Главная страница MolBiol.ru > Методы > Олигонуклеотиды > Общие вопросы Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Олигонуклеотиды

 

    Растворение лиофилизированного стока

  1. ЦФ ~3';
  2. добавить H2O, хорошо смешать;
  3. дать постоять NT 5-10';
  4. снова смешать;
  5. измерить концентрацию;
  6. отлить небольшую "рабочую" аликвоту в подписанную пробирку;
  7. если праймер потребуется в работе скоро, то развести небольшое количество(!) до "рабочей концентрации" в подписанной пробирке;
  8. всё заморозить на -20oС.


  9. Хранение

    Способ храненияДопустимое время хранения
    Лиофилизированные, 4oС,-20oСпрактически неограниченное время
    Раствор (500-100pmol/ µl),-20oСнесколько лет
    Раствор (500-100pmol/ µl), +4oСнесколько недель
    Раствор (~10pmol/ µl),-20oС~ до года
    Раствор (~10pmol/ µl), +4oСнесколько недель


    Молекулярный вес

    Mw (g/mol) = [dAx312.2 + dCx288.2 + dGx328.2 + dTx303.2]

    + [ (MW контериона) x N]
    + [17 + (2xMW контериона) для фосфорилированного]
    + [-61- (MW контериона) для дефосфорилированного]

    Mw(Na+) => 23.0
    Mw(K+) => 39.1
    Mw(Triethylammonium+) => 102.2
    дефософолированный олигонуклеотид => -61,
    фософолированный => +17.


    Приближенная формула Mw ~ 324.5[Da]xN , где N-длина олигонуклеотида.



MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 14504


    Комментарии

    Общие

  • Праймеры лучше разводить на свежей mQ.
  • Иногда при длительном хранении на +4oС (или после большого количества замораживаний-оттаиваний) праймер "портится" - PCR с его участием даёт очень низкий выход. Мы не знаем, что при этом происходит, но проблема вполне решается 3' кипячением и резким охлаждением.


  • По пунктам

    п. 1.

  • Нужно провести "хорошее" центрифугирование, так как лёгкий лиофилизат весьма плохо садится на дно пробирки.
  • п. 5.

  • Неправильное количество олигонуклеотида, указанное производителем, скорее не исключение, а правило. Мы рекомендуем пренебрегать измерением концентрации лишь если вы постоянно работаете с этим производителем и успели убедиться в его надёжности.

    Дополнения, комментарии, вопросы





       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler