Главная страница MolBiol.ru > Методы > Иммуногисто.. > Обработка предметных и покровных стёкол Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Обработка стекол для микроскопии

Елена Набирочкина
Институт Биологии Гена РАН

    Обработка предметных стекол TESPA

  1. промыть стекла 70% EtOH;
  2. промыть 20'' в 1N HCl;
  3. 2х промыть H2O;
  4. промыть 96% EtOH;
  5. высушить 150oС, 1-2h;
  6. 10'' в {2% TESPA в ацетоне};
  7. 2х 10'' в ацетоне;
  8. 4х промыть H2O;
  9. сушить 42oС, ~2h;
  10. хранить при NT завернутыми в фольге (~месяц).


  11. Обработка предметных стекол poly-L-lysine

  12. замочить стекла в HCl (конц.), ON;
  13. сполоснуть 15х H2O;
  14. высушить в сушильном шкафу, накрыв фольгой: ~170oС, ~1h;
  15. опустить стекла в 1x раствор poly-L-lysine на 5';
  16. 5-10х сполоснуть H2O
  17. сушить на воздухе в термостате 60oС 1h или NT – ON
  18. хранить при комнатной температуре завернутыми в фольге (~месяц).


  19. Обработка и хранение покровных стекол

  20. 3х обмакнуть стекло в ацетон (50ml стакан);
  21. промакнуть на фильтровалке;
  22. 3х обмакнуть стекло в EtOH 96% (50ml стакан);
  23. перенести на хранение в бюкс (~30ml) с EtOH 96%;
  24. перед использованием (работать под тягой).

  25. прополоскать (3х обмакнуть) в двух сменах EtOH 96% (два 50 ml стакана);
  26. промокнуть на фильтровалке;
  27. сушить NT 10';
  28. опустить на 2' в "Repel-silane"*;
  29. сушить NT 10';
  30. полоскать в большом объеме H2O.
  31. промокнуть на фильтровалке;
  32. сушить NT 10';
  33. хранить в 96% EtOH.


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 15810

    Растворы

    10x стоковый раствор poly-L-lysine

    poly-L-lysine 0.1% w/v в H2O (Sigma #P 8920)



    Комментарии

    Общие

    * Все промывки проводятся в 100 ml стеклоприёмнике.
    * Для гибридизации с mRNA использовать TESPA – обработку.

    По пунктам

    п. 1.

  • (3-Aminopropyl)-triethoxysilan H2N(CH2)3Si(OC2H5)3- Aldrich, #11,339-5.
  • п. 14.

  • Разведенный раствор хранится < 3хмесяцев при 4oС. В 100 ml можно обработать ~90 стекол.
  • п. 25.

  • 2%(w/v) solution Dimethyl dichlorosilane in 1,1,1 - trichloroethane.

    Дополнения, комментарии, вопросы

    Гость /11.01.2006 03:31/
    Preparing Silanized Slides
    Solutions:
    The silane material comes in a liquid form from Sigma. The full name is 3,aminopropyltriethoxysilane.
    Procedure:
    1. Dip slides in 2% silane/acetone solution for one minute.
    2. Dip slides in 100% acetone for one minute.
    3. Dip slides in double distilled water for one minute.
    4. Repeat step 3 with agitation.
    5. Air dry.
    6. Apply sections on a drop of water on the slide.
    7. Dry on 60°C hot plate for 2 - 5 minutes.
    8. Air dry at room temperature overnight.
    These silanized slides can be stored at room temperature for months without any problems.



    _Сашок_ /11.01.2006 21:36/
    Обработка стекол органосиланом.

    Иногда обстоятельства оборачиваютя так, что возникает необходимость обработки срезов ферментами. При обработке трипсином срезы, нанесенные на стекло с pLys все равно отваливаются. Трипсин специфично расщепляет Lys - Lys связи. Поэтому мы нашли альтернативный метод, которым сейчас активно пользуемся. Первоначально он был разработан для увеличения силы адгезии клеток к стеклу, и их распластыванию, но для имунногистохимии срезов in situ тоже походит.

    Подготовка предметных стекол:
    1. Промывают стекла в 1М HCl в течение 20 мин., затем в проточной воде 30 мин.
    2. Сполоснуть dH2O и высушить.
    3. Погружают стекла в 2% органосилан (гамма-аминопропилтриэтоксисилан) в ацетоне*.
    4. Инкубация 30 мин. при комнатной температуре.
    5. Промывают в проточной воде в течение 30 мин., затем в 3 сменах стерильной.
    6. Высушивают стекла в термостате при 100 C в течение 1 часа.
    7. Хранят при комнатной температуре в защищенном от пыли месте.

    * - р-р органосилана хранят в течение суток.

    Органосилан продается под названием АГМ-9.



    Гость /05.12.2008 16:00/
    А где можно купить органосилан?



    guest: ммм /05.12.2008 21:02/
    А где можно купить органосилан?

    http://www.penta-91.ru/ ( http://www.penta-91.ru/ )








       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler