Полная версия страницы  English  

Доморощенные магносорбенты

Pages: 1, 2, 3, 4
genseq, 11.09.2013 20:11
На днях наловчился получать магносорбенты. Пока сделал три варианта:
1. Силикатные.
2. Фосфатные.
3. Цинковые.
С первыми - силикатными - всё более или менее понятно. Нужны для выделения ДНК, и проверка их работоспособности - вопрос времени. А вот зачем могут понадобиться фосфатные? confused.gif Не исключено, что их можно использовать вместо фосфоцеллюлозы. Да и просто в качестве ионообменника.
Цинковые, похоже, нигде пока не используются, но они должны очень хорошо связывать и ДНК, и РНК, и все прочие низко- и высокомолекулярные фосфат-содержащие соединения. Возможно и гистидин-содержащие.

Буду признателен за любые предложения. Если предложения будут не теоретические, а практические (по их испытаниям), то берусь обеспечить и магносорбентами, и магнитными штативами:
http://molbiol.ru/forums/index.php?act=Att...=post&id=181131
comp3v, 12.09.2013 07:49
а для пришивания антител никакие из них не подходят? чтобы иммунопреципитацию делать
genseq, 12.09.2013 09:17
(comp3v @ 12.09.2013 05:49)
Ссылка на исходное сообщение  а для пришивания антител никакие из них не подходят? чтобы иммунопреципитацию делать


Хорошая идея! Фосфатные должны неплохо сшиваться с аминными группами карободимидом. Только для активации такой сшивки, в отличие от карбоксильных, используется не гидроксисукцинимид, а какая-то другая фиговинкаconfused.gif (забыл название). Связь P-N кислотолабильная, но в обычных условиях вполне стабильная.
comp3v, 12.09.2013 13:57
в общем, если удастся такое сделать, было бы вполне востребовано.
Ещё вот, вариация на ту же тему - кобальтовые (Co2+ или Ni2+) магнитные бидсы для выделения His-меченых белков, как альтернатива TALON'у - это вот мы бы хоть прямщас купили.
inview, 12.09.2013 15:27
(comp3v @ 12.09.2013 14:57)
Ссылка на исходное сообщение  в общем, если удастся такое сделать, было бы вполне востребовано.
Ещё вот, вариация на ту же тему - кобальтовые (Co2+ или Ni2+) магнитные бидсы для выделения His-меченых белков, как альтернатива TALON'у - это вот мы бы хоть прямщас купили.
Тоже подумал про кобальтовые и никелевые сорбенты, но не для гистидиновых гибридов, а для выделения некоторых металл-связывающих белков из биожидкостей. Такое было бы интересно потестить. Цинк в этом смысле менее подходящ.
comp3v, 12.09.2013 15:29
(genseq @ 12.09.2013 15:42)
Ссылка на исходное сообщение  Подозреваю, что His-тэги с цинком будут связываться не хуже, чем с никелем. Эти подозрения вселяют некоторые публикации. Например:
http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/P.../BCA-02-125.pdf
хммм, вот тут не уверен. Всё-таки один факт наличия взаимодействия, показанного в статье, вовсе не означает, что это взаимодействие будет достаточно сильным для выделения белков. Да и неспроста, наверное, все производители делают только кобальтовые либо никелевые сорбенты.

Поэкспериментировать - можно попробовать, месяца через полтора планирую снова вернуться к выделениям His-меченых белков. Да, забыл сказать - у меня протокол выделения в денатурирующих условиях (6M гуанидин-хлорид) - выдержат ваши сорбенты такое?
genseq, 12.09.2013 16:01
(comp3v @ 12.09.2013 13:29)
Ссылка на исходное сообщение  хммм, вот тут не уверен. Всё-таки один факт наличия взаимодействия, показанного в статье, вовсе не означает, что это взаимодействие будет достаточно сильным для выделения белков. Да и неспроста, наверное, все производители делают только кобальтовые либо никелевые сорбенты.

Поэкспериментировать - можно попробовать, месяца через полтора планирую снова вернуться к выделениям His-меченых белков. Да, забыл сказать - у меня протокол выделения в денатурирующих условиях (6M гуанидин-хлорид) - выдержат ваши сорбенты такое?


Уговорили. Сделаю и никелевые. smile.gif
Сорбенты сферические, но сугубо неорганические. Теоретически гуанидин на них действовать не должен. rolleyes.gif
genseq, 12.09.2013 21:20
Цинк связывает His6 лучше никеля в 20 раз!
http://peds.oxfordjournals.org/content/21/8/529.long


Файл/ы:

скачать файл Fluorescence_imaging_of_His_tag_fused_proteins.pdf
размер: 1.87
кол-во скачиваний: 299


comp3v, 13.09.2013 06:54
ну, вот в этом обзоре по IMAC пишут, что с цинком тоже вполне себе работало, хотя и немного похуже чем с никелем - см. Fig. 27.9
guest: ммм , 13.09.2013 07:49
Если вы собираетесь использовать неорганическую матрицу для сорбции белков, моут быть проблемы, как с неспецифической сорбцией, так и с необратимой сорбцией на матрице.
genseq, 13.09.2013 07:50
Судя по всему, Zn связывает His6 не хуже (или лучше) Ni, но последний, в отличии от первого, не реагирует на фосфаты (см. табл. 27.2 этого обзора) и на бета-меркаптоэтанол. А цинк, похоже, вяжется и с сульфгидрильными группами, и с нуклеотидами, и с РНК. Т.е. при недостатке сорбента они могут мешать связыванию His6-рекомбинантов и потребуется предварительная очистка. Хотя в обзоре Zn работал очень неплохо. Правда, они чистили белок, содержащий Zn-finger.

Zn_Ni.JPG - кликните, чтобы открыть увеличенную картинку


Файл/ы:

скачать файл IMAC_Review.pdf
размер: 1.33
кол-во скачиваний: 33547


avial, 13.09.2013 13:39
А банальные силикатные на пробу поюзать можно для ДНК? Сейчас как раз играюсь с различными типами частиц.
genseq, 13.09.2013 17:37
(avial @ 13.09.2013 11:39)
Ссылка на исходное сообщение  А банальные силикатные на пробу поюзать можно для ДНК? Сейчас как раз играюсь с различными типами частиц.


Можно, но не сегодня. Препарат сможете забрать следующей неделе. Явки и пароли передам по E-mail.
avial, 13.09.2013 23:48
Спасибо!

В процессе игр выяснил, что в отмывочном буфере Силекса явно содержится что-то типа эфира (по запаху) - а для чего?
genseq, 14.09.2013 08:01
(avial @ 13.09.2013 21:48)
Ссылка на исходное сообщение  Спасибо!

В процессе игр выяснил, что в отмывочном буфере Силекса явно содержится что-то типа эфира (по запаху) - а для чего?


Не знаю как у Силекса, но за бугром "отмывочный буфер" - это, как правило, 70% этанол. Вместо этанола можно использовать изопропанол (ИПС), который я покупаю в лакокрасочном отделе хозяйственного магазина и использую вместо этанола на стадии силиконизации магносорбентов. Правда, сейчас ИПС завозить перестали и пришлось перейти на ацетон. Кстати, об ацетоне. Можно попытаться заменить им спирт в отмывочном буфере. shuffle.gif
avial, 14.09.2013 23:52
С этанолом никогда нельзя убрать носиком полностью последнюю каплю жидкости со дна пробирки, а с буфером Силекса пробирка остается почти сухой - подозреваю, что эфир там именно для этого, поверхностное натяжение менять.
Но в составе ничего такого нет, обманывают?
T2006, 23.09.2013 12:06
(genseq @ 11.09.2013 21:11)
Ссылка на исходное сообщение  
Буду признателен за любые предложения. Если предложения будут не теоретические, а практические (по их испытаниям), то берусь обеспечить и магносорбентами, и магнитными штативами:
http://molbiol.ru/forums/index.php?act=Att...=post&id=181131[/url]


Genseq, нас интересуют магносорбенты на пробу, беремся их проверить )))
Как с Вами связаться?
-Ъ-, 23.09.2013 15:42
Генсек мне давал на испытание (то бишь сравнить с моими магносорбентом и нат. силикой), а мне все некогда frown.gif . Приходите, отолью, если, конечно, Генсек не возражает. smile.gif
Баба с возу - потехе час. rolleyes.gif
kblag, 26.09.2013 08:05
Я бы тоже хотел попробовать.
Ещё есть возможность?
genseq, 02.10.2013 08:37
Пузырёк, отправленный обычной посылкой в Новосибирск, застрял в Москве. Наверное, не понравился рентгеновскому аппарату. frown.gif
А вот отправленные одновременно с ним магнитные штативы на Казанском вокзале отметились 25 сентября и должны быть уже где-то на подходе к Новосибирску. beer.gif

Появилась идея магносорбенты рассылать в письмах - в пакетиках, содержащих по 1...2 г. сухого порошка, похожего на обычную глину. Интересно, письма рентгеном проверяют? confused.gif
genseq, 10.10.2013 17:49
Первая проверка силикатных сорбентов прошла успешно. Превосходят магносорбенты Промеги и Силекса. jump.gif Не уступают ИзоГеновским. beer.gif
Guest, 11.10.2013 08:24
(genseq @ 10.10.2013 17:49)
Ссылка на исходное сообщение  Первая проверка силикатных сорбентов прошла успешно. Превосходят магносорбенты Промеги и Силекса.  jump.gif Не уступают ИзоГеновским. beer.gif


ну и сколко ДНКа из 30 миклов кровушки ? smile.gif

http://www.lifetechnologies.com/us/en/home...-universal.html
-Ъ-, 15.10.2013 10:36
(genseq @ 10.10.2013 18:49)
Ссылка на исходное сообщение  Первая проверка силикатных сорбентов прошла успешно. Превосходят магносорбенты Промеги и Силекса.  jump.gif Не уступают ИзоГеновским. beer.gif

Как бы ознакомиться с протоколом испытаний? Ведь магносорбенты из одного кита могут не работать с растворами кита другого производителя. Я такое наблюдал когда сравнивал "все своё" с промеговским магносорбентом.
-Ъ-, 15.10.2013 10:41
(Guest @ 11.10.2013 09:24)
Ссылка на исходное сообщение  ну и сколко ДНКа из 30 миклов кровушки ? smile.gif

http://www.lifetechnologies.com/us/en/home...-universal.html

Потери - не более 20%, многое зависит от состояния "кровушки".
В этой ссылке не совсем аналог, того что делает Генсек.
genseq, 15.10.2013 10:59
Вторые испытания с той же партией сорбентов провалились. Похоже, из-за зарастания какой-то микрофлорой. Сорбент норовил закупорить носик пипетки, да ещё и ингибировал ПЦР. Правда, в них участвовала ещё одна партия, приготовленная позднее. С ней всё прошло отлично.

Похоже, зря я в этот раз отмыл сорбенты фосфатным буфером. В сочетании со следами аммония буферный раствор оказался весьма питательным. И похоже, что не зря Силекс консервирует свои сорбенты азидом натрия. Теперь тоже буду всё консервировать.


Файл/ы:

скачать файл 091013_xy__________1.pdf
размер: 371.38
кол-во скачиваний: 365


genseq, 15.10.2013 11:22
С протоколами Real-time дела не имел и даже не пытался в них вглядываться. Показалось всё очень запутанным, поэтому целиком доверился выводам испытателя (kblag). Кстати, это он разрешил выложить здесь протокол целиком, за что приношу ему свою искреннюю благодарность. beer.gif

Сейчас попытался вглядеться. Если ограничиться только рассмотрением результатов с bACT, то даже первая партия (0,8...0,9) выглядит вполне конкурентоспособно. Вторая там обозначена как 1,5...2,0. Кажется, выглядит тоже вполне достойно. Цифры в обозначении указывают на средний размер частиц магносорбента. rolleyes.gif
-Ъ-, 15.10.2013 11:43
(genseq @ 15.10.2013 12:22)
Ссылка на исходное сообщение  С протоколами Real-time дела не имел и даже не пытался в них вглядываться. Показалось всё очень запутанным, поэтому целиком доверился выводам испытателя (kblag). Кстати, это он разрешил выложить здесь протокол целиком, за что приношу еме свою благодарность.

Сейчас попытался вглядеться. Если ограничиться только рассмотрением результатов с bACT, то даже первая партия (0,8...0,9) выглядит вполне конкурентоспособно. Вторая там обозначена как 1,5...2,0. Кажется, выглядит тоже вполне достойно. Цифры в обозначении указывают на средний размер частиц магносорбента.

Протокол явно "ДСП". smile.gif Чтобы разбираться, нужно знать "шриф-код" обозначений. Короче, без бутылки не разобраться. wink.gif
-Ъ-, 15.10.2013 13:18
Реал-тайм это, конечно, хорошо, но в лаборатории должны быть еще и классические методы - необходимо смотреть в первую очередь как выглядит ДНК на агарозном форезе. Тем более что сорбенты имеют привычку рвать на кусочки высокомолекулярную ДНК, особенно если размер сорбента существенно меньше микрона.
Сомневаюсь что они успели так быстро зарасти в холодильнике. У тебя же есть Проклин, в нейтральных и кислых средах лучше не придумаешь. NaN3 тоже не помешает.
genseq, 15.10.2013 15:57
В зарастании я и сам сильно сомневаюсь. Скорее всего, мелкие частички после отстаивания хуже суспендируются. На ощупь магносорбенты не отличаются от глины. Если хорошенько не протрясти на вортексе, то могут остаться комочки, забивающие носики. Если причина в этом, то их проверку нельзя считать неудачной. Точнее - их проверка показала, что не следует делать силикатные сорбенты слишком мелкими (< 1 мкм).

Что касается результатов с сорбентами 1,5...2 мкм, то мне они кажутся вполне достойными. Попытался обобщить данные протокола испытаний. Не уверен, что сделал это правильно, но получил такую табличку значений Cq Mean (среднее количество циклов) для своего сорбента (1,5...2) и сорбентов сравнения (126 и 320). Различия незначительны и находятся в пределах статистической достоверности:
Cq_Mean.JPG - кликните, чтобы открыть увеличенную картинку
genseq, 16.10.2013 10:34
Кажется, проясняется механизм связывания ДНК/РНК с силикатами.
Нейтрально заряженные силанольные группы (Si-OH) образуют с отрицательно заряженными фосфатными группами (P-O) в кислой среде диэфирные связи (Si-0-P). Такие связи стабильны в кислой среде, но легко гиролизуются в щелочных условиях.

Интересно, что этот известный в неорганической химии факт почему-то никто не ассоциирует с механизмом сорбции ДНК/РНК силикатами. Или я это просто не нашёл?
-Ъ-, 16.10.2013 11:12
(genseq @ 16.10.2013 11:34)
Ссылка на исходное сообщение  Кажется, проясняется механизм связывания ДНК/РНК с силикатами.
Нейтрально заряженные силанольные группы (Si-OH) образуют с отрицательно заряженными фосфатными группами (P-O) в кислой среде диэфирные связи (Si-0-P). Такие связи стабильны в кислой среде, но легко гиролизуются в щелочных условиях.

Интересно, что этот известный в неорганической химии факт почему-то никто не ассоциирует с механизмом сорбции ДНК/РНК силикатами. Или я это просто не нашёл?

На самом деле механизм сорбции другой, где кроме рН среды не менее важную роль играет ионная сила.
А какова роль 5 М хаотропных агентов? Причем не все хаотропы годятся для этого! Ты не нашел, все давно расписано. smile.gif
genseq, 16.10.2013 18:53
(-Ъ- @ 16.10.2013 09:12)
Ссылка на исходное сообщение  На самом деле механизм сорбции другой, где кроме рН среды не менее важную роль играет ионная сила.
А какова роль 5 М хаотропных агентов? Причем не все хаотропы годятся для этого!  Ты не нашел, все давно расписано. smile.gif


Всё давно расписано:
1. Высокая ионная сила нейтрализует отталкивание ДНК/РНК отрицательно заряженной силикатной поверхностью.
2. Хаотропы к сорбции вообще отношения не имеют. Они лизируют вирусы и денатурируют белки, связанные с нуклеиновыми кислотами. Ещё они денатурируют ДНКазы и РНКазы.

Давно описаны методики выделения без хаотропов. Например:
картинка: Buffers.JPG


Файл/ы:

скачать файл Germany_2005.pdf
размер: 141.22
кол-во скачиваний: 307


T2006, 17.10.2013 08:22
(-Ъ- @ 15.10.2013 11:36)
Ссылка на исходное сообщение  Как бы ознакомиться с протоколом испытаний? Ведь магносорбенты из одного кита могут не работать с растворами кита другого производителя. Я такое наблюдал когда сравнивал "все своё" с промеговским магносорбентом.


Просто заменили маг. сорбенты из кита Промеги на другие различные. И если со своими "родными" растворами промеговские частицы заметно хуже работали, чем магносорбенты от Генсека и из Изогена - это тоже ведь о чем-то говорит?
Проблема возникает с нормированием по концентрации и размеру частиц разного производства - одни растворы частиц более концентрированные, др. менее, одни частицы крупнее, др. мельче. Пока брали так, чтобы частиц для сорбции было заведомо достаточно.
-Ъ-, 17.10.2013 11:24
(T2006 @ 17.10.2013 09:22)
Ссылка на исходное сообщение  Просто заменили маг. сорбенты из кита Промеги на другие различные. И если со своими "родными" растворами промеговские частицы заметно хуже работали, чем магносорбенты от Генсека и из Изогена - это тоже ведь о чем-то говорит?
Проблема возникает с нормированием по концентрации и размеру частиц разного производства - одни растворы частиц более концентрированные, др. менее, одни частицы крупнее, др. мельче. Пока брали так, чтобы  частиц для сорбции было заведомо достаточно.

Спасибо, очень ценная инфа. Я тоже сравнивал в свое время все доступные магносорбенты на своем ките, со своими растворами, доведенными "до ума" на нативной силике. При всем уважении к Промеге, их сорбент рвал ДНК на мелкие куски (ДНК фага Лямбда превращалась в шмерок) и выход был меньше 30%.

Очень мелкий сорбент , меньше микрона, оптимально использовать при выделении ДНК/РНК из плазмы, сыворотки или др., а более крупный, 2-10 мкм, - из образцов с избытком материала (кровь, гомогенаты тканей и т.п.).
Но лучше всего держать под рукой ОДИН сорбент на все случаи жизни и варьировать его количество в зависимости от природы иссл. образца (количества ДНК в образце).
Если возникнут вопросы при испытании - обращайтесь, можно в личку.
-Ъ-, 17.10.2013 12:07
(genseq @ 16.10.2013 19:53)
Ссылка на исходное сообщение  Всё давно расписано:
1. Высокая ионная сила нейтрализует отталкивание ДНК/РНК отрицательно заряженной силикатной поверхностью.
2. Хаотропы к сорбции вообще отношения не имеют. Они лизируют вирусы и денатурируют белки, связанные с нуклеиновыми кислотами. Ещё они денатурируют ДНКазы и РНКазы.

Давно описаны методики выделения без хаотропов. Например:
картинка: Buffers.JPG

Генсек, мы с тобой сравниванием "мягкое" с "теплым" - посмотри какой
в статье рН - 4!!!! А я всегда работаю в нейтральной среде. Поэтому можешь дальше теоретизировать, но без меня. wink.gif - механизмы отличаются как земля и небо.
Кстати, статья так себе хоть и новая. Нет доверия авторам использующим Трис-ацетат буфер с рН = 4. Трис - буферы с рН меньше 7 это не буферы. tongue.gif

Еще добавлю - элюция ДНК с сорбента 10 мин при 80 оС - это "финиш", а использование Протеиназы К в современных китах для автоматизации процесса - тоже шаг не вперед. Так что думай, Чапай... smile.gif
arndt, 17.10.2013 12:28
(-Ъ- @ 17.10.2013 12:24)
Ссылка на исходное сообщение  Спасибо, очень ценная инфа. Я тоже сравнивал в свое время все доступные магносорбенты на своем ките, со своими растворами, доведенными "до ума" на нативной силике. При всем уважении к Промеге, их сорбент рвал ДНК на мелкие куски (ДНК фага Лямбда превращалась в шмерок) и выход был меньше 30%.

Очень мелкий сорбент , меньше микрона, оптимально использовать при выделении ДНК/РНК из плазмы, сыворотки или др., а более крупный, 2-10 мкм, - из образцов с избытком материала (кровь, гомогенаты тканей и т.п.).
Но лучше всего держать под рукой ОДИН сорбент на все случаи жизни и варьировать его количество в зависимости от природы иссл. образца (количества ДНК в образце).
Если возникнут вопросы при испытании - обращайтесь, можно в личку.


Но лучше всего держать под рукой ОДИН сорбент на все случаи жизни и smile.gif

ПротеинА/Г магнитные шарики для ИП smile.gif

можно в такие вляпатся smile.gif
-Ъ-, 17.10.2013 12:47
(arndt @ 17.10.2013 13:28)
Ссылка на исходное сообщение  Но лучше всего держать под рукой ОДИН сорбент на все случаи жизни и  smile.gif

ПротеинА/Г магнитные шарики для ИП smile.gif

можно в такие вляпатся smile.gif

Мне должно наверное присниться что это такое А/Г и ИП. confused.gif
Ты же любишь на каждый звук ссылку кидать! confused.gif Неисправим чел. no.gif
comp3v, 17.10.2013 12:51
это всего лишь Protein A/Protein G - для иммунопреципитации
arndt, 17.10.2013 12:51
(-Ъ- @ 17.10.2013 13:47)
Ссылка на исходное сообщение  Мне должно наверное присниться что это такое А/Г и ИП. confused.gif
Ты же любишь на каждый звук ссылку кидать! confused.gif  Неисправим чел. no.gif

http://www.lifetechnologies.com/de/de/home...cipitation.html
-Ъ-, 17.10.2013 13:40
Пока в этой теме речь не идет о SPRI-магношариках с -СООН группой. Ты вечно витаешь в облаках - мы пока говорим о сорбенте с Si-OH и выделении тотальной ДНК или РНК.
И причем тут это? http://www.lifetechnologies.com/de/de/home...cipitation.html
Мало ли на свете магносорбентов. confused.gif
arndt, 17.10.2013 15:17
(-Ъ- @ 17.10.2013 14:40)
Ссылка на исходное сообщение  Пока в этой теме речь не идет о СПРИ-магношариках с -СООН группой. Ты вечно витаешь в облаках - мы пока говорим о сорбенте с Си-ОХ и выделении тотальной ДНК или РНК.
И причем тут это? хттп://щщщ.лифетечнологиес.цом/де/де/хоме...ципитатион.хтмл
Мало ли на свете магносорбентов. confused.gif


сколко можно о стекляшках говорить smile.gif
genseq, 17.10.2013 15:32
(-Ъ- @ 17.10.2013 10:07)
Ссылка на исходное сообщение  Генсек, мы с тобой сравниванием "мягкое" с "теплым" - посмотри какой
в статье рН - 4!!!! А я всегда работаю в нейтральной среде. Поэтому можешь дальше теоретизировать, но без меня. wink.gif - механизмы отличаются как земля и небо.
Кстати, статья так себе хоть и новая. Нет доверия авторам использующим Трис-ацетат буфер с рН = 4. Трис - буферы с рН меньше 7 это не буферы. tongue.gif

Еще добавлю - элюция ДНК с сорбента 10 мин при 80 оС - это "финиш", а использование Протеиназы К в современных китах для автоматизации процесса - тоже шаг не вперед. Так что думай, Чапай... smile.gif


Статья старенькая (2005 г.). Огрехов в ней много, но и изюминка имеется. Даже две. Первая - отсутствие хаотропов, причём не случайное, а вполне обоснованное. Вторая - низкий pH (4,0), что обеспечивает ингибирование РНКаз не хуже хаотропов. umnik.gif

Понятно, что Tris нужно заменить ацетатом, а дорогую протеиназу К дешёвыми аптечными таблетками ацидин-пепсина. shuffle.gif

В нейтральной среде (pH 7,0) сорбировать можно, но есть риск нарваться на плохое связывание при небольшом защелачивании: rolleyes.gif
картинка: pH.JPG

