Главная страница MolBiol.ru > Методы > Иммуногисто.. > Приготовление срезов тканей Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Фиксация и заливка в парафин (дрозофила)

Елена Набирочкина
Институт Биологии Гена РАН

    Фиксация в Корнуа

  1. на предметном стекле с помощью скальпеля отрезать у мух голову и грудь;
  2. фиксировать в "Корнуа" 2h;
  3. отмывать в 80% EtOH ON;
  4. фиксированные объекты можно хранить в течение 1-2 месяцев при -20oС в 80% EtOH;


  5. Проводка по спиртам и заключение в парафин

  6. в день заливки в парафин с утра поставить прогреваться все парафины и "кашу" в термостате (56oС);
  7. провести:
  8. EtOH (80%), NT => 30'
    EtOH (96%), NT => 30'
    EtOH (100%) (I), NT => 30'
    EtOH (100%) (II), NT => 30'
    EtOH (100%):ксилол (1:1), NT => 15'
    ксилол (I), NT => 20'
    ксилол (II), NT => 20'
    ксилол:парафин (1:1), 56oC => 40'
    парафин (I), 56oC => 40'
    парафин (II), 56oC => 40';


    Заливка в парафин

  9. прогреть (в течение 20-30') часовое стекло и подложку бинокуляра в термостате (56oС);
  10. перед заливкой парафина смазать часовое стекло глицерином;
  11. "заливочный" (чистый) парафин => в часовое стекло;
  12. разогретой пипеткой перенести мух в "заливочный" парафин;
  13. ориентировать объект под бинокуляром с помощью препаровальной иглы, нагретой на спиртовке;
  14. опустить стекло в холодную воду, подержав его на поверхности 30-40'';
  15. вырезать при помощи разогретого скальпеля "минимальные" блоки с объектом, наклеить на кубики.


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 11465

    Растворы

    Фиксатор Корнуа

    (должен быть свежеприготовленным):

    Конц.Сток10ml
    EtOH60%100%(!!!)6ml
    хлороформ30%100%3ml
    уксусная кислота10%100%,
    ледяная
    1ml

    Приготовление 100% EtOH

    1. высушить в термостате (65oС, 1-2 суток) медный купорос до почти белого цвета;
    2. засыпать его на 1/4 в емкость, в которой будет находиться 100% EtOH;
    3. добавить 96% спирт, интенсивно встряхивать и оставить на 1-2 суток (CuSO4 "заберёт" воду из спирта).


    Комментарии

    По пунктам

    п. 1-4.

  • Фиксация и отмывка проводятся либо в небольших бюксиках либо в пенициллиновых пузырьках.
  • п. 5.

  • Ксилольная "каша" (ксилол:парафин (1:1)) должна быть жидкой при 47oС; если расплавится не весь парафин, добавить немного ксилола.
  • п. 6.

  • С помощью пипетки (лучше стеклянной) объекты переносятся в фарфоровые бюксики, в которых и проводятся по "каше" и парафинам I и II.
  • Парафин I и II служат для пропитки объектов парафином и отмывки их от их ксилола.
  • п.9.

  • Для заливки используется чистый парафин, который хранится в отдельном фарфоровом стакане
  • п.13.

  • Залитые в парафин объекты можно хранить при 4oС: для иммуногистохимии - в течение месяца; для гистологии - 3-4 месяца.

    Дополнения, комментарии, вопросы

    Гость /20.07.2006 15:08/
    Плохие же вы гистологи! А фамилия автора фиксатора - КАРНУА.








       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler