MolBiol.ru > Методы > Электрофорез > Камера для агар. геля | |
|
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|
Дополнения, комментарии, вопросы Comrad600 /17.10.2005 21:50/
есть одно но! Если в лабе форезят часто, и буффер в ванночке меняют часто, то запасать готовые гели на целый месяц патологично. Будет конфликт версий концентраций солей (как ни крути, а идентично подобрать не получается (испарение и прочие факторы), хотя мы применяем стандартизированный концентрат TAE 50X). Продукты получаются не очень чёткими и более размытыми (не критично, но не приятно). С Уважением! Redactor /18.10.2005 00:51/
У нас TAE 50x буфер в 10 литровой банке . Готовить можно на год и более. azizov /18.10.2005 05:16/
Много лет назад сам клеил и пользовал камеру, приведенную в Манниатисе. Рис. Система для проведения гель-электрофореза, разработанная в лаборатории Дэвиса Кювета для геля длиной 14,5 см. Материал: прозрачная акриловая пластмасса толщиной 0,6 см или прозрачная для ультрафиолета акриловая пластмасса толщиной 0,3 см. Список деталей: Обозначение Размер Количество деталей A 0,3х14,5х14,5 1 (материал прозрачный для ультрафиолета) B 0,6х14,5х3,5 2 C 0,6х14,5х7,5 2 D 0,6х14,5х6,9 2 E 0,6х6,9х27,2 2 Картинки (кликните, чтобы посмотреть полноразмерную): genseq /18.10.2005 08:07/
Буфер TAE может зацвести с непредсказуемыми для фореза последствиями. Как правило, это приводит к окрашиванию лунок (бактерии и высокомолекулярная нефрагментированная ДНК концентрируются на поверхности геля в лунках). Простейшим "антисептиком", не влияющим на форез ДНК, может служить о-фенантролин (1...10 мкг/мл). Он образует прочные комплексы с железом, без которого бактерии не размножаются. afanasev-max /19.10.2005 10:12/
ИМХО, столик в центре камеры лучше заменить бруском из орг.секла. При работе с камерой, которая изображена на рис. под столиком в процессе фореза скапливался воздушный пузырь, который имел обыкновение выныривать и сдвигать плашку (если стояла маленькая). Кроме того, с бруском будет расходоваться меньше буфера. Comrad600 /19.10.2005 22:33/
Брусок это хорошая идея. В нём можно предусмотреть охладительный змеевик. Когда я разгонял крупные фрагменты геномной ДНК реверсивным полем на относительно низких разницах потенциалов и длительном форезе(10 часов), камера нагревалась до того, что днк меняла свои характеристики, а гель становился сопливым. Пришлось делать что-то подобное с тонкими медными трубочками, раствором полиэтиленгликоля и морозильником-рециркулятором. короче получилось . А тут можно сразу это учесть. в любом случае чем холоднее, тем лучше ( в разумных пределах). RYM /24.10.2005 21:39/
Ув. Редактор! Не совсем понятно, как именно надо изготавливать гребенки - выпиливать лобзиком или на фрезерном станке? Без обращения в мастерские или на завод, самому в лаборатории и при помощи подручных инструментов (топор, молоток, ножницы и пр.) - как вырезать идеально ровные прорези между зубьями? Чтобы объем всех зубьев был одинаковым? Это важно для количественных гелей. AVP /25.10.2005 08:17/
(RYM @ 24.10.2005 14:39) Ув. Редактор! Не совсем понятно, как именно надо изготавливать гребенки - выпиливать лобзиком или на фрезерном станке? Без обращения в мастерские или на завод, самому в лаборатории и при помощи подручных инструментов (топор, молоток, ножницы и пр.) - как вырезать идеально ровные прорези между зубьями? Чтобы объем всех зубьев был одинаковым? Это важно для количественных гелей. вообшем то можно использовать расчески... правда я этим спортом не увлекался... но как пользовали другие коллеги наблюдать приходилось... по поводу фрезерного станка... знаю коллегу, который в Израиле учил тамошних умельцев (в мастерской) этому не "замысловатому ремеслу".... Redactor /25.10.2005 13:33/
(RYM @ 24.10.2005 20:39) Ув. Редактор! Не совсем понятно, как именно надо изготавливать гребенки - выпиливать лобзиком или на фрезерном станке? Конечно, на фрезерном. Заготовки зажимаются в единый блок и выпиливаются прорези. Если сделать это быстро, потом придется чистить края прорезей от недорезанных стружек. Делать гребенки самому (без станка) получится по-любому дороже, чем найти место с фрезерным станком (время, испорченый материал). Если совсем нет денег, то уж спирт-то есть в конце концов. Нельзя уж совсем-то экономить... иначе следующий вопрос будет, как лить оргстекло, да поровнее RYM /28.10.2005 02:14/
Нет, фрезерный недоступен. В Мэриланде, во всяком случае. Пришлось бы заплатить раз в 20 дороже, чем лист-прайс гребенок... И спирт не поможет. Я покупаю оборудование и реагенты из собственного кармана, потому вынужден экономить. Вот такой вот американский сайнс. Вопрос именно - как сделать САМОМУ? А не попросить дядю из мастерских. Потому что это уже не будет относиться к открытой мной теме - САМОдельные приборы. И сделать желательно не из оргстекла, вообще-то, потому что маловероятно, что без соответствующего инструментария (фрезерный станок) удастся его легко и аккуратно обработать. Совет Павла (об алюминиевых линейках) уже ближе к телу. Надо попробовать - если удастся найти нужные линейки. afanasev-max /28.10.2005 08:37/
Как вариант аккуратного прорезывания зубов: берешь несколько полотен по металлу, по краям обматываешь их скотчем и аккуратно пилишь. RYM /29.10.2005 06:20/
Что-то я не понял последнее предложение. Comrad600 /29.10.2005 18:11/
насколько я понял, надо изолентой обмотать несколько полотен ножовок на толщину которая соответсвует промежутку между лунками. А если еще и зажать заготовку в сендвиче ис другого пластика или дерева, то может получиться аккуратненько, но фреза по всем меркам лучше afanasev-max /31.10.2005 09:33/
(Comrad600 @ 29.10.2005 16:11) насколько я понял, надо изолентой обмотать несколько полотен ножовок на толщину которая соответсвует промежутку между лунками. А если еще и зажать заготовку в сендвиче ис другого пластика или дерева, то может получиться аккуратненько, но фреза по всем меркам лучше Да, да. Я именно это и предлагал. Фреза, естестенно, лучше. Mykhaylo /01.12.2005 23:54/
для упрощения работы можно как материал на гребенку взять пластмассовую линейку с нарисоваными делениями и ножовочкой. ширины пила даже одного полотна на тонких гребенках достаточно для "непрорыва" лунок. Павел /02.12.2005 08:08/
Не, Михайло, как правило пластмассовые линейки слишком толсты. Я так понимаю, что речь идет о минигелях (что я, например, предпочитаю использовать) и толщина гребенки должна быть в пределах 0.5-1.0 мм. Выпилить из пластика то можно, но сломается быстро, а для работы с тефлоном нужны станки Короче, я грубо пиарю алюминий! borigv /02.12.2005 09:15/
Похоже что Павлу за рекламу доплачивает Норильский алюминиевый... Простите за оффтоп Павел /02.12.2005 11:32/
не, Новокузнецкий. Я оттуда родом А в Норильске - никель Jackie /03.03.2006 12:14/
много читала, что для разгона белков крови используют веронал-мединаловый буфер.. такие реактивы сейчас достать сложно.. может кто подскажет, чем можно заменить этот буфер.. Гость /08.03.2006 03:25/
простите, за оффтоп, а как так получается, что такие инструкци до сих пор кому-то нужны? особенно в плане "американский сайенс"? честно говоря, думал, что самоклейный камеры и ПЦР в 3-х кастрюльках - дела давно минувших дней... afanasev-max /08.03.2006 13:11/
(Гость @ 08.03.2006 00:25) простите, за оффтоп, а как так получается, что такие инструкци до сих пор кому-то нужны? особенно в плане "американский сайенс"? честно говоря, думал, что самоклейный камеры и ПЦР в 3-х кастрюльках - дела давно минувших дней... "Американский саенс" в России не всем доступен. Когда на науку в целом институте в год три копейки идет, приходится, знаете ли, и камеры клеить, и носы мыть, и электроды из банки резать!!! Не от хорошей жизни. Гость /19.07.2006 15:56/
Тефлоновые гребенки я вырезала скальпелем из пластин тефлона 1 мм толщиной. curious67 /19.07.2006 17:17/
а ванночки как клеить и из чего, вот вопрос вопросов. У нас прекрасные камеры Hoefer, а ванночки быстро трескаются и опаньки. Они УФ-прозрачные, размера прекрасного, а вот воспроизвести бы их... afanasev-max /20.07.2006 08:46/
(curious67 @ 19.07.2006 15:17) А не надо горячую агарозу бухать!!! А простое орг.стекло не катит? curious67 /20.07.2006 11:28/
докладываю. Возможно, конечно, что горячая (каждый понимает по-своему, народу много, и этого все равно не избежать) агароза ускоряет процесс, но температура- не главное, проверено. Просто проходит определенное и не очень продолжительное время- и трескается в мелкую сеточку. При этом ванночки других производителей (того же BioRad, мною нелюбимого) ведут себя отлично, только они крайне неудобные. Стало быть, дело в качестве пластика. Простое орг.стекло подошло бы, есть куча УФ-прозрачных вариантов, но вопрос как раз в том и состоит, как их склеит так, чтобы не разваливались afanasev-max /21.07.2006 09:15/
(curious67 @ 20.07.2006 09:28) пробовал хлороформом - фигня! Течет и отваливается. купил китайский вонючий Супермомент за 5 ре. на ближайшей барахолке - сцепидо намертво! И абсолютно герметично! Главное - сделать ровненькие гладенькие края (шкуркой-нулевкой), оббезжирить(спиртиком), аккуратно нанести клей (а то будут грязные некрасивые разводы). Redactor /21.07.2006 11:45/
В самом протоколе (с которым ассоциирована эта тема -- см. вверху) приведен хороший клей. Им оформители витрин пользуются, так что купить можно. curious67 /21.07.2006 13:38/
во-во, и я с хлороформа начинал, или хлороформный раствор того же пластика. Что годится для моделек танков и вертолетов, для науки невозможно. За совет про суперклей- спасибо, а вот ссылку на протокол не нашел- может, я плохо умею пользоваться ресурсами сайта? Поясните еще раз, если не сложно Павел /21.07.2006 13:44/
протокол чего? curious67 /21.07.2006 13:45/
В самом протоколе (с которым ассоциирована эта тема -- см. вверху) приведен хороший клей. Им оформители витрин пользуются, так что купить можно. Вот где-то там должен быть клей. А вот где? afanasev-max /21.07.2006 15:00/
(curious67 @ 21.07.2006 11:45) В самом протоколе (с которым ассоциирована эта тема -- см. вверху) приведен хороший клей. Им оформители витрин пользуются, так что купить можно. Вот где-то там должен быть клей. А вот где? Просто случайно проглядели, наверное. Там есть абзац: ...Существует много рецептов склеивания оргстекла (хлороформ; пенопласт, разведенный в хлороформе и т.п.). В наших руках удобнее всего оказался специализированный клей "Acrifix 192", Rohm GmbH, Chemische Fabrik, D-64275 Darmstadt, Tel. (06151) 18-01. Это однокомпонентный клей, застывает на свету. Можно купить в интернете, так как им активно пользуются для изготовления витрин и рекламы. ... curious67 /25.07.2006 12:17/
cпаcибо большое green mouse /26.07.2006 17:24/
я извиняюсь что не в тему, но я и носы мыла, и эппендорфы, и по всему институту ходила с гелями чтоб на трансиллюминаторы пустили посмотреть... а в результате получилось несколько лет упущенного времени и дисер сейчас я делаю заново в другой лаборатории... кстати на моих плазмидах в моей бывшей лабе люди движутся к дисеру и, видимо, защитяться раньше меня ... не верю я в science за свои деньги Гость /04.02.2008 17:51/
какие требования к электрофорезу для нативного разделения ДНК (300 п.н.), чтобы при разделении не изменялась конформация разделяемых ДНК. Заранее благодарен. Андрей. genseq /05.02.2008 09:24/
4<pH<9 Температура <80 град.С guest: Андрей /06.02.2008 16:48/
Но при такой температуре ДНК наверняка раскрутится, т.е конформация явно изменится. Cinderella /20.06.2008 10:03/
а я не умею клеить, из стекла или еще из чего...и вырезать гребенки тоже, и паять я тоже не умею, а что такое папа типа электроды, вообще понятия не имею ... :-((( guest: ммм /20.06.2008 11:30/
--а я не умею клеить, из стекла или еще из чего...и вырезать гребенки тоже, и паять я тоже не умею, а что такое папа типа электроды, вообще понятия не имею ... :-((( А что очень хочется научится? По поводу разъема и папы, тот тут можно догадаться из следующих аналогий: болт-папа, гайка-мама; вилка-папа, розетка-мама. |
ГЛАВНАЯ ·
ПРОЕКТ ·
СПРАВОЧНИК ·
МЕТОДЫ ·
РАСТВОРЫ ·
РАСЧЁТЫ ·
ЛИТЕРАТУРА ·
ЗАДАЧИ ·
ФИРМЫ ·
Хеликон · Диаэм · ИнтерЛабСервис · Beckman Coulter · SkyGen · ОПТЭК · BIOCAD · Евроген · Синтол · БиоЛайн · Sartorius · Химэксперт · СибЭнзим · Tecan · Даниес · НПП "ТРИС" · Биалекса · ФизЛабПрибор · Genotek · АТГ Сервис Ген · Биоген-Аналитика
|