Главная страница MolBiol.ru > Методы > Электрофорез > Денатурирующий агарозный гель Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Щелочной агарозный гель

 
  1. взвесить, расплавить нужное количество агарозы;
  2. охладить до 60oС:
  3. добавить
  4. 10M NaOH до 50mM => 5µl/ml,
    0.5M EDTA до 1mM => 2µl/ml;

  5. залить гель;
  6. к препарату DNA добавить:
  7. EDTA до 10mM
    0.2V 6x щелочного буфера для внесения.

  8. форез;
  9. для автографа:

    а) вымочить в 7% ТХУ 30',
    б) сушить (на стопке бумаги или с помощью гель-драера);

    для блота:

    а) перенос на Hybond N - нейтрализовать в буфере для нейтрализации,
    б) перенос на Hybond N+- сразу же перенос в 0.4М NaOH.



MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 10390

    Растворы

    6х щелочной буфер для внесения

    (хранить при NT):

    Конц.Сток10ml25ml
    NaOH0.3N10N300µl750µl
    EDTA6mM0.5M120µl300µl
    Ficoll 40018%тв.1.8g4.5g
    Ксилен. циан.0.25%тв.25mg62.5mg

    Ксиленцианол постепенно обесцвечивается в щелочном буфере.

    Буфер для щелочного фореза

    (использовать свежеприготовленный):

    Конц.Сток1L
    NaOH50mM10N5ml
    EDTA1mM0.5M2ml
    H2O mQ993ml


    Комментарии

    По пунктам

    п. 2.

  • Добавление к очень горячей агарозе NaOH вызовет ее гидролиз. Поэтому надо расплавить агарозу в воде и охладить до ~60oС.

    Дополнения, комментарии, вопросы





       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler