Главная страница MolBiol.ru > Методы > Complex-hyb > Подготовка фильтров к гибридизации Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Обработка фильтров перед первой гибридизацией

Предварительное "отшпаривание" проводится для того, чтобы DNA с фильтра не смывалась в гибридизационный раствор во время гибридизации (смытая DNA может конкурировать с фильтром за связывание метки).
  1. подписать фильтры (название мембраны, поле, лот) несмываемыми чернилами (Faber-Castell TG1, #16 33 99), разрезать;
  2. 2 х 10' отмывка NT :
  3. Конц.Сток1L
    SSC1x20x50ml
    SDS0.1%10%10ml
    H2O mQ940ml
  4. 3 x 20', 80oC:
  5. Конц.Сток1L
    SSC0.1x20x5ml
    SDS0.1%10%10ml
    H2O mQ985ml
  6. 1 x 20' 80oC (налить 95oC) в том же растворе;
  7. подсушить на 3ММ;
  8. хранить между листами Whatman 3MM при NT