Zusammengesetzte Lsungen


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    About the recalculation of recipes for the arbitrary volume:



    TE

    1x; pH7.4; 7.6; 8.0; (lagern bei 4oC).

    Konz.Stamm.1ml5ml10ml50ml400ml
    Tris Cl10mM1M10µl50µl100µl500µl4ml
    EDTA1mM0.5M2µl10µl20µl100µl800µl
    H2O mQ988µl4.94ml9.88ml49.4ml395ml

    10x:

    Konz.Stamm.1ml5ml
    Tris Cl0.1M1M0.1ml0.5ml
    EDTA10mM0.5M20µl0.1ml
    H2OmQ 880µl4.4ml
  • Autoklavieren.
  • STE

    1x; (lagern bei 4oC).

    Konz.Stamm.1ml5ml10ml50ml
    NaCl0.1M5M20µl100µl200µl1.0ml
    Tris Cl, pH8.010mM1M10µl50µl100µl0.5ml
    EDTA, pH8.01mM0.5M2µl10µl20µl100µl
    H2O mQ0.968ml4.84ml9.68ml48.4ml

    10x:

    Konz.Stamm.1ml5ml
    NaCl1.0M5M0.2ml1.0ml
    Tris Cl0.1M1M0.1ml0.5ml
    EDTA10mM0.5mM20µl0.1ml
    H2OmQ 680µl3.4ml
  • Autoklavieren.
  • SSC

    20x; pH 7.0; (lagern bei NT).

    Konz.Stamm.0.5L1.5L2L
    NaCl3M58.44g/M87.66g263.0g350.6g
    Na3C6H5O7x 5.5H2O0.3M357.1g/M53.57g160.7g214.3g
    H2O mQ440.3ml1.32L1.76L

    p =1.103

    TAE

    1x pH=7.6:

    Tris-acetate 40mM
    EDTA 1mM

    (Lagern Sie die groe Menge Stammlsung bei 4oC, die Gebrauchsmenge (~100ml) bei NT)

    Konz.Stamm.100ml150ml200ml250ml
    Tris-base2M121.1g/M24.22g36.33g48.44g60.55g
    EDTA0.05M372.3g/M1.862g2.792g3.723g4.654g
    Eisessig~1M17.4M ~5.71ml
    ~6.00g
    ~8.57ml
    ~9.00g
    ~11.42ml
    ~12.00g
    ~14.28ml
    ~15.00g

    H2O mQ     

    p(50x)=1.0878

  • es ist bequem zuerst Tris und EDTA zu lsen und nur danach Sure hinzuzugeben um den pH-Wert einzustellen.
  • TBE

    10x, pH ~8.3; (bei NT in gereinigter Flasche lagern)

    1x10xStamm.1L
    Tris base89mM0.89M121.14g/M107.8g
    Boric acid89mM0.89M61.83g/M55.03g
    EDTA, pH 8.02mM20mM500mM40ml
    43.84g

    H2O  mQ863.3ml
  • Die 10x Stammlsung ist bei NT stabil, wenn Sie diese mit 0.4µm Filtern sterilisieren;
  • fr PAAG wird sie als 1x, fr Agarose Gele als 0.5x benutzt;
  • fr Agarose Gele wird Sie zur Trennung von kleinen Fragmenten (< 200bp) verwendet. Es ist allgemein akzeptiert, da die Aufreinigung von Fragmenten aus TBE Gelen komplexer ist.
  • FGRB

    50x (formaldehyde gel-running buffer), p=1.104g/ml (lagern bei +4oC):

    Konz.Stamm.0.5L1.0L2.0L
    MOPS (pH7.0)1.0M209.27g/M104.64g209.27g418.54g
    AcONax3H2O0.5M136.08g/M34.02g68.04g136.08g
    EDTAx2H2O50mM372.3g/M9.31g18.62g37.23g
    H2O mQ404.0ml808ml1616ml
    Konz.Stamm.0.5L1.0L2.0L
    MOPS (pH7.0)1.0M209.27g/M104.64g209.27g418.54g
    AcONa anhydrous0.5M82.04g/M20.51g41.02g82.04g
    EDTA x 2H2O50mM372.3g/M9.31g18.62g37.23g
    H2O mQ417.5ml835ml1670ml
  • Stellen Sie einen pH von 7.0 mit 10N NaOH (pro 500ml Puffer ~22ml) ein , steril Filtrieren mit 0.22µm Filter;
  • die Lsung nimmt whrend der Lagerung, dem Licht ausgesetzt, eine gelbe Frbung an, dies wirkt sich jedoch nicht auf deren Qualitt aus.
  • GTGB

    20x /Glycerol tolerant gel buffer/ (lagern bei +4oC):

    Konz.Stamm.1L1.5L2.0L2.5L

    Tris base

    1.78M121.14g/M216g324g432g540g

    Taurine

    0.56M125.15g/M72g108g144g180g

    Na2EDTAx2H2O

    10.7mM372.3 g/M4g6g8g10g

    H2O

     mQ802ml1203ml1604ml2005ml

    p=1.094

  • Taurine: C2H7NO3S; Mw=125.15g/M.
  • TGB

    Tris-Glycine buffer 5x, pH8.3, (lagern Sie die Stammlsung bei 4oC, die Menge die Sie zum Arbeiten bentigen bei NT).

    1xKonz.Stamm.1L1.5L
    Tris-base25mM125mM121.1g/M15.1g22.71g
    Glycine250mM1.25M75.05g/M94g141g
    SDS0.1%0.5%10%50ml75ml
    H2O  mQ   

    Lade Puffer

    10x, (lagern bei NT).

    Konz.Stamm.1ml5ml10ml25ml
    Xilene cyanol0.1%fest1.0mg5.0mg10mg25.0mg
    Bromph. blue0.1%fest1.0mg5.0mg10mg25.0mg
    SDS0.5%10%50µl250µl500µl1.25ml
    EDTA, pH8.00.1M0.5M0.2ml1.0ml2.0ml5.0ml
    Glycerol50%100% 0.5ml
    0.625g
    2.5ml
    3.125g
    5.0ml
    6.25g
    12.5ml
    15.63g

    H2O mQ0.25ml1.25ml2.5ml6.25ml

    PEG-NaCl

    (lagern bei 4oC).

    Konz.Stamm.50ml100ml150ml200ml
    NaCl1.6M58.44g/M4.675g9.35g14.03g18.70g
    PEG-600013%fest6.50g13.00g19.50g26.00g

    or:

    Konz.Stamm.50ml100ml150ml200ml
    NaCl1.6M5M 16ml
    18.97g
    32ml
    37.95g
    48ml
    56.92g
    64ml
    75.90g

    PEG-600013%40%16.25ml32.50ml48.75ml65.00ml

    SM

    (lagern bei 4oC).

    Konz.Stamm.10ml50ml100ml150ml
    NaCl0.1M5M200µl1.0ml2.0ml3.0ml
    MgSO4*10mM1M100µl0.5ml1.0ml1.5ml
    Tris Cl, pH7.550mM1M0.5ml2.5ml5.0ml7.5ml
    Gelatin0.01%2%50µl0.25ml0.5ml0.75ml
    H2O mQ9.15ml45.75ml91.5ml137.25ml

    * - nach dem Autoklavieren hinzugeben;

  • Autoklavieren.
  • STM

    (lagern bei 4oC):

    Konz.Stamm.50ml
    NaCl10mM5M100µl
    Tris Cl pH8.050mM1M2.5ml
    MgCl210mM1M500µl
    H2O mQ46.9ml

    TM

    (lagern bei 4oC):

    Konz.Stamm.50ml
    Tris Cl pH8.050mM1M2.5ml
    MgCl210mM1M500µl
    H2O mQ47.0ml

    Denaturierungs Puffer

    (lagern bei NT).

    Konz.Stamm.100ml150ml300ml500ml750ml
    NaCl1.5M58.44g/M8.766g13.15g26.30g43.83g65.75g
    NaOH0.5M10M 5ml
    6.65g
    7.5ml
    9.97g
    15ml
    19.94g
    25ml
    33.23g
    37.5ml
    49.84g

      40g/M2g3g6g10g15g

    Neutralisations Puffer

    (lagern bei NT).

    Konz.Stamm.150ml300ml500ml750ml
    Tris Cl, pH7.41M121.1g/M18.15g36.3g60.5g90.75g
    NaCl1.5M58.44g/M13.15g26.30g43.83g65.75g
    HCl~0.81M11.6M/L~10.5ml~21ml~35ml~52.5ml
    EDTA (optional)1mM0.5M0.3ml0.6ml1ml1.5ml

    Entwickler Rentgen-2

    (lagern bei NT in the dark).

    500ml800ml1l
    Methol1.1g1.76g2.2g
    Na2SO336.0g57.6g72.0g
    Hydroquinone4.4g7.04g8.8g
    Na2CO324.0g38.4g48.0g
    KBr2.0g3.2g4.0g
    H2O490ml784ml980ml

    Lslichkeit in der angegebenen Reihenfolge; r=1.115.

    Fixer BKF 2

    (lagern bei NT).

    500ml800ml1l
    Na2S2O3x 5H2O130g208g260g
    NH4Cl25g40g50g
    Sodium pyrosulfite8.5g13.6g17g
    H2O398ml636.8ml796ml

    Lslichkeit in der angegebenen Reihenfolge; r=1.123.

    Scintillation Lsung

    (bei NT im Dunkeln lagern):

    0.5L1L
    PPO2.50g5.00g
    POPOP0.05g0.10g
    Toluene   

    Plasmid Lsung I

    (lagern bei +4oC)

    Konz.Stamm.50ml100ml150ml200ml
    Glucose50mM2M 1.25ml
    1.41g
    2.5ml
    2.825g
    3.75ml
    4.24g
    5.0ml
    5.56g

    Tris Cl, pH 8.025mM1.0 M1.25ml2.5ml3.75ml5.0ml
    EDTA10mM0.5 M1.0ml2.0ml3.0ml4.0ml
    H2O mQ46.5ml93ml139.5ml186ml

    Plasmid Lsung II

    Konz.Stamm.0.5ml1ml2.5ml5.0ml6.5ml8.5ml11ml
    NaOH0.2N1N0.1ml0.2ml0.5ml1.0ml1.3ml1.7ml2.2ml
    SDS1%10%0.05ml0.1ml0.25ml0.5ml0.65ml0.85ml1.1ml
    H2O mQ0.350ml0.7ml1.75ml3.5ml4.55ml5. 95ml7.7ml

    Oligonukleotid Gel Frbemix

    (lagern bei NT).

    Konz.Stamm.100ml200ml300ml500ml
    AcONa(5.2)0.5M3M17ml33ml50.0ml83ml
    Met. blue0.04%0.2%20ml40ml60ml100ml
    H2O mQ73ml127ml190ml317ml

    Mg2+2M

    (lagern bei NT).

    Konz.Stamm.200ml
    MgCl2x6H2O1M203.3g/M40.66g
    MgSO4x7H2O1M246.48g/M49.30g
    H2O mQ144.6g

    p=1.173g/ml.

    HSB (f+)

    high SDS hybridization buffer (lagern Sie die Stammlsung bei 4oC, die zur Arbeit bentigte Menge bei NT)

    Konz.Stamm.500ml
    SDS7%fest35g
    Formamid50%100%250ml
    283.3g

    SSC5x20x125ml
    145.3g

    Bloc. Reagent2%fest10g
    NaP (pH 7.0)50mM1M25ml
    27.6g

    N-Lauroylsarcosine Na0.1%10%5ml
    5.1g

    Salm.Sperm DNA50µg/ml10µg/l2.5ml
    H2O mQ49ml

    p=1.111

  • Blockier Reagenz ist das Pulver der "Roche Diagnostics GmbH; vorher Boehringer Mannheim" #1096176. Anstelle von 2% Blockier Reagenz kann man 10x Denhardt oder 2% fettfreie Milch verwenden.
  • es ist nur mglich die Blockier Reagenz in sehr starkem Puffer zu lsen (in diesem speziellen Fall in H2O+SSC+NaP).
  • DNS aus Lachssperma sollte zerstckelt und denaturiert werden..
  • Restriktions Puffer 10x

    .

    Konz.Stamm.100µl1ml
    Tris Ac (pH7.9 37oC)33mM1M33µl330µl
    MgAc10mM1M10µl100µl
    KAc66mM5M13.2µl132µl
    DTT0.5mM1M0.5µl5µl
    H2O mQ43.3µl433µl

    B.

    Konz.Stamm.100µl1ml
    Tris Cl (pH 8.0 37oC))10mM1M10µl100µl
    MgCl25mM1M5µl50µl
    NaCl100mM5M20µl200µl
    b-MeEtOH1mM1M1µl10µl
    H2O mQ64µl640µl

    L.

    Konz.Stamm.100µl1ml
    Tris Cl (pH 7.5 37oC)10mM1M10µl100µl
    MgCl210mM1M10µl100µl
    DTT1mM1M1µl10µl
    H2O mQ79µl790µl

    M.

    Konz.Stamm.100µl1ml
    Tris Cl (pH7.5 37oC)10mM1M10µl100µl
    NaCl50mM5M10µl100µl
    MgCl210mM1M10µl100µl
    DTT1mM1M1µl10µl
    H2O mQ69µl690µl

    H.

    Konz.Stamm.100µl1ml
    Tris Cl (pH7.5 37oC)50mM1M50µl50µl
    MgCl210mM1M10µl100µl
    NaCl100mM5M20µl200µl
    DTT1mM1M1µl10µl
    H20 mQ19µl190µl

    Denhardt Lsung 50x

    (lagern bei -20oC)

    Konz.Stamm.50ml300ml1L
    Ficoll 4001%fest0.5g3.0g10g
    Polyvinilpyrolidone1%fest0.5g3.0g10g
    BSA (fr V)1%fest0.5g3.0g10g
    H2O mQ46.7ml292.2ml974ml

    p=1.004

  • Filtrierung;
  • es kann 100x hergestellt werden.
  • PBS

    pH(1x)=7.4, (lagern bei NT or at 4oC):

    1xKonz.Stamm.100ml500ml
    KH2PO41.7mM17mM136.1g/M0.231g1.157g
    Na2HPO45.2mM52mM142g/M0.738g3.692g
    NaCl150mM1.5M58.44g/M8.77g43.83g
    H2O mQ    
    1xKonz.Stamm.100ml500ml
    KH2PO41.7mM17mM136.1g/M0.231g1.157g
    Na2HPO4x7H2O5.2mM52mM268.1g/M1.394g6.971g
    NaCl150mM1.5M58.44g/M8.77g43.83g
    H2O mQ    
  • Autoklavieren;
  • der pH ist konzentrationsabhngig; prfen Sie deshalb den pH nur fr verdnnte 1x Puffer;
  • der pH von 10x sollte ~6.8 betragen (mit NaOH einstellen, wenn erforderlich).
  • SSPE

    pH 7.4

    Konz.Stamm.1L
    NaCl3M58.44g/M175g
    NaH2PO4xH2O200mM137.99g/M27.6g
    EDTA20mM372.24g/M7.4g
  • stellen Sie den pH mit 10N NaOH ein.
  • RNase A (DNase free)

    (bei 20oC lagern, zur Verwendung bentigte Mengen knnen bei 4oC gelagert werden)

    1. lsen Sie 10mg/ml in 1-50mM AcONa (pH 4.5);
    2. 15 min. in Wasserbad kochen, dann langsam auf NT abkhlen lassen;

    RNAse Lagerungs Puffer

    (lagern bei -20oC).

    Konz.Stamm.1ml5ml10ml
    Tris Cl, pH7.610mM1M10µl50µl100µl
    Glycerol50%100% 0.5ml
    0.630g
    2.5ml
    3.152g
    5.0ml
    6.305g

    H2O mQ0.486g2.43g4.86g

    Proteinase K

    (bei 4oC lagern, Langzeitlagerung bei 20oC): 20 mg/ml Lsung in 10 mM Tris Cl, 1,0 mM CaCl2, 30% Glycerin.

    EDTA/glycogen

    20x (lagern bei -20oC):

    Konz.Stamm.1.0ml
    EDTA0.2M0.5M400 µl
    glycogen1mg/ml20mg/ml50 µl
    H2O mQ550 µl

    DNAse RQ1 Puffer

    10x (lagern bei -20oC):

    Konz.Stamm.1ml
    Tris Cl (pH8.025oC)0.4M1M400µl
    NaCl0.1M5M20µl
    MgCl260mM1M60µl
    CaCl20.1M1M100µl
    H20 mQ420µl

    DNAse Lagerungs Puffer

    (lagern bei -20oC).

    Konz.Stamm.1ml1.5ml2.5ml5ml10ml
    Tris Cl, pH 7.020mM1M20µl30µl50µl100µl200µl
    NaCl50mM5M10µl15µl25µl50µl100µl
    DTT1mM1M1µl1.5µl2.5µl5.0µl10µl
    Glycerol50%100% 0.5ml
    0.630g
    0.75ml
    0.9g
    1.25ml
    1.58g
    2.5ml
    3.15g
    5.0ml
    6.31g

    H2O mQ0.485g0.73g1.21g2.42g4.85g

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