Главная страница MolBiol.ru > Методы > RNA > Препарирование мыши Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Препарирование мышки

 

    Необходимые инструменты и оборудование

  1. препаровальный столик: можно приготовить из куска картона/пенопласта (но лучше всего – пробки), покрытого ватманом на полиэтиленовой основе/полиэтиленом и 2-3 слоями фильтровалки;
  2. ножницы: (i) маленькие-остроконечные и (ii) тупые (удобно пользоваться, когда есть опасность повредить соседние органы);
  3. пинцеты (минимум два, желательно иметь и по паре тупых и острых);
  4. кронцанги - желательно;
  5. канцелярские кнопки - для фиксации на препаровальном столике (лучше - с "высокой рукояткой");
  6. изотонический солевой раствор, удобно готовить 20х стоковый раствор (p=1.108):

  7. 20хСток500ml1 l
    NaCl145mM2.9M58.44g/M85g170g
    H2O  mQ469ml938ml
  8. весы - с точностью не ниже 0.01g;
  9. этанол - в промывалке;
  10. 2-3 чашки Петри для промывки;
  11. 20-50ml шприц и к нему обрезанные (чтобы можно было надеть на шприц) 200 µl типчики для промывки кишок;
  12. салфетки (удобнее, если разрезанные на небольшие кусочки);
  13. запас жидкого азота для хранения органов;
  14. подписанные (по названиям органов) 50 ml пробирки с проколотыми дном и крышками (чтобы не взорвались) в жидком азоте;
  15. лёд.

    Умерщвление мышки

    Разрыв шейных позвонков

    Умерщвление мышки разрывом шейных позвонков
  1. поместить мышку на сетку, как показано на рисунке, удерживая за хвост;
  2. потянуть за хвост (не слишком сильно) - мышь, сопротивляясь, будет тянуться вперёд, держась за прутья - это исходное положение, дальше желательно работать уверенно и быстро;
  3. большим пинцетом или ножницами прижать (достаточно плотно, чтобы не вывернулась) голову мыши (сразу за затылком) к сетке;
  4. потянуть за хвост одновременно поднимая мышь до угла ~90o (вы должны почувствовать разрыв позвонков).


  5. Газовая камера

    Газовая камера

  6. собрать "газовую камеру";
  7. накрыть крышкой, дать постоять ~5';
  8. мышку положить на поднос, закрыть крышку;
  9. через ~2' - все готово.


  10. Предварительный осмотр

  11. определить, самец это или самка;
  12. состояние шерсти - должна быть чистой и ровной (это критерий нормального самочувствия);
  13. нет ли дегидратации (защемлённая кожа должна быстро возвращаться на место);



  14. Препарирование

  15. намочить шерсть этанолом (чтобы она не лезла внутрь и ради дезинфекции);
  16. Разрез кожи брюшка
  17. зафиксировать мышку на столике брюшком кверху (проткнув кнопками лапки);
  18. сделать три разреза кожи брюшка (но не брюшной стенки!):
  19. (1) начало - антериор по отношению к мочевому отверстию, конец - под подбородком;
    (2) и (3) начало - там же, где начало первого разреза, конец - у колен;

  20. раскрыть кожу, зафиксировать;
  21. если нужны - отделить (prepuital glands) /Pg/;
  22. отделить доступную часть (L1-L5) лимфатических узлов (lymph nodes) /Ln/;
  23. отделить слюнные железы (salivary glands) /Sg/
  24. ;

    Расположение лимфатических узлов

      Название узлаНазвание узла (рус.).Парные?Расположение.
    L3 axillary Подмышечные + Подмышка
    L4 brachial Брахиальные. + Располагаются на двуглавой мышце, под грудной клеткой.
    L2 deep cervical Глубокие шейные + Скрыты за слюнными железами.
    L5 inguinal Паховые + Прикреплены к коже паха.
      lumbar Поясничные. + Антериально по отношению к разветвлению брюшной аорты.
      mediastinal Грудинные. + В области тимуса.
      mesenteric Брыжеечные. NO Брыжейки тонкой кишки и поджелудочной железы.
    L6 popliteal Подколенный. + За коленом, между приводящей и полумембранной мышцами.
      pyloric (pancreatic) Поджелудочные. + Антериор по отношению к поджелудочной железе, рядом с привратником желудка
      renal Почечные. + Между аортой и почками.
      sacral Крестцовый. NO Постериально по отношению к разветвлению брюшной аорты.
      sciatic Седалищные. + На спине, под седалищным нервом.
    L1 superficial cervical Внешние шейные. + Антериор по отношению к слюнным железам.
  25. если мышь - самка, причем беременная, кормящая или весьма упитанная - можно отделить молочные железы (mammary glands) /Mg/ (творожистая ткань в брюшном эпидермисе);
  26. отрезать нижнюю челюсть (разрезав мандибулярные соединения), срезать язык (tongue) /Ton/;
  27. отделить мозг:
    1. разрезать ножницами шею;
    2. отделить голову, оставшуюся тушку накрыть Saran-wrap, сверху насыпать лёд;
    3. снять с головы шерсть и выбросить, обычно при этой операции обнажаются находящиеся над глазами (Harderian gland) /Hg/.;
    4. острым пинцетом проделать ряд дырочек по средней линии черепа;
    5. пинцетом разломить черепную коробку на две половины (концы пинцета должны быть направлены вверх, чтобы не повредить мозг; следить, чтобы не оторвались слабо прикреплённые обонятельные доли);
    6. перевернуть череп, пинцетом помочь мозгу выскользнуть вниз;
    7. относительно легко отделяются:
    8. Отделы головного мозга
      • - обонятельные доли (olfactory lobes) /B-O/(лежат снаружи, проблем быть не должно);
      • - большие полушария (cerebrium) /B-e/(аккуратно придерживая пинцетом за medulla поставить мозг на антериор часть, аккуратно отогнуть/расправить большие полушария, разорвать пинцетом (рвутся очень легко) нервы, соединяющие большие полушария с medulla;
      • - (cerebellum) (отогнуть/расправить cerebellum (сбоку), разорвать пинцетом (рвутся очень легко) нервы, соединяющие cerebellum с medulla) /B-ll/;
      • - (medulla) (остаток) /B-M/;
  28. аккуратно разрезать брюшную мышцу до грудины, вдоль рёбер и вдоль позвоночника (можно использовать как мышечную ткань);
  29. отделить мочеполовую систему (urogenital system):


  30. если самец

    а) отделить тестикулы (testicle) /Tc/ (мешочки, содержащие тестикулы, нужно освободить от жира, вытянуть вместе с (epididymes), обрезать (vas deferens) - они соединяются с мочеиспускательным каналом (uretra) рядом с простатой);
    б) отделить seminal vesicles /Sv/;



    если самка

    освободить от жира матку (uterus) /Ut/ с яичниками (ovaries) /Ov/ и фаллопиевыми трубами (fallopian tube) ;

  31. отделить пищеварительную систему:
    1. отрезать как можно более постериор толстую кишку (colon). Аккуратно размотать кишки до желудка, при этом не лениться аккуратно отцеплять брыжейку;
         Вн!!! отделение поджелудочной железы: кишка будет легко вытягиваться, пока дело не дойдёт до поджелудочной железы (рыжевато-коричневая), в этом же месте находятся поджелудочные лимфатические узлы, но их не увидеть - слишком мелкие;
         При разматывании последовательно (с заду к переду) отделяются следующие зоны пищеварительной системы:
      • - rectum;
      • - нисходящая прямая кишка (descending colon) /Co/;
      • - восходящая прямая кишка (ascending colon);
      • - (cecum) (похожий на мешок);
      • - (ileum);
      • - тощая кишка (jejunum) /In/;
      • - двенадцатиперстная кишка (duodenum);
      • - желудок (stomach) /St/;
      • - пищевод (esophagus);
    2. отделить селезёнку (spleen) /Spl/;
    3. отделить прямую кишку (colon) /Co/, промыть её снаружи и изнутри (шприцом) изотоническим раствором;
    4. отделить тонкую кишку (intestines) /In/ (отрезать от желудка по двенадцатиперстной кишке), промыть её снаружи и изнутри (шприцом) изотоническим раствором;
    5. обрезать пищевод над желудком (stomach) /St/ (отступив от него на 0.25-0.5mm), сполоснуть его снаружи, разрезать, вывернуть наизнанку, сполоснуть изнутри;
  32. отделить печень (liver) /Liv/:
    1. обрезать вену с грудной стороны печени;
    2. вытянуть (антериор) пищевод;
    3. отделить печень, вытащить из неё сгусток крови (если есть), сполоснуть в изотоническом растворе;
      Вн!!! к медианной доле прикреплён желчный пузырь;
  33. отделить почки (kidney) /Kid/ с надпочечниками (!!!) (adrenal glands) /Ad/, снять оболочку (подсунув пинцет под оболочку в районе почечной лоханки); надпочечники обычно остаются прикреплёнными к оболочке (надпочечники самцов по размеру больше, чем надпочечники самок);
  34. отделить органы грудной клетки:
    1. вырезать грудину - приподнять её пинцетом, ножницами проткнуть диафрагму и разрезать до шейного кольца (концы ножниц приподнимать кверху, чтобы не повредить внутренние органы). Вн!!! Тимус /Ty/ часто остаётся прилепленным к грудине;
    2. зацепив за пищевод (esophagus) вытянуть лёгкие (lung) /Lg/ и прикреплённые к ним органы (обрезая ножницами соединение с позвоночником), отделить пищевод и трахею (trachea) от глотки как можно более антериор (чтобы не потерять щитовидные железы (thyroids);
      Но!!! - вряд ли это имеет смысл, если мышь убита разрывом шейных позвонков);
    3. отделить (если требуется) щитовидную железу (рыжевато-коричневая, на антериор конце трахеи);
    4. отделить тимус (thymus) /Thy/ (прозрачный, расположен над/или вентрально по отношению к сердцу), у молодых мышей он относительно большой, но с возрастом уменьшается. Рядом с ним находятся два небольших грудинных лимфоузла (mediastinal lymph nodes), лучше их отделить (расположены дорсо-латерально по отношению к тимусу);
    5. отделить сердце (heart) /Ht/, разрезать, удалить кровь, сполоснуть;


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 16333



Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/
Redactor /15.02.2006 20:21/
The Virtual Mouse Necropsy:
http://www.geocities.com/virtualbiology/ ( http://www.geocities.com/virtualbiology/ )







    Комментарии

    Общие

  • В наших руках процедура от убийства мышки до извлечения всех перечисленных выше органов занимала 1h (правда, начиная с третьей мышки);
  • Сразу после извлечения орган надо сполоснуть в изотоническом растворе и заморозить в жидком азоте. Такой способ весьма слабо отмывает от крови. Нам кажется, что мы слышали о способе, когда через сердце можно промыть все ткани мыши.


  • По пунктам

    п. 1.

  • Выбор из этих двух способов зависит от того, что вы собираетесь делать с тканями мыши дальше. "Газовая камера" практически не повреждает внешнюю структуру тканей и, видимо, оптимальна для морфологического исследования. В то же время CO2 проникает ко всем клеткам организма, гибель происходит на клеточном уровне и для молекулярных исследований это более деструктивный способ.
  • Разрыв шейных позвонков вызывает кровоизлияние в области шеи.
  • п. 4.

  • Мышь будет дёргаться и раскрывать рот ещё ~1', но это уже конвульсии после смерти.
  • п. 7.

  • Поднос не должен быть холодным (!) - пластиковый или деревянный. Сверху положите фильтровалку. Поднос должен быть достаточно большим, чтобы животное не свалилось в сухой лед.
  • п. 17.

  • К тому же, эти лимфатические узлы и самые крупные.
  • Некое представление о расположении внутренних лимфоузлов (L2 и L4): если смотреть на зафиксированную мышь сверху - они находятся под соответствующими внешними: L1 и L3.
  • п. 19.

  • Беременная - имеется в виду достаточно поздняя стадия беременности.
  • п. 24.

  • Нам поджелудочную железу найти не удалось.

    Дополнения, комментарии, вопросы





       
Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler