Главная страница MolBiol.ru > Методы > Макро-методы > Использование IGEL Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Работа с IGEL/ёжик

 

    Заранее (в предыдущий день) приготовить

  1. среду 2xYT из расчёта 22ml на одну плашку;
  2. стерильный (автоклавированный) шланг (Mediumschlauch lang 1.8-2.0m);
  3. 70% спирт ~400 ml;
  4. стерильные Watman 3MM paper для промакивания влаги с чашек;


  5. Подготовка к работе

    ВНИМАНИЕ!!! Работать только в перчатках, не забывать время от времени протирать их 70% спиртом.

  6. протереть 70% EtOH:
  7. * направляющие,
    * подъемный столик,
    * оргстеклянный держатель шланга,
    * внутренние поверхности приемной и подающей колонн,
    * стол перед прибором;

  8. вымыть детергентом, сполоснуть водой, а затем хорошо протереть фильтровалкой с внешней стороны:
  9. * держатель для плашек (PS 384),
    * ванночки (пустая и "Medium");

  10. включить прибор:
  11. * выключатель на колонне,
    * компьютер "power";

  12. при загрузке компьютера выбирать "default", а затем загрузить Windows: "win";
  13. на приборе установить: "Enter" => "manual konfiguriren";
  14. сменить типы
  15. * команда "spitzenwechsel",
    * старые типы уложить в специальную коробочку в правом ящике под прибором,
    * держатель типов вымыть детергентом, сполоснуть водой, затем 70% EtOH, протереть,
    * новые типы: промыть 70% EtOH снаружи и стряхнуть,
    * установить в IGEL;

  16. установить ванночки и подставку (для перемещения направляющих пользоваться стрелками с левой стороны панели):
  17. Позиция: Ванночка:
    1 подставка PS384 (среда)или PP384 (PCR продукты) в зависимости от задачи
    2 ванночка пустая
    3 ванночка "Medium"
    4 ничего
  18. дважды провести промывку типов 70%EtOH, один раз - стерильной H2O (сам прибор повторяет промывку 3 раза):
  19. * залить в ванночку >2/3 70% EtOH (или H2O),
    * поднять ванну до уровня игл пользуясь стрелками вверх/вниз (Внимание!!! Это совсем не просто, лучше выполнять подъём в несколько приёмов; при промывке можно чуть-чуть приподнимать/опускать ванну руками),
    * команда "Spulen",
    * промокнуть иглы стерильным Whatman 3MM;

  20. вернуться в "Manual configuriren" через "Verlassen";
  21. установить банку со средой и шланг: на банку со шлангом сверху положена крышка, все обернуть фольгой;
  22. переключить на "Sensor 2";
  23. уложить плашки (стороной со срезом направо):
    1. подающая колонна {A} 15-20шт. (крышка только на верхней!),
    2. в левую колонну правого блока - одну закрытую (или только крышку), чтобы ванна по возможности перемещалась под "крышами",

    Внимание!!! нельзя позволять прибору работать с закрытой чашкой, он забирает ее из подающей колонны вместе с крышкой;

  24. запустить программу:
  25. * открыть "OPAL JENA",
    * открыть файл с программой :

    "Datei"

    C: \IGEL_NEW\FILL_40.IGL => заполнены чашки 40µl среды
    C: \IGEL_NEW\FILL_50.IGL => заполнены чашки 50µl среды
    C: \IGEL_NEW\PP2PS400. IGL - перенос PCR продуктов,
    - F5 - старт программы,
    если при старте насос в первый раз не успеет набрать полную ванночку => ответить "Nein", запустить программу еще раз;

  26. Не класть крышку на последнюю чашку!!!


  27. Во время работы

  28. следить за чистотой донышек плашек, т.к. они устанавливаются друг на друга без крышек (при выкладывании на стол можно использовать Saran Wrap или внутреннюю поверхность пакетов от 384-плашек);
  29. не позволять накапливаться >15 плашек в приемной колонне (говорят, что иначе они могут соскочить вниз);
  30. следить, чтобы на верхней чашке была крышка (можно установить заранее);
  31. лучше, если максимально возможное время прибор работает за закрытым передним стеклом;
  32. прервать работу прибора можно, убрав плашку из подающей колонны, для нового запуска - установить плашки, нажать "Wiederholen";


  33. После окончания работы

  34. трижды промыть шланг ddH2O с помощью перистальтического насоса (приёмный конец - в банку с водой, подающий - в пустой стакан, несколько раз запустить программу);
  35. вымыть ванночки;
  36. протереть прибор 70% спиртом;
  37. положить первую и последнюю чашки на контроль "пророста" 37oС, ON (это минимальное время, после ON нужно оставить еще на ~ 48 h);
  38. остальные чашки убрать в холодную комнату (можно хранить 4-5 суток).


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 7976



Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


    Растворы

    Среда с глицерином

    (готовить перед применением):

    Конц.Сток975ml
    2xYT~1x1x900ml
    Glycerol7.5%*99%
    87%
    73ml
    85ml**

    Ampicillin100 µg/ml50mg/ml2ml

    * использовать 7.5% глицерин рекомендует "Resourse center/Берлин"
    ** в 50ml центрифужной пробирке задерживается ~ 3ml, => наливать 2х по ~ 40-45ml



    Комментарии

    Общие

  • При разливе по 50 µl на ячейку, одной банки среды (~975ml) хватает на ~45 плашек (то есть расход ~22.5ml на одну плашку). На заливку требуется ~ 45 минут (350 плашек заняло, не считая время на подготовку прибора, 6.5h).
  • Непроверенная информация Если для разлива PCR-mix использовать шланг от среды, то PCR потом не идёт (по крайней мере, так говорят).
  • По пунктам

    п. 1.

  • Bitte die Flaschen mit Wasser auf 900ml auffullen, Vielen Dank.
  • п. 11.

  • Внимание!!! Нужно обращать внимание на то, чтобы устанавливаемые подставки/ванночки были снизу сухими. Иначе они подклеиваются и могут подпрыгивать/переворачиваться при подъеме столика).
  • п. 14.

  • При прокладке шланга удобно держать сквозь фольгу ту часть, что будет в банке, шланг прокладывается через перистальтический насос, а затем под направляющими позади средней станины. В дальнюю, самую глубокую прорезь держателя закрепляется конец обмотанный автоклавной лентой.

    Дополнения, комментарии, вопросы





       
Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler