Главная страница MolBiol.ru > Биокартинки > Портреты > 5 мифов о сортировке клеток Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Разделяй и властвуй: 5 мифов о сортировке клеток

Вдумчиво и серьезно заниматься сортерами клеток «Компания Хеликон» начала в 2014 году. За эти годы специалисты компании столкнулись с целым ворохом всевозможных мифов и легенд, связанных с выбором оборудования для сортировки, и теперь готовы со всей серьезностью их развенчать.

Миф №1: Сортировка клеток – лучший способ выделения целевых клеток из гетерогенных популяций.

Сегодня есть три основные задачи, которые пользователи ставят перед клеточными сортерами: обогащение, выделение редких популяций и сортировка единичных клеток. И хотя сортер в этом отношении, действительно, и швец, и жнец, и на дуде игрец, далеко не всегда его использование является оптимальным решением. Вы же не будете покупать Порше, чтобы кататься на нем в соседний магазин?
Например, обогащение клеточной популяции – задача несложная, и решается простыми клеточными сепараторами и специальными реагентными наборами. А если говорить о таком тонком и деликатном деле, как работа с единичными клетками, то существует целый отдельный класс приборов ( http://helicon.ru/catalog/oborudovanie/kletochnaya-biologiya/sistemy-dlya-izucheniya-edinichnykh-kletok/ ), заточенный на эффективное решение именно таких задач.
Если вы не уверены в том, какой метод лучше всего подойдет для вашей работы, всегда можно написать специалистам Компании Хеликон ( http://helicon.ru/contacts/ ). Вам подберут решение, которое действительно необходимо: не больше и не меньше.

Миф №2: Чем больше лазеров, тем больше флуоресцентных каналов.

Классическое заблуждение, культивируемое производителями в самых разных областях: от мобильных телефонов до научных приборов (пример: обзор ( http://helicon.ru/support/methodological/faq-gel-dokumentiruyushchie-sistemy/ ) о том, как на самом деле связано количество пикселей с качеством изображения в гель-документирующих системах). Интерес производителя здесь очевиден: чем больше, тем дороже.
На самом деле, зачастую у сортеров с одними и теми же лазерами количество флуоресцентных каналов драматически различается. Все потому, что число каналов напрямую зависит от того, как физически расположены лазеры в приборе. В сортерах с коллинеарными лазерами количество флуоресцентных каналов гораздо меньше, чем в сортерах с лазерами, разделенными в пространстве, т.к. во втором случае сигнал от каждого лазера детектируется отдельно.


Рис.1 Оптическая схема с коллинеарными лазерами – 4 флуоресцентных канала.
Прикреплённое изображение

Рис.2 Оптическая схема с пространственно разделенными лазерами – 7 флуоресцентных каналов.
Прикреплённое изображение

Миф №3: Максимальная скорость сортировки – это та скорость, с которой вы будете сортировать.

Реальность куда прозаичнее: максимальная скорость сортировки клеток – это та скорость, на которой можно сортировать калибровочные частицы при настройке сортера. Сортировка реальных клеток на таких скоростях приведет к значительному росту коэффициента вариации (CV) и падению чистоты сорта.
Такой расклад приемлем, когда стоит задача обогащения, но для обогащения есть более простые и гуманные способы (см. Миф №1). Во всех остальных случаях действительно важным является параметр чистоты сорта на заданной скорости. И вот здесь идет война за каждый лишний процент, особенно когда речь идет о редких популяциях – кто знает, не попадет ли ваша драгоценная клетка в тот самый 1%?

Миф №4: Одноразовые элементы жидкостного тракта – перспектива для клинического использования сортера клеток.

Один из самых активно распространяемых мифов, связанный с давней мечтой ученых и клиницистов использовать сортировку клеток для лечения пациентов, которую подогрел недавно вышедший Закон N 180-ФЗ "О биомедицинских клеточных продуктах" ( https://www.rosminzdrav.ru/news/2016/06/09/2990-gosudarstvennoy-dumoy-rossiyskoy-federatsii-prinyat-federalnyy-zakon-o-biomeditsinskih-kletochnyh-produktah ).
К сожалению, этой мечте пока не суждено стать реальностью. Подавляющее большинство клеточных сортеров мирового рынка работают на технологиях, основанных на фокусировании клеток в потоке жидкости через систему капилляров. Это значит, что для гарантии стерильности и отсутствия кросс-контаминации весь жидкостной тракт сортера, от пробозаборника до системы сбора образца, должен быть сменным и одноразовым.
Некоторыми производителями оборудования, действительно, предпринимались попытки внедрения отдельных одноразовых элементов (например, использование сменного чипа вместо сопла), но в большинстве своем жидкостной тракт сортера до сих пор остается стационарными и требует стандартных процедур очистки. Это исключает возможность получения такими сортерами IVD сертификата за рубежом и регистрации в Минздраве РФ.
Продолжаем ждать и надеяться!


Миф №5: Чем выше чувствительность в эквивалентах (MESF), тем лучше качество сигнала.
Чувствительность в эквивалентах – это важно и хорошо. Но нужно иметь в виду, что не только MESF влияет на качество сигнала. Откровенно говоря, реальная разница между 115 и 125 MESF не так уж велика, так как большинство эпитопов содержатся в клетке в достаточном количестве, чтобы не замечать этой разницы. Кроме того, на одном антителе, как правило, связано больше одной молекулы флуорохрома, что позволяет успешно детектировать эпитопы в низких концентрациях.
Не менее важным параметром является разрешение сигнала. А разрешение зависит не только от чувствительности детекторов, но и от самой метки, от уровня автофлуоресценции объекта, от мощности лазера (чем мощнее лазер, тем больше сигнал с флуорохрома) и т.д. Как правило, в технических описаниях сортеров разрешение никак не цифруется, и единственный способ оценить этот параметр – по графикам сортировки флуоресцентных калибровочных частиц, которые часто приводят в рекламных материалах к приборам.

Рис.3 Пример детектирования флуоресцентных микросфер на сортере клеток. CV <2.5. Восемь пиков видны во всех 4-х флуоресцентных каналах.
Прикреплённое изображение


Ссылка на статью на сайте - http://helicon.ru/support/methodological/r...tirovke-kletok/ ( http://helicon.ru/support/methodological/razdelyay-i-vlastvuy-5-mifov-o-sortirovke-kletok/ )



Файл/ы:

Скачать файл Cell_sorting_myths.pdf
Размер:: 378.19к
кол-во скачиваний: 24




Есть много гитик...ZellKraftwerk, напримерsmile.gif






Биокартинки: molbiol.ru/pictures
e-mail: pictures@molbiol.ru
просмотров: 2779
-- как прислать биокартинку --

    Дополнения, комментарии, вопросы

    Annabel /20.09.2017 04:09/
    Слушайте, только мне кажется, что с каждым пунктом этой статьи что-то не так (иногда многократно)? Общее впечатление - как от сортинга на Калибуре smile.gif



    Guest /22.09.2017 00:25/
    (Annabel @ 20.09.2017 04:09)
    Ссылка на исходное сообщение  Слушайте, только мне кажется, что с каждым пунктом этой статьи что-то не так (иногда многократно)? Общее впечатление - как от сортинга на Калибуре smile.gif

    просто, когда “Вдумчиво и серьезно заниматься сортерами клеток «Компания Хеликон» начала в 2014 году.“
    Поэтому стиль изложения сыроват, а примеры несколько абстрактны, но в целом — нормально, с учетом того, что не совсем понятно на кого рассчитан документ (за сортировкой везде в міре приглядывает ответственный за платформу (core facility), это анализ может вырваться из-под ока смотрящего). А ответственный за сервис должен, по идее, не быть в плену подобных мифов.



    Annabel /22.09.2017 07:22/
    да там вообще вдумчивые волшебники работают. Судя по каталогу, они собираются "тонко и деликатно" выделять единичные клетки масс-цитометрией... jump.gif



    tus /23.09.2017 10:55/
    (Annabel @ 22.09.2017 08:22)
    Ссылка на исходное сообщение  да там вообще вдумчивые волшебники работают. Судя по каталогу, они собираются "тонко и деликатно" выделять единичные клетки масс-цитометрией... jump.gif


    Так в каталоге же про изучение единичных клеток, а не про выделение umnik.gif



    Annabel /23.09.2017 18:19/
    Ну в этом смысле любая цитометрия - про изучение единичных клеток smile.gif



    dgustica /02.10.2017 15:09/
    Мир это так и естьsmile.gif) Волшебники правятsmile.gif) А Феи отдыхаютsmile.gif) Если что то нужное и важное есть, то оно в каталог явно не попадет, потому что кто то вдруг станет умнее и мудрееsmile.gif








       
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler