Главная страница MolBiol.ru > Методы > Макро-методы > Пересев библиотеки Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Выращивание бактерий в 384-луночных плашках

 

    Заранее приготовить

  1. плашки с ростовой средой, 70% спирт ~400 ml;
  2. стерильные Watman 3MM paper для промакивания влаги с чашек;
  3. убедиться, что в морозильнике на -70oС имеется достаточно места для размещения новой библиотеки;


  4. Пересев

  5. разморозить плашки для пересева (выложив в один слой);
  6. просмотреть библиотечные плашки, записать №№ проблемных ячеек;
  7. подписать новые плашки (подписывать корпус плашки, а не крышку!);
  8. просмотреть новые плашки на предмет плохо залитых ячеек;
  9. репликация под ламинаром (ориентироваться по ближнему краю репликатора, держать его в чуть (~5-10o) наклонном положении, чтобы ближние иглы были чуть ближе к плашке, чем все остальные, иглы направлять точно в центр ячеек);
  10. перестановка новых чашек перед рассевом: из каждой стопки две нижние чашки достаются наверх, наиболее отпотевшие крышки кладутся под ламинар (и сохнут за время репликации), на уже реплицированную чашку кладётся крышка со следующей;
  11. завернуть плашки (индивидуально) в SaranWrap;
  12. выложить на 37oС в один слой по крайней мере на 1h, после этого можно выкладывать в стопку;
  13. рост 16-24h;
  14. перед замораживанием проверить, качество роста, убедиться, что пустые на исходных чашках ячейки так и остались пустыми, если требуется, записать комментарии в описание библиотеки;
  15. замораживать так, чтобы холод подводился снизу (на полотенце, вымоченном в жидком азоте, или на сухом льду, покрытым алюминиевой фольгой);
  16. стянуть в стопки по 8-10 плашек, проложив сверху салфетку, затем объединить по три стопки в одну связку, вставить карточку с описанием библиотеки, запаять в два слоя полиэтилена;
  17. хранить при -70oС, записать в журнал локализацию библиотеки;


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 8736

    Растворы

    Среда с глицерином

    (готовить перед применением)

    Конц.Сток975ml
    2xYT~1x1x900ml
    Glycerol7.5%*99%73ml**
    Ampicillin100 µg/ml50mg/ml2ml

    * использовать 7.5% глицерин рекомендует "Resourse Сenter/Berlin"
    ** в 50ml центрифужной пробирке задерживается ~ 3ml, => наливать 2х по ~ 40 ml



    Комментарии

    Общие

  • Общее правило работы: в библиотечную плашку можно погружать только стерильный репликатор. Поэтому при размножении библиотеки тратится столько репликаторов, сколько должно получиться чашек.
  • При пересеве вполне достаточно лишь одного переноса репликатором (повторять перенос дважды - ненужная трата репликаторов и времени).
  • Все фокусы с "однослойным" раскладыванием плашек посвящены тому, чтобы с внутренней стороны крышки не образовывался конденсат, который способен стать жидким мостиком для бактерий. Правило очень простое: конденсат образуется тогда, когда температура крышки становится меньше температуры плашки.
  • Умеренные количества конденсата можно промокнуть стерильным куском Watman 3MM.
  • Серьёзная проблема, с которой приходится иметь дело при работе с 384-плашками: подсыхание ячеек. Обычно крайние (а особенно угловые) ячейки подсыхают быстрее. Наиболее опасные этапы работы: пока чашки находятся под ламинаром и при росте на 37oС.


  • По пунктам

    п. 6.

  • Когда чашки стоят на столе (после холодной комнаты) нижние две отпотевают => лучше если стопки не слишком маленькие (или, гораздо лучше, если слой - по одной чашке).
  • п. 8.

  • Под ламинаром плашки подсыхают быстрее, поэтому надо стараться держать их там минимальное время (не выкладывать больших стопок).


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


    Дополнения, комментарии, вопросы





       
Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler