Главная страница MolBiol.ru > Методы > Белки > Окрашивание гелей Кумасси G-250 Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Окрашивание белковых гелей Coomassie brilliant blue G-250

Кригер Инна (kriginkri@mail.ru)

Слабо чувствительный метод (по сравнению с окрашиванием кумасси R-250, серебряным или Zn/имидазолом). Однако он: (i) очень быстр; (ii) гель именно "проявляется", то есть читать можно в процессе окрашивания, а не отмывки; (iii) гель можно высушить и сохранить.
  1. поместить гель в Fixing solution на 5-10' (лучше с покачиванием);
  2. перенести гель в Staining solution, в свежем растворе инкубировать при покачивании минут 5-10;
  3. отмывать гель в обычной воде: кипятить, греть, покачивать - пока не удовлетворитесь результатом;
  4. гель либо фотографировать, либо сушить.


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 14382

    Растворы

    Fixing solution (хранить при NT в плотно закрытой посуде)

    Perchloric acid4%
    Ethanol50%


    Staining solution (хранить при NT в плотно закрытой посуде)

    Coomassie G-2500.1-0.5 %
    Perchloric acid4 %
    сначала растворяется в воде краска, затем добавляется кислота; обязательно профильтровать!


    Комментарии

    Общие

  • Работать с растворами, содержащими перхлорную кислоту желательно под тягой!
  • Это модифицированный метод из статьи Reisner A.H., Nemes P., Bucholtz C. 1975. Anal.Biochem. 99:474-476, использующийся в Институте белка РАН.
  • При аккуратном использовании и свежих растворах метод позволяет читать гель уже минут через 30 после окончания электрофореза, что существенно короче, чем время, предлагаемое стандартным методом с использованием уксусной кислоты-метанола.


  • По пунктам

    п. 1.

  • Время инкубации зависит от степени свежести раствора. Индикатором того, что пора вынимать гель, может служить пожелтение фронта бром-фенолового красителя.
  • п. 2.

  • По мере старения раствора (его цвет при этом будет меняться с коричневого на буро-синий) время инкубации будет расти. Чтобы сократить это время, можно слегка подогревать раствор (кипятить не желательно - улетает кислота, и раствор быстро портится).


    Дополнения, комментарии, вопросы





       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler