Полная версия страницы  English  

поли(А)хвост и гис-таг

HeskaD, 26.03.2020 17:27
1) почему нужен отдельный фермент для полиаденилирования? (или так: почему нельзя закодировать поли(А)хвост в днке)
2) есть Т7 РНК полимераза с 6-гис-тагом. вопрос: как и зачем проводят очистку гис-тага?

всем спасибоsmile.gif
Daemonarchestratygos, 13.04.2020 05:16
(HeskaD @ 26.03.2020 15:27)
Ссылка на исходное сообщение  1) почему нужен отдельный фермент для полиаденилирования? (или так: почему нельзя закодировать поли(А)хвост в днке)
2) есть Т7 РНК полимераза с 6-гис-тагом. вопрос: как и зачем проводят очистку гис-тага?

всем спасибоsmile.gif


1) Закодировать можно, но это лишено практического смысла. Экспрессионные вектора по умолчанию содержат терминаторы (SV40, hGH и т.п.) после полилинкерного участка (MCS). На картах они обозначаются как "poly(A) signal", но на самом деле обеспечивают и терминацию транскрипции, и полиаденилирование. Если вы закодируете поли(А) в кДНК, то после транскрибированного поли(А)-участка всё равно будет посттранскрипционно добавлен поли(А)-хвост.

2) His6-тэг нужен для очистки фермента путём т.н. металл-аффинной хроматографии. После очистки тэг можно отрезать протеазой.
Это — лёгкая версия форума. Чтобы попасть на полную, щелкните здесь.
Invision Power Board © 2001-2020 Invision Power Services, Inc.