Главная страница MolBiol.ru > Методы > Клонирование > Методы осаждения ДНК Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Другие методы осаждения ДНК(РНК) - PEG, Zn, CTAB

 

    Осаждение ДНК PEG

    Удобный метод для переосаждения DNA после расщепления RNase.

  1. оптимальные условия:
  2. PEG => 13%
    MgCl2 => 10mM

  3. 10' NT;
  4. ЦФ 10' NT.
  • Выход
  • ~0.1 µg/ml => ~70%
    >1 µg/ml => ~95-100%

  • Можно использовать вариант осаждения (5%PEG, 0.6M NaCl – конечные концентрации).
  • Эффективно осаждаются только >150bp фрагменты.
  • От PEG можно отмыться 2х70% EtOH.

    Осаждение ДНК Zn

  1. убедиться, что образец:
  2. * содержит по крайней мере 5mM Tris (Cl, Borat, Acetate), pH7.0-8.5,
    * и не содержит >0.1mM EDTA;

  3. + NaP до 0.1-1.0mM фосфата;
  4. + 0.1M ZnCl2
  5. для V<500 µl -> 1/20,
    для V>500 µl -> 1/100;

  6. смешать, 15' NT;
  7. ЦФ 5';
  8. ресуспензировать осадок в буфере с минимум 1mM EDTA (pH не больше 8.0).
  • При таком осаждении осаждается всё: DNA, RNA, белки, бактерии.
  • Осаждение плазмидной DNA: от 0.1 µg/ml; олигонуклеотидов (20b) от 10 µg/ml.

    Осаждение CTAB

  1. DNA + CTAB (из 5% стока) до 0.25-1.4%;
  2. 2'-ON NT;
  3. ЦФ 10'.
  4. растворить в буфере с высокой ионной силой, переосадить спиртом.

  • CTAB (Cetrimide CH3(CH2)15N(CH3)3Br, Mw=364.5)
  • CTAB — сильный детергент. Он эффективно разрушает ДНК — белковые комплексы. Комплекс нуклеиновых кислот с CTAB растворим только в высокой соли (2M LiCl, 1M NaCl). Для очистки нуклеиновых кислот раствор нуклеиновых кислот в 1.5M NaCl, 2% CTAB можно экстрагировать хлороформом. CTAB образует нерастворимый комплекс с DNA при концентрации соли ниже, чем 0.5M (выпадает в осадок при добавлении 2-2.5V EtOH или 0.7V изопропанола). Полисахариды, мембраны, фенолы и т. п. при этом не осаждаются. После осаждения, для очистки от остатков CTAB требуется переосаждение, осадок лучше сполоснуть 80% спиртом (CTAB в нём растворим).


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 13452

    Дополнения, комментарии, вопросы





       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler