Zusammengesetzte Lösungen | Praktische Molekularbiologie

1x; pH7.4; 7.6; 8.0; (lagern bei 4^oC).

	Konz.	Stamm.	1ml	5ml	10ml	50ml	400ml
Tris Cl	10mM	1M	10µl	50µl	100µl	500µl	4ml
EDTA	1mM	0.5M	2µl	10µl	20µl	100µl	800µl
H₂O		mQ	988µl	4.94ml	9.88ml	49.4ml	395ml

10x:

	Konz.	Stamm.	1ml	5ml
Tris Cl	0.1M	1M	0.1ml	0.5ml
EDTA	10mM	0.5M	20µl	0.1ml
H₂O	mQ		880µl	4.4ml

Autoklavieren.

STE

1x; (lagern bei 4^oC).

	Konz.	Stamm.	1ml	5ml	10ml	50ml
NaCl	0.1M	5M	20µl	100µl	200µl	1.0ml
Tris Cl, pH8.0	10mM	1M	10µl	50µl	100µl	0.5ml
EDTA, pH8.0	1mM	0.5M	2µl	10µl	20µl	100µl
H₂O		mQ	0.968ml	4.84ml	9.68ml	48.4ml

10x:

	Konz.	Stamm.	1ml	5ml
NaCl	1.0M	5M	0.2ml	1.0ml
Tris Cl	0.1M	1M	0.1ml	0.5ml
EDTA	10mM	0.5mM	20µl	0.1ml
H₂O	mQ		680µl	3.4ml

Autoklavieren.

SSC

20x; pH 7.0; (lagern bei NT).

	Konz.	Stamm.	0.5L	1.5L	2L
NaCl	3M	58.44g/M	87.66g	263.0g	350.6g
Na₃C₆H₅O₇x 5.5H₂O	0.3M	357.1g/M	53.57g	160.7g	214.3g
H₂O		mQ	440.3ml	1.32L	1.76L

p =1.103

TAE

1x pH=7.6:

Tris-acetate 40mM
EDTA 1mM

(Lagern Sie die große Menge Stammlösung bei 4^oC, die Gebrauchsmenge (~100ml) bei NT)

	Konz.	Stamm.	100ml	150ml	200ml	250ml
Tris-base	2M	121.1g/M	24.22g	36.33g	48.44g	60.55g
EDTA	0.05M	372.3g/M	1.862g	2.792g	3.723g	4.654g
Eisessig	~1M	17.4M	~5.71ml ~6.00g	~8.57ml ~9.00g	~11.42ml ~12.00g	~14.28ml ~15.00g
H₂O		mQ

p(50x)=1.0878

es ist bequem zuerst Tris und EDTA zu lösen und nur danach Säure hinzuzugeben um den pH-Wert einzustellen.

TBE

10x, pH ~8.3; (bei NT in gereinigter Flasche lagern)

	1x	10x	Stamm.	1L
Tris base	89mM	0.89M	121.14g/M	107.8g
Boric acid	89mM	0.89M	61.83g/M	55.03g
EDTA, pH 8.0	2mM	20mM	500mM	40ml 43.84g
H₂O			mQ	863.3ml

Die 10x Stammlösung ist bei NT stabil, wenn Sie diese mit 0.4µm Filtern sterilisieren;

für PAAG wird sie als 1x, für Agarose Gele als 0.5x benutzt;

für Agarose Gele wird Sie zur Trennung von kleinen Fragmenten (< 200bp) verwendet. Es ist allgemein akzeptiert, daß die Aufreinigung von Fragmenten aus TBE Gelen komplexer ist.

FGRB

50x (formaldehyde gel-running buffer), p=1.104g/ml (lagern bei +4^oC):

	Konz.	Stamm.	0.5L	1.0L	2.0L
MOPS (pH7.0)	1.0M	209.27g/M	104.64g	209.27g	418.54g
AcONax3H₂O	0.5M	136.08g/M	34.02g	68.04g	136.08g
EDTAx2H₂O	50mM	372.3g/M	9.31g	18.62g	37.23g
H₂O		mQ	404.0ml	808ml	1616ml

	Konz.	Stamm.	0.5L	1.0L	2.0L
MOPS (pH7.0)	1.0M	209.27g/M	104.64g	209.27g	418.54g
AcONa anhydrous	0.5M	82.04g/M	20.51g	41.02g	82.04g
EDTA x 2H₂O	50mM	372.3g/M	9.31g	18.62g	37.23g
H₂O		mQ	417.5ml	835ml	1670ml

Stellen Sie einen pH von 7.0 mit 10N NaOH (pro 500ml Puffer ~22ml) ein , steril Filtrieren mit 0.22µm Filter;

die Lösung nimmt während der Lagerung, dem Licht ausgesetzt, eine gelbe Färbung an, dies wirkt sich jedoch nicht auf deren Qualität aus.

GTGB

20x /Glycerol tolerant gel buffer/ (lagern bei +4^oC):

	Konz.	Stamm.	1L	1.5L	2.0L	2.5L
Tris base	1.78M	121.14g/M	216g	324g	432g	540g
Taurine	0.56M	125.15g/M	72g	108g	144g	180g
Na₂EDTAx2H₂O	10.7mM	372.3 g/M	4g	6g	8g	10g
H₂O		mQ	802ml	1203ml	1604ml	2005ml

p=1.094

Taurine: C₂H₇NO₃S; Mw=125.15g/M.

TGB

Tris-Glycine buffer 5x, pH8.3, (lagern Sie die Stammlösung bei 4^oC, die Menge die Sie zum Arbeiten benötigen bei NT).

	1x	Konz.	Stamm.	1L	1.5L
Tris-base	25mM	125mM	121.1g/M	15.1g	22.71g
Glycine	250mM	1.25M	75.05g/M	94g	141g
SDS	0.1%	0.5%	10%	50ml	75ml
H₂O			mQ

Lade Puffer

10x, (lagern bei NT).

	Konz.	Stamm.	1ml	5ml	10ml	25ml
Xilene cyanol	0.1%	fest	1.0mg	5.0mg	10mg	25.0mg
Bromph. blue	0.1%	fest	1.0mg	5.0mg	10mg	25.0mg
SDS	0.5%	10%	50µl	250µl	500µl	1.25ml
EDTA, pH8.0	0.1M	0.5M	0.2ml	1.0ml	2.0ml	5.0ml
Glycerol	50%	100%	0.5ml 0.625g	2.5ml 3.125g	5.0ml 6.25g	12.5ml 15.63g
H₂O		mQ	0.25ml	1.25ml	2.5ml	6.25ml

PEG-NaCl

(lagern bei 4^oC).

	Konz.	Stamm.	50ml	100ml	150ml	200ml
NaCl	1.6M	58.44g/M	4.675g	9.35g	14.03g	18.70g
PEG-6000	13%	fest	6.50g	13.00g	19.50g	26.00g

or:

	Konz.	Stamm.	50ml	100ml	150ml	200ml
NaCl	1.6M	5M	16ml 18.97g	32ml 37.95g	48ml 56.92g	64ml 75.90g
PEG-6000	13%	40%	16.25ml	32.50ml	48.75ml	65.00ml

(lagern bei 4^oC).

	Konz.	Stamm.	10ml	50ml	100ml	150ml
NaCl	0.1M	5M	200µl	1.0ml	2.0ml	3.0ml
MgSO₄*	10mM	1M	100µl	0.5ml	1.0ml	1.5ml
Tris Cl, pH7.5	50mM	1M	0.5ml	2.5ml	5.0ml	7.5ml
Gelatin	0.01%	2%	50µl	0.25ml	0.5ml	0.75ml
H₂O		mQ	9.15ml	45.75ml	91.5ml	137.25ml

* - nach dem Autoklavieren hinzugeben;

Autoklavieren.

STM

(lagern bei 4^oC):

	Konz.	Stamm.	50ml
NaCl	10mM	5M	100µl
Tris Cl pH8.0	50mM	1M	2.5ml
MgCl₂	10mM	1M	500µl
H₂O		mQ	46.9ml

(lagern bei 4^oC):

	Konz.	Stamm.	50ml
Tris Cl pH8.0	50mM	1M	2.5ml
MgCl₂	10mM	1M	500µl
H₂O		mQ	47.0ml

Denaturierungs Puffer

(lagern bei NT).

	Konz.	Stamm.	100ml	150ml	300ml	500ml	750ml
NaCl	1.5M	58.44g/M	8.766g	13.15g	26.30g	43.83g	65.75g
NaOH	0.5M	10M	5ml 6.65g	7.5ml 9.97g	15ml 19.94g	25ml 33.23g	37.5ml 49.84g
		40g/M	2g	3g	6g	10g	15g

Neutralisations Puffer

(lagern bei NT).

	Konz.	Stamm.	150ml	300ml	500ml	750ml
Tris Cl, pH7.4	1M	121.1g/M	18.15g	36.3g	60.5g	90.75g
NaCl	1.5M	58.44g/M	13.15g	26.30g	43.83g	65.75g
HCl	~0.81M	11.6M/L	~10.5ml	~21ml	~35ml	~52.5ml
EDTA (optional)	1mM	0.5M	0.3ml	0.6ml	1ml	1.5ml

Entwickler Rentgen-2

(lagern bei NT in the dark).

	500ml	800ml	1l
Methol	1.1g	1.76g	2.2g
Na₂SO₃	36.0g	57.6g	72.0g
Hydroquinone	4.4g	7.04g	8.8g
Na₂CO₃	24.0g	38.4g	48.0g
KBr	2.0g	3.2g	4.0g
H₂O	490ml	784ml	980ml

Löslichkeit in der angegebenen Reihenfolge; r=1.115.

Fixer BKF 2

(lagern bei NT).

	500ml	800ml	1l
Na₂S₂O₃x 5H₂O	130g	208g	260g
NH₄Cl	25g	40g	50g
Sodium pyrosulfite	8.5g	13.6g	17g
H₂O	398ml	636.8ml	796ml

Löslichkeit in der angegebenen Reihenfolge; r=1.123.

Scintillation Lösung

(bei NT im Dunkeln lagern):

	0.5L	1L
PPO	2.50g	5.00g
POPOP	0.05g	0.10g
Toluene

Plasmid Lösung I

(lagern bei +4^oC)

	Konz.	Stamm.	50ml	100ml	150ml	200ml
Glucose	50mM	2M	1.25ml 1.41g	2.5ml 2.825g	3.75ml 4.24g	5.0ml 5.56g
Tris Cl, pH 8.0	25mM	1.0 M	1.25ml	2.5ml	3.75ml	5.0ml
EDTA	10mM	0.5 M	1.0ml	2.0ml	3.0ml	4.0ml
H₂O		mQ	46.5ml	93ml	139.5ml	186ml

Plasmid Lösung II

	Konz.	Stamm.	0.5ml	1ml	2.5ml	5.0ml	6.5ml	8.5ml	11ml
NaOH	0.2N	1N	0.1ml	0.2ml	0.5ml	1.0ml	1.3ml	1.7ml	2.2ml
SDS	1%	10%	0.05ml	0.1ml	0.25ml	0.5ml	0.65ml	0.85ml	1.1ml
H₂O		mQ	0.350ml	0.7ml	1.75ml	3.5ml	4.55ml	5. 95ml	7.7ml

Oligonukleotid Gel Färbemix

(lagern bei NT).

	Konz.	Stamm.	100ml	200ml	300ml	500ml
AcONa(5.2)	0.5M	3M	17ml	33ml	50.0ml	83ml
Met. blue	0.04%	0.2%	20ml	40ml	60ml	100ml
H₂O		mQ	73ml	127ml	190ml	317ml

Mg²⁺2M

(lagern bei NT).

	Konz.	Stamm.	200ml
MgCl₂x6H₂O	1M	203.3g/M	40.66g
MgSO₄x7H₂O	1M	246.48g/M	49.30g
H₂O		mQ	144.6g

p=1.173g/ml.

HSB (f⁺)

high SDS hybridization buffer (lagern Sie die Stammlösung bei 4^oC, die zur Arbeit benötigte Menge bei NT)

	Konz.	Stamm.	500ml
SDS	7%	fest	35g
Formamid	50%	100%	250ml 283.3g
SSC	5x	20x	125ml 145.3g
Bloc. Reagent	2%	fest	10g
NaP (pH 7.0)	50mM	1M	25ml 27.6g
N-Lauroylsarcosine Na	0.1%	10%	5ml 5.1g
Salm.Sperm DNA	50µg/ml	10µg/µl	2.5ml
H₂O		mQ	49ml

p=1.111

Blockier Reagenz – ist das Pulver der "Roche Diagnostics GmbH; vorher Boehringer Mannheim" #1096176. Anstelle von 2% Blockier Reagenz kann man 10x Denhardt oder 2% fettfreie Milch verwenden.

es ist nur möglich die Blockier Reagenz in sehr starkem Puffer zu lösen (in diesem speziellen Fall in H₂O+SSC+NaP).

DNS aus Lachssperma sollte zerstückelt und denaturiert werden..

Restriktions Puffer 10x

Ŕ.

	Konz.	Stamm.	100µl	1ml
Tris Ac (pH7.9 37^oC)	33mM	1M	33µl	330µl
MgAc	10mM	1M	10µl	100µl
KAc	66mM	5M	13.2µl	132µl
DTT	0.5mM	1M	0.5µl	5µl
H₂O		mQ	43.3µl	433µl

	Konz.	Stamm.	100µl	1ml
Tris Cl (pH 8.0 37^oC))	10mM	1M	10µl	100µl
MgCl₂	5mM	1M	5µl	50µl
NaCl	100mM	5M	20µl	200µl
b-MeEtOH	1mM	1M	1µl	10µl
H₂O		mQ	64µl	640µl

	Konz.	Stamm.	100µl	1ml
Tris Cl (pH 7.5 37^oC)	10mM	1M	10µl	100µl
MgCl₂	10mM	1M	10µl	100µl
DTT	1mM	1M	1µl	10µl
H₂O		mQ	79µl	790µl

	Konz.	Stamm.	100µl	1ml
Tris Cl (pH7.5 37^oC)	10mM	1M	10µl	100µl
NaCl	50mM	5M	10µl	100µl
MgCl₂	10mM	1M	10µl	100µl
DTT	1mM	1M	1µl	10µl
H₂O		mQ	69µl	690µl

	Konz.	Stamm.	100µl	1ml
Tris Cl (pH7.5 37^oC)	50mM	1M	50µl	50µl
MgCl₂	10mM	1M	10µl	100µl
NaCl	100mM	5M	20µl	200µl
DTT	1mM	1M	1µl	10µl
H₂0		mQ	19µl	190µl

Denhardt Lösung 50x

(lagern bei -20^oC)

	Konz.	Stamm.	50ml	300ml	1L
Ficoll 400	1%	fest	0.5g	3.0g	10g
Polyvinilpyrolidone	1%	fest	0.5g	3.0g	10g
BSA (fr V)	1%	fest	0.5g	3.0g	10g
H₂O		mQ	46.7ml	292.2ml	974ml

p=1.004

Filtrierung;

es kann 100x hergestellt werden.

PBS

pH(1x)=7.4, (lagern bei NT or at 4^oC):

	1x	Konz.	Stamm.	100ml	500ml
KH₂PO₄	1.7mM	17mM	136.1g/M	0.231g	1.157g
Na₂HPO₄	5.2mM	52mM	142g/M	0.738g	3.692g
NaCl	150mM	1.5M	58.44g/M	8.77g	43.83g
H₂O		mQ

	1x	Konz.	Stamm.	100ml	500ml
KH₂PO₄	1.7mM	17mM	136.1g/M	0.231g	1.157g
Na₂HPO₄x7H₂O	5.2mM	52mM	268.1g/M	1.394g	6.971g
NaCl	150mM	1.5M	58.44g/M	8.77g	43.83g
H₂O		mQ

Autoklavieren;

der pH ist konzentrationsabhängig; prüfen Sie deshalb den pH nur für verdünnte 1x Puffer;

der pH von 10x sollte ~6.8 betragen (mit NaOH einstellen, wenn erforderlich).

SSPE

pH 7.4

	Konz.	Stamm.	1L
NaCl	3M	58.44g/M	175g
NaH₂PO₄xH₂O	200mM	137.99g/M	27.6g
EDTA	20mM	372.24g/M	7.4g

stellen Sie den pH mit 10N NaOH ein.

RNase A (DNase free)

(bei –20^oC lagern, zur Verwendung benötigte Mengen können bei 4^oC gelagert werden)

lösen Sie 10mg/ml in 1-50mM AcONa (pH 4.5);
15 min. in Wasserbad kochen, dann langsam auf NT abkühlen lassen;

RNAse Lagerungs Puffer

(lagern bei -20^oC).

	Konz.	Stamm.	1ml	5ml	10ml
Tris Cl, pH7.6	10mM	1M	10µl	50µl	100µl
Glycerol	50%	100%	0.5ml 0.630g	2.5ml 3.152g	5.0ml 6.305g
H₂O		mQ	0.486g	2.43g	4.86g

Proteinase K

(bei 4^oC lagern, Langzeitlagerung bei –20^oC): 20 mg/ml Lösung in 10 mM Tris Cl, 1,0 mM CaCl₂, 30% Glycerin.

EDTA/glycogen

20x (lagern bei -20^oC):

	Konz.	Stamm.	1.0ml
EDTA	0.2M	0.5M	400 µl
glycogen	1mg/ml	20mg/ml	50 µl
H₂O		mQ	550 µl

DNAse RQ1 Puffer

10x (lagern bei -20^oC):

	Konz.	Stamm.	1ml
Tris Cl (pH8.0₂₅^o_C)	0.4M	1M	400µl
NaCl	0.1M	5M	20µl
MgCl₂	60mM	1M	60µl
CaCl₂	0.1M	1M	100µl
H₂0		mQ	420µl

DNAse Lagerungs Puffer

(lagern bei -20^oC).

	Konz.	Stamm.	1ml	1.5ml	2.5ml	5ml	10ml
Tris Cl, pH 7.0	20mM	1M	20µl	30µl	50µl	100µl	200µl
NaCl	50mM	5M	10µl	15µl	25µl	50µl	100µl
DTT	1mM	1M	1µl	1.5µl	2.5µl	5.0µl	10µl
Glycerol	50%	100%	0.5ml 0.630g	0.75ml 0.9g	1.25ml 1.58g	2.5ml 3.15g	5.0ml 6.31g
H₂O		mQ	0.485g	0.73g	1.21g	2.42g	4.85g