Так что думай, Чапай ... smile.gif
-Ъ-, 17.10.2013 16:46
Ингибировать Нуклеазы, особенно РНК-азы, при рН 4, в присутствии сульфата аммония такой низкой конц.ции еще никому не удавалось. В RNA Later (это подкисленный сульфат аммония с высокой концентрацией, 60-ые годы) РНК-азы действительно инактивируются, но обратимо, т.е не денатурируют. Только Протеназа К или хаотропы.
А использование его, RNA Later, напрямую как связывающую ДНК с силикафильтром среду не увенчалось успехом.
Про аптечные реактивы вообще не серьезно говорить - неуважение к себе, пардон. В свое время, собрав кучу сериновых протеаз, пытался изобразить замену протеиназе К - фиг вам - лучше протеиназы К против нуклеаз нет НИЧЕГО. Но как она будет работать в кислой среде - это еще бАльшой вопрос.
Кстати, у меня кривая получается ровно наоборот. tongue.gif
Я при выделении ДНК полностью избавляюсь от гемоглобина и гепарина. И еще, в том же связывающем растворе очень легко солюбилизируется агароза, свернувшаяся кровь и мягкие ткани. Так что, дерзай, если не хочешь прислушаться к 20-летнему опыту совершенствования одного метода. smile.gif
Многие беды от избытка знаний. umnik.gif
Я недавно говорил - надо уметь фильтровать инфу из литературы. cool.gif
-Ъ-, 17.10.2013 16:54
(arndt @ 17.10.2013 16:17)
Ссылка на исходное сообщение  сколко можно о стекляшках говорить smile.gif

Ну займи себя чем-нибудь confused.gif
arndt, 17.10.2013 17:13
(-Ъ- @ 17.10.2013 17:54)
Ссылка на исходное сообщение  Ну займи себя чем-нибудь confused.gif


магношарики имеют смысл когда робот - у меня генмол в основном простаивает -
пару раз включали smile.gif

а так - колонки Зимо или Квакаген smile.gif

http://www.biotechniques.com/multimedia/ar...tion_44229a.pdf
-Ъ-, 17.10.2013 17:33
(arndt @ 17.10.2013 18:13)
Ссылка на исходное сообщение  магношарики имеют смысл когда робот - у меня генмол в основном простаивает -
пару раз включали smile.gif

а так - колонки Зимо или Квакаген smile.gif

http://www.biotechniques.com/multimedia/ar...tion_44229a.pdf

(arndt @ 15.10.2013 17:56)
Ссылка на исходное сообщение  
на магносорбентах китах нет чистой ДНК - иногда на ТакМанах при 100 - 50 нанограмм нифига нет - потом разводиш до 1 нанограмм - все OK
у тебя термин "ингибировал" достаточно старомодный в реал-тайм ПЦР - если я развожу матрицу в 10 раз а у меня цикл скачет с 38 на 28 eek.gif
кабутто на твоих менше постав 10-кратные разведения против плазмиды и покажи народу

Заметьте, не я это предложил ©. no.gif (Покровские Ворота)
avial, 17.10.2013 23:33
http://www.nexttec.biz/
arndt, 18.10.2013 10:31
(avial @ 18.10.2013 00:33)


100 рублей на пробу smile.gif

http://www.biozym.com/desktopmodules/websh...aus%20Bakterien
arndt, 18.10.2013 12:00
(avial @ 18.10.2013 12:24)
Ссылка на исходное сообщение  Ну кто не хочет обращаться к разработчикам - тратит по 100 рублей на пробу. А вообще этот сорбент родом из ИБХ.


я уже заказал пробнички этих "чудо-колонок" - посмотрим на цена-качество smile.gif
-Ъ-, 18.10.2013 15:54
Принцип метода тот же - сорбция на силике и последующие отмывки, но с использованием МАНИФОЛДа с вакуумом. Тот же микроколоночный метод с силикафильтрами и ничего нового. Если это не так и сорбент это особенный и родом и ИБХ - дайте ссылку, посмотрим что за новинка. Но я уверен, что это манифолдный вариант в комплекте с многоканальной (8) пипеткой - самый оптимальный для масштабирования пробоподготовки и не нужно покупать роботизированные станции. Дороговизна из-за манифолда с готовым сорбентом. Вот все. smile.gif
Это мы уже обсуждалы на этом форуме...
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2018 Invision Power Services, Inc.