Главная страница MolBiol.ru > Методы > Электрофорез > Камера для агар. геля Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Камера для горизонтального электрофореза

 

    Чтобы изготовить камеру, плашки и гребенки для горизонтального фореза потребуется:

    • несколько типов оргстеклянных пластин:
      • толщиной от 0.5 до 3mm (можно заменить любым пластиком),
      • толщиной 4mm,
      • толщиной 8mm,
      • толщиной 10mm;
    • два куска платиновой проволоки по 150mm;
    • два пластиковых винта M3;
    • четыре пластиковых винта M6;
    • два электрода типа "папа" M4 с шайбами;


    Форезный прибор

    Щелкните, чтобы открыть картинку большого размера

    Для изготовления потребуется:

    • куски оргстекла:
      • 4x300x148mm3, 1х — дно камеры,
      • 4x56x300mm3, 2х — передняя и задняя стенка,
      • 4x56x140mm3, 2х — боковые стенки,
      • 4x140x160mm3, 1х — столик,
      • 8x22x140mm3 1х — подставка под столик,
      • 10x10x10mm3, 2х — крепление электродов;
      • 8x8x8mm3, 2х — крепление проволоки;
    • два пластиковых винта M3;
    • два электрода типа "папа" M4 с шайбами;
    • два куска платиновой проволоки по 150mm.

    Форезная камера показана на чертеже и фотографиях. Платиновая проволока закрепляется между оргстеклянными блоками 10x10x10mm3 и 8x8x8mm3.

    При сборке стоит обратить внимание на то, чтобы столик получился горизонтальным.



    Плашка для геля

    Щелкните, чтобы открыть картинку большого размера

    Для изготовления потребуется:

    • куски оргстекла:
      • 4x118x180mm3, 1х — дно плашки,
      • 4x15x180mm3, 2х — бортики,

    В дне и боковых стенках прорезаются пазы для гребёнок и спейсеров шириной приблизительно 2.2mm и глубиной 2.5mm. Ширина 2.2mm выбрана для того, чтобы в пазы свободно входили спейсеры и гребенки толщиной 2mm.

    Расположение пазов для спейсеров выбрано с таким расчетом, чтобы в одной и той же плашке можно было заливать 1х, 2х, 3х и 4х рядные гели и каждый фрагмент геля получался бы одинакового размера.

    Сборка не так тривиальна, как могло бы показаться. Важно, чтобы в пазах для спейсеров не осталось кусочков застывшего клея, и, в то же время, бортики были бы приклеены без щелей (иначе, будет вытекать расплавленная агароза). Не уверен, что это оптимальная процедура, но мы сначала залили пазы зубоврачебным воском (только нижнюю часть), потом приклеили боковинки, и в конце — убрали воск шпателем.


    Спейсеры и гребёнки

    Щелкните, чтобы открыть картинку большого размера

    Показанные на рисунке спейсеры совместимы с многоканальными пипетками. Имеет смысл изготовить спейсеры разной толщины (от 0.5mm до 3mm), чтобы можно было заливать лунки разной емкости. Края спейсеров, которые толще 3mm надо стачивать клинышком.





    MolBiol.ru: http://molbiol.ru
    e-mail: redactor@molbiol.ru
    просмотров: 16615


      Комментарии

      Общие

    • Перед тем, как клеить оргстекло, надо хорошенько его обезжирить — промыть в воде с моющим средством и протереть спиртом.
    • Существует много рецептов склеивания оргстекла (хлороформ; пенопласт, разведенный в хлороформе и т.п.). В наших руках удобнее всего оказался специализированный клей "Acrifix 192", Rohm GmbH, Chemische Fabrik, D-64275 Darmstadt, Tel. (06151) 18-01. Это однокомпонентный клей, застывает на свету. Можно купить в интернете, так как им активно пользуются для изготовления витрин и рекламы.
    • Перед тем, как делать большую партию гребёнок, стоит убедиться, что оргстеклянный лист однороден по толщине. Если не однороден — ничего страшного, но вы будете знать заранее, на какую толщину гребёнок стоит рассчитывать.
    • Имеет смысл иметь в лаборатории МНОГО плашек, спейсеров и гребенок. Удобно заливать сразу множество плашек, накрывать их Saran-wrap и хранить в холодильнике не вынимая гребёнки (хранятся до месяца). Гребёнки вынимаются непосредственно перед форезом.
    • Ещё один удобный вариант плашек — использовать крышки от иммунологических планшетов или полипропиленовые крышки от PCR-плашек.


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


    Дополнения, комментарии, вопросы

    Comrad600 /17.10.2005 21:50/
    есть одно но!

    Если в лабе форезят часто, и буффер в ванночке меняют часто, то запасать готовые гели на целый месяц патологично. Будет конфликт версий концентраций солей (как ни крути, а идентично подобрать не получается (испарение и прочие факторы), хотя мы применяем стандартизированный концентрат TAE 50X). Продукты получаются не очень чёткими и более размытыми (не критично, но не приятно).
    С Уважением!



    Redactor /18.10.2005 00:51/
    У нас TAE 50x буфер в 10 литровой банке smile.gif . Готовить можно на год и более.



    azizov /18.10.2005 05:16/
    Много лет назад сам клеил и пользовал камеру, приведенную в Манниатисе.
    Рис. Система для проведения гель-электрофореза, разработанная в лаборатории Дэвиса


    Кювета для геля длиной 14,5 см.
    Материал: прозрачная акриловая пластмасса толщиной 0,6 см или прозрачная для ультрафиолета акриловая пластмасса толщиной 0,3 см.

    Список деталей:
    Обозначение Размер Количество деталей
    A 0,3х14,5х14,5 1 (материал прозрачный для ультрафиолета)
    B 0,6х14,5х3,5 2
    C 0,6х14,5х7,5 2
    D 0,6х14,5х6,9 2
    E 0,6х6,9х27,2 2



    Картинки (кликните, чтобы посмотреть полноразмерную):
    5.24к -

    genseq /18.10.2005 08:07/
    Буфер TAE может зацвести с непредсказуемыми для фореза последствиями. Как правило, это приводит к окрашиванию лунок (бактерии и высокомолекулярная нефрагментированная ДНК концентрируются на поверхности геля в лунках). Простейшим "антисептиком", не влияющим на форез ДНК, может служить о-фенантролин (1...10 мкг/мл). Он образует прочные комплексы с железом, без которого бактерии не размножаются.



    afanasev-max /19.10.2005 10:12/
    ИМХО, столик в центре камеры лучше заменить бруском из орг.секла. При работе с камерой, которая изображена на рис. под столиком в процессе фореза скапливался воздушный пузырь, который имел обыкновение выныривать и сдвигать плашку (если стояла маленькая). Кроме того, с бруском будет расходоваться меньше буфера.



    Comrad600 /19.10.2005 22:33/
    Брусок это хорошая идея. В нём можно предусмотреть охладительный змеевик. Когда я разгонял крупные фрагменты геномной ДНК реверсивным полем на относительно низких разницах потенциалов и длительном форезе(10 часов), камера нагревалась до того, что днк меняла свои характеристики, а гель становился сопливым. Пришлось делать что-то подобное с тонкими медными трубочками, раствором полиэтиленгликоля и морозильником-рециркулятором. короче получилось smile.gif. А тут можно сразу это учесть. в любом случае чем холоднее, тем лучше ( в разумных пределах).



    RYM /24.10.2005 21:39/
    Ув. Редактор!
    Не совсем понятно, как именно надо изготавливать гребенки - выпиливать лобзиком или на фрезерном станке? Без обращения в мастерские или на завод, самому в лаборатории и при помощи подручных инструментов (топор, молоток, ножницы и пр.) - как вырезать идеально ровные прорези между зубьями? Чтобы объем всех зубьев был одинаковым? Это важно для количественных гелей.



    AVP /25.10.2005 08:17/
    (RYM @ 24.10.2005 14:39)
    Ссылка на исходное сообщение  Ув. Редактор!
    Не совсем понятно, как именно надо изготавливать гребенки - выпиливать лобзиком или на фрезерном станке? Без обращения в мастерские или на завод, самому в лаборатории и при помощи подручных инструментов (топор, молоток, ножницы и пр.) - как вырезать идеально ровные прорези между зубьями? Чтобы объем всех зубьев был одинаковым? Это важно для количественных гелей.


    вообшем то можно использовать расчески... правда я этим спортом не увлекался... но как пользовали другие коллеги наблюдать приходилось...
    по поводу фрезерного станка... знаю коллегу, который в Израиле учил тамошних умельцев (в мастерской) этому не "замысловатому ремеслу"....



    Redactor /25.10.2005 13:33/
    (RYM @ 24.10.2005 20:39)
    Ссылка на исходное сообщение  Ув. Редактор!
    Не совсем понятно, как именно надо изготавливать гребенки - выпиливать лобзиком или на фрезерном станке?

    Конечно, на фрезерном. Заготовки зажимаются в единый блок и выпиливаются прорези. Если сделать это быстро, потом придется чистить края прорезей от недорезанных стружек.
    Делать гребенки самому (без станка) получится по-любому дороже, чем найти место с фрезерным станком (время, испорченый материал). Если совсем нет денег, то уж спирт-то есть в конце концов.
    Нельзя уж совсем-то экономить... иначе следующий вопрос будет, как лить оргстекло, да поровнее wink.gif



    RYM /28.10.2005 02:14/
    Нет, фрезерный недоступен. В Мэриланде, во всяком случае. Пришлось бы заплатить раз в 20 дороже, чем лист-прайс гребенок... И спирт не поможет. Я покупаю оборудование и реагенты из собственного кармана, потому вынужден экономить. Вот такой вот американский сайнс.

    Вопрос именно - как сделать САМОМУ? А не попросить дядю из мастерских. Потому что это уже не будет относиться к открытой мной теме - САМОдельные приборы.

    И сделать желательно не из оргстекла, вообще-то, потому что маловероятно, что без соответствующего инструментария (фрезерный станок) удастся его легко и аккуратно обработать.

    Совет Павла (об алюминиевых линейках) уже ближе к телу. Надо попробовать - если удастся найти нужные линейки.



    afanasev-max /28.10.2005 08:37/
    Как вариант аккуратного прорезывания зубов: берешь несколько полотен по металлу, по краям обматываешь их скотчем и аккуратно пилишь.



    RYM /29.10.2005 06:20/
    Что-то я не понял последнее предложение.



    Comrad600 /29.10.2005 18:11/
    насколько я понял, надо изолентой обмотать несколько полотен ножовок на толщину которая соответсвует промежутку между лунками. А если еще и зажать заготовку в сендвиче ис другого пластика или дерева, то может получиться аккуратненько, но фреза по всем меркам лучше



    afanasev-max /31.10.2005 09:33/
    (Comrad600 @ 29.10.2005 16:11)
    Ссылка на исходное сообщение  насколько я понял, надо изолентой обмотать несколько полотен ножовок на толщину которая соответсвует промежутку между лунками. А если еще и зажать заготовку в сендвиче ис другого пластика или дерева, то может получиться аккуратненько, но фреза по всем меркам лучше

    Да, да. Я именно это и предлагал. Фреза, естестенно, лучше.



    Mykhaylo /01.12.2005 23:54/
    для упрощения работы можно как материал на гребенку взять пластмассовую линейку с нарисоваными делениями и ножовочкой. ширины пила даже одного полотна на тонких гребенках достаточно для "непрорыва" лунок.



    Павел /02.12.2005 08:08/
    Не, Михайло, как правило пластмассовые линейки слишком толсты. Я так понимаю, что речь идет о минигелях (что я, например, предпочитаю использовать) и толщина гребенки должна быть в пределах 0.5-1.0 мм. Выпилить из пластика то можно, но сломается быстро, а для работы с тефлоном нужны станки frown.gif
    Короче, я грубо пиарю алюминий! smile.gif



    borigv /02.12.2005 09:15/
    Похоже что Павлу за рекламу доплачивает Норильский алюминиевый... lol.gif
    Простите за оффтоп



    Павел /02.12.2005 11:32/
    не, Новокузнецкий. Я оттуда родом smile.gif А в Норильске - никель umnik.gif



    Jackie /03.03.2006 12:14/
    много читала, что для разгона белков крови используют веронал-мединаловый буфер.. такие реактивы сейчас достать сложно.. может кто подскажет, чем можно заменить этот буфер..



    Гость /08.03.2006 03:25/
    простите, за оффтоп, а как так получается, что такие инструкци до сих пор кому-то нужны? особенно в плане "американский сайенс"? честно говоря, думал, что самоклейный камеры и ПЦР в 3-х кастрюльках - дела давно минувших дней...



    afanasev-max /08.03.2006 13:11/
    (Гость @ 08.03.2006 00:25)
    Ссылка на исходное сообщение  простите, за оффтоп, а как так получается, что такие инструкци до сих пор кому-то нужны? особенно в плане "американский сайенс"? честно говоря, думал, что самоклейный камеры и ПЦР в 3-х кастрюльках - дела давно минувших дней...

    "Американский саенс" в России не всем доступен. Когда на науку в целом институте в год три копейки идет, приходится, знаете ли, и камеры клеить, и носы мыть, и электроды из банки резать!!! Не от хорошей жизни.



    Гость /19.07.2006 15:56/
    Тефлоновые гребенки я вырезала скальпелем из пластин тефлона 1 мм толщиной.



    curious67 /19.07.2006 17:17/
    а ванночки как клеить и из чего, вот вопрос вопросов. У нас прекрасные камеры Hoefer, а ванночки быстро трескаются и опаньки. Они УФ-прозрачные, размера прекрасного, а вот воспроизвести бы их...



    afanasev-max /20.07.2006 08:46/
    (curious67 @ 19.07.2006 15:17)
    Ссылка на исходное сообщение  а ванночки быстро трескаются и опаньки.

    А не надо горячую агарозу бухать!!!
    А простое орг.стекло не катит?



    curious67 /20.07.2006 11:28/
    докладываю. Возможно, конечно, что горячая (каждый понимает по-своему, народу много, и этого все равно не избежать) агароза ускоряет процесс, но температура- не главное, проверено. Просто проходит определенное и не очень продолжительное время- и трескается в мелкую сеточку. При этом ванночки других производителей (того же BioRad, мною нелюбимого) ведут себя отлично, только они крайне неудобные. Стало быть, дело в качестве пластика. Простое орг.стекло подошло бы, есть куча УФ-прозрачных вариантов, но вопрос как раз в том и состоит, как их склеит так, чтобы не разваливались



    afanasev-max /21.07.2006 09:15/
    (curious67 @ 20.07.2006 09:28)
    Ссылка на исходное сообщение  но вопрос как раз в том и состоит, как их склеит так, чтобы не разваливались

    пробовал хлороформом - фигня! Течет и отваливается.
    купил китайский вонючий Супермомент за 5 ре. на ближайшей барахолке - сцепидо намертво! И абсолютно герметично! Главное - сделать ровненькие гладенькие края (шкуркой-нулевкой), оббезжирить(спиртиком), аккуратно нанести клей (а то будут грязные некрасивые разводы).



    Redactor /21.07.2006 11:45/
    В самом протоколе (с которым ассоциирована эта тема -- см. вверху) приведен хороший клей. Им оформители витрин пользуются, так что купить можно.



    curious67 /21.07.2006 13:38/
    во-во, и я с хлороформа начинал, или хлороформный раствор того же пластика. Что годится для моделек танков и вертолетов, для науки невозможно. За совет про суперклей- спасибо, а вот ссылку на протокол не нашел- может, я плохо умею пользоваться ресурсами сайта? Поясните еще раз, если не сложно



    Павел /21.07.2006 13:44/
    протокол чего?



    curious67 /21.07.2006 13:45/
    В самом протоколе (с которым ассоциирована эта тема -- см. вверху) приведен хороший клей. Им оформители витрин пользуются, так что купить можно.

    Вот где-то там должен быть клей. А вот где?



    afanasev-max /21.07.2006 15:00/
    (curious67 @ 21.07.2006 11:45)
    Ссылка на исходное сообщение  В самом протоколе (с которым ассоциирована эта тема -- см. вверху) приведен хороший клей. Им оформители витрин пользуются, так что купить можно.

    Вот где-то там должен быть клей. А вот где?

    Просто случайно проглядели, наверное.
    Там есть абзац:
    ...Существует много рецептов склеивания оргстекла (хлороформ; пенопласт, разведенный в хлороформе и т.п.). В наших руках удобнее всего оказался специализированный клей "Acrifix 192", Rohm GmbH, Chemische Fabrik, D-64275 Darmstadt, Tel. (06151) 18-01. Это однокомпонентный клей, застывает на свету. Можно купить в интернете, так как им активно пользуются для изготовления витрин и рекламы. ...



    curious67 /25.07.2006 12:17/
    cпаcибо большое



    green mouse /26.07.2006 17:24/
    я извиняюсь что не в тему, но я и носы мыла, и эппендорфы, и по всему институту ходила с гелями чтоб на трансиллюминаторы пустили посмотреть... а в результате получилось несколько лет упущенного времени и дисер сейчас я делаю заново в другой лаборатории... кстати на моих плазмидах в моей бывшей лабе люди движутся к дисеру и, видимо, защитяться раньше меня wall.gif... не верю я в science за свои деньги



    Гость /04.02.2008 17:51/
    какие требования к электрофорезу для нативного разделения ДНК (300 п.н.), чтобы при разделении не изменялась конформация разделяемых ДНК. Заранее благодарен. Андрей.



    genseq /05.02.2008 09:24/
    4<pH<9
    Температура <80 град.С



    guest: Андрей /06.02.2008 16:48/
    Но при такой температуре ДНК наверняка раскрутится, т.е конформация явно изменится.



    Cinderella /20.06.2008 10:03/
    а я не умею клеить, из стекла или еще из чего...и вырезать гребенки тоже, и паять я тоже не умею, а что такое папа типа электроды, вообще понятия не имею ... :-(((



    guest: ммм /20.06.2008 11:30/
    --а я не умею клеить, из стекла или еще из чего...и вырезать гребенки тоже, и паять я тоже не умею, а что такое папа типа электроды, вообще понятия не имею ... :-(((

    А что очень хочется научится? smile.gif

    По поводу разъема и папы, тот тут можно догадаться из следующих аналогий: болт-папа, гайка-мама; вилка-папа, розетка-мама.








       
Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler