной суспензии, но еще требуется тест - жив-мертв. Суспензию красим трипановым синим ( 0,4%, на физ растворе) в соотношении 1:1, в течение 1 минуты, затем в камеру Горяева. Трипановый синий, как известно, красит мертвые клетки. Но живые-то макрофаги его вполне могут фагоцитировать...как быть, ? Клетки опухоли отличаются от МФ по размеру, по этому с этим легче, хотя было бы здорово если бы дохлые МФ светились еще. Но флюоресцентными красителями пока работать не могу. Если есть методики, как эффективно дифференцировать макрофаги в клеточной суспензии, правильно их окрашивать, то буду очень рада получить ссылку. И вообще ссылки на протоколы и методики работы с крысиными макрофагами, опухолевыми и перитонеальными. Спасибо за объяснения на пальцах и как для тупых - они особенно ценны))
Агроном, 31.10.2012 09:59
Особенно ценно покопаться в пабмеде.
bioasg, 20.11.2012 13:06
по макрофагам можете посмотреть книжку "новые методы культур животных тканей", но только новыми они были в 1976 году, естественно :-) но там есть глава по макрофагам. Макрофаги - очень адгезивные клетки, есть вариант поставить матрасик на часок в инкубатор, через час что не прикрепилось - слить. В культуре первые 2-3 дня МФ выгладят похожими на котлеты, цитоплазма может быть с вакуолями. Дней через 7 они перестанут фагоцитировать, появятся отростки, как правило по 2 на клетку. По фагоцитозу: можно попробовать латекс. Где-то видел протокол фагоцитоза с дрожжами и акридиновым оранжевым, но сейчас так с ходу и не найду. если надо чтобы в культуре точно одни макрофаги были - тогда магнитиками надо. но это при условии наличия денежек. Могут ли макрофаги фагоцитировать трипанку - так вы налейте и посмотрите сами :-) . С другой стороны, это мешать не должно. дохлые клетки окрасятся мгновенно и гомогенно. Если МФ фагоцитирует краситель, то это произойдет не сиюминутно. Ну если и фагоцитирует - будет гранула в лизосоме, только и всего. Хотя, может я и ошибаюсь. надо проверить.
Guest, 20.11.2012 17:10
Ей в смеси надобно. а не на матрасике
Дядя ФАКСер, 21.11.2012 22:25
Flow..красить-и гонять, иначе- трэш...
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2014 Invision Power Services, Inc.