Главная страница MolBiol.ru > Методы > Плазмиды > Выделение pDNA на силикагеле Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Выделение плазмидной ДНК на силикагеле

Самодельный аналог "Wizard Minipreps ДНК Purification System /Promega/"

Вячеслав Юрченко, Екатерина Мерзляк
vyurchen@aecom.yu.edu
Московский Государственный Университет
(кафедра Молекулярной Биологии)
  1. ЦФ 1-3ml "ночной культуры" 1-2' на микроцентрифуге;
  2. ресуспендировать бактерии в 200µl (50mM Tris-Cl, pH 7.0; 10mM EDTA);
  3. добавить 200µl лизирующего раствора (0.2 M NaOH, 1% SDS);
  4. плавно переворачивая пробирки перемешать до полного просветления (но не более 5 минут);
  5. добавить 200µl 1.32M AcOK (pH 4.8), смешать;
  6. ЦФ 7-8' при 14krpm;
  7. перенести супернатант в другую пробирку, добавить к нему 1ml "смолы" (DNA purification resin);
  8. смесь продавить шприцем через колонку, заткнутую стекловатой;
  9. колонку промыть 2ml "отмывающего буфера" (200mM NaCl; 20mM Tris-Cl, pH 7.5; 5mM EDTA; 55% этанол);
  10. элюировать ДНК с колонки в 50µl воды или TE.


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 13716


    Комментарии

    Общие

  • Описан самодельный аналог "Wizard Minipreps ДНК Purification System /Promega/"


  • По пунктам

    п. 7.

  • Смола.
    Нам удалось добиться той же эффективности, что и у продажной системы, используя в качестве смолы (DNA purification resin) суспензию силикагеля с концентрацией 17.5µg/µl в 7М гуанидин хлориде. Мы пользовались старым (20-30 лет) силикагелем от СовБиоХим (или что-то типа того) - L5-40 µm. Я думаю, что 30µm силикагель от Sigma [#H0761] будет не хуже.
  • Колонки.
    Использовались регенерированные колонки из кита Promega. Старое содержимое вытряхнуть (штифт удобно выдавливать иголкой). Пластиковый корпус - вымыть. Стекловату (Glas wolle, Merck; из расчёта 25µg стекловаты/колонку) прогреть 10' при 60OС в 5% Si(CH3)2Cl2, растворенном в толуоле. Силиконизированную стекловату поместить в колонку. ЦФ на микроцентрифуге 3' и сушить в эксикаторе.

    Дополнения.

  • от Redactor
    Я бы не стал пользоваться старой колонкой, а сделал бы новую из пробирки-гвоздика или жёлтого наконечника как описано в "Изготовление гель-фильтрационных spin-колонок".

    Дополнения, комментарии, вопросы

    Гость /04.07.2005 18:11/
    КАФЕДРА молекулярной биологии. А не факультет ни какой. Нет такого факультета в МГУ.



    Demyanov /04.07.2005 19:03/
    Чего-то я не понял, это вопрос или предложение от робота?
    Мы (ГНЦ НИИ Особо Чистых Биопрепаратов, СПб) скоро запустим продажу таких китов на основе силиконовых спин-колонок . Кому интересно попробовать - пишите.



    Гость /06.03.2006 09:06/
    Мне интересно. Мне надо чистить ДНК после бисульфита. Пока остановилась на glass milk, но если можно будет приобрести колонки - с удовольствием. А сколько они стоят и как их можно приобрести? Делать сама вряд ли смогу - помимо молекулярки, в которой я чайник, на мне ещё культуры... Если бы часов в сутках добавили:)))



    Himikov /01.02.2007 16:00/
    "суспензию силикагеля с концентрацией 17.5µg/µl в 7М гуанидин хлориде" интересно, как это получили 17,5 мкг в мкл???








       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler