Главная страница MolBiol.ru > Методы > Белки > Окрашивание гелей Кумасси G-250 Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Ещё один протокол с Coomassie brilliant blue G-250

Недостаток классических методов - длительность окрашивания (несколько часов). А хочется побыстрее, и иногда даже нужно побыстрее. Этот рецепт работает за 5-30 мин. Желаю приятного окрашивания!
Shurik
  1. после SDS-PAGE гель отмывается 5' в воде или согласно стандартной процедуре;
  2. перенести гель в Staining solution, в свежем растворе инкубировать при покачивании минут 5-10;
  3. окрашивается 5-30', в крайнем случае 60' (при длительной инкубации придется долго отмывать гель);
  4. промыть водой, а если передержали гель в красителе, то можно убыстрить процесс 7% уксусной кислотой;
  5. гель либо фотографировать, либо сушить.


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 12555

    Растворы

    Staining solution (хранить при NT в плотно закрытой посуде)

    Coomassie G-2500.05%
    Трихлоруксусная кислота2%
    Этанол или метанол20%
    Кумасси растворяется в спирте, затем добавляется вода и медленно, при перемешивании, TCA stock solution (10-100% по желанию). Готовый продукт не содержит никаких нерастворившихся частиц. Используется многократно.


    Комментарии

    Общие

  •      Похожий протокол присылала Инна Кригер. Раствор Инны основан на хлорной кислоте, подобный ему мы много лет использовали в нашей лабе. Также подобный продается Сигмой (#B8872 Brilliant Blue G-Perchloriс acid solution).
         Мой протокол основан на TCA и схож с сигмовским #B4523 Brilliant Blue G-TCA solution (0.08% Brilliant Blue G in 12% TCA, pH has been adjusted with H2SO4 and KOH to remove insolubles), но еще содержит спирт и не нуждается в доводке рН.
         Кроме того, Сигма продает коллоидальный раствор - #B2025 Brilliant Blue G-Colloidal Concentrate (0.1% G, 0.29M H3PO4, 16% sat. (NH4)2SO4. Pierse продает Gel Code Blue Stain reagent (sensitivity 8 ng) и BioRad - BioSafe Coomassie Stain (8-28 ng). Я сравнивал свой раствор с двумя последними и не нашел различий в окрашивании (кроме скорости окраски).
  • Вообще-то нужно указывать по какому белку проверялась чувствительность. Например, я прежде работал с запасными глобулинами семян, так окрашивание серебром не увеличивает чувствительности. Если работать с грубыми экстрактами, то некоторые бэнды окрашиваются лучше в кумасси. Ещё я сравнивал окрашивание альбуминовой фракции экстрактов семян по серебру (кит Bio-Rad) с моим раствором, так серебро было чувствительнее где-то в 2-5 раз всего-навсего.


  • По пунктам

    п. 4.

  • При хранении в воде при комнатной температуре гель быстро зарастает, лучше ставить в холодильник.


    Дополнения, комментарии, вопросы





       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler