Заливка агарозного геля

Расход геля для различных типов плашек Форезная камера  Дополнить

Дополнения, комментарии, вопросы

mesentsev /17.08.2006 22:35/
А это нормально, когда в описании электрофоретического метода отсутствует рецептура приготвления буферных растворов?




mesentsev /17.08.2006 22:36/
50x TAE Buffer (Tris-Acetate-EDTA)
242 gm Tris base
57.1 ml Acetic acid
100ml 0.5M EDTA

Add ddH2O to 1 liter and adjust pH to 8.5.




mesentsev /17.08.2006 22:37/
10x TBE Buffer (Tris-Borate-EDTA)
108 gm Tris base
55 gm Boric acid
9.3 gm Na4EDTA

Add ddH2O to 1 liter.

The pH is 8.3 and requires no adjustment.




guest: ant /18.08.2006 08:41/
SB ( sodoum borate) )

Ultrafast COLD buffer - gel in 5 min ))

Sigma - Bionic Buffer

see Paper Biotechniques


Low Cost ))




guest: ant /18.08.2006 08:48/
sb+GelStar

+DarkReader ( blue transilluminator)

and you see Real-Time agarose gel DIREKTLY !!!!!!!!

on YOUR WORKING PLACE !!!!!!!!!

NO DARK ROOMS !!!!!!!!!!

5 min AND YOU SEE !!!!!!!!!!! results ))

by using ORANGE Glasses




guest: ant /18.08.2006 08:53/
in SB
you can Run agarose at 30V/cm at room temp )




guest: ant /18.08.2006 09:01/
Display Show
All: 1
Review: 1
[Click to change filter selection through My NCBI.]

1: Anal Biochem. 2004 Oct 1;333(1):1-13.Click here to read Links
History and principles of conductive media for standard DNA electrophoresis.

* Brody JR,
* Kern SE.

Department of Oncology, The Sidney Kimmel Comprehensive Cancer Center at The Johns Hopkins University School of Medicine, Baltimore, MD 21231, USA.

DNA electrophoresis has been a dominant technique in molecular biology for 30 years. The foundation for this common technique is based on a few simple electrochemical principles. Electrophoretic DNA separation borrowed from existing protein and RNA techniques developed in the 1950s and 1960s. For 30 years, common DNA electrophoretic conductive media remained largely unchanged, with Tris as the primary cation. DNA electrophoresis relies simply upon the negative charge of the phosphate backbone and the ability to distribute a voltage gradient in a sieving matrix. Nevertheless, the conductive properties in DNA electrophoresis are complicated by choices involving voltage, electric current, conductivity, temperature, and the concentration and identity of the ionic species present. Differences among the extant chemical recipes for common conductive media affect central properties. Tris-based buffers, even in optimal form, create a runaway positive feedback loop between heat generation and retention, temperature, conductivity, and current. This is undesirable, leading to limitations on the permissible electric field and to impaired resolution. Recently, we developed low-molarity conductive media to mitigate this positive feedback loop. Such media allow for application of a higher electric field. Applications of DNA electrophoresis can now be reengineered for lower ionic strength, higher field strengths, and lower requirements for heat dissipation.

PMID: 15351274 [PubMed - indexed for MEDLINE]




chlamy /20.04.2007 21:00/
запаритесь pH подводить..




curious67 /21.04.2007 21:46/
а в чем проблема, собственно? Прописей нет на сайте? Ужас какой! Ну, в Маниатисе есть, я вообще не вижу смысла выкладывать банальные прописи, разве что действительно оригинальное, которое нигде (ил по крайней мере трудно) найти нельзя




MirnyiAtom /12.10.2007 15:49/
Сегодня услышал, что вроде как TAE буфер при нагревании (в отличие от ТБЕ) "неустойчив" и что чтобы все было ок, следует агарозу растворять в воде, а потом в этот раствор добавлять ТАЕ (50х).
Прокомментируйте пожалуйста, я не понимаю-не могу догадаться какие могут быть причины подобного поведения




Yuri K /12.10.2007 16:13/
(MirnyiAtom @ 12.10.2007 15:49)
  Сегодня услышал, что вроде как TAE буфер при нагревании (в отличие от ТБЕ) "неустойчив" и что чтобы все было ок, следует агарозу растворять в воде, а потом в этот раствор добавлять ТАЕ (50х).
Прокомментируйте пожалуйста, я не понимаю-не могу догадаться какие могут быть причины подобного поведения 


I guess, if you boil it for like half an hour some acetic acid will evaporate.

Don't forget to be very, very precise with volumes, as the Dogma demands: "57.1 ml Acetic acid" ;-)))))




YuryK /12.10.2007 16:36/
Не знаю, я миллион раз кипятил агарозу в ТАЕ, и всё ок. При этом кипячу хорошо, чтобы небыло неровностей геля.

P.S. Я другой ЮрийК ))






--- страница форума с комментариями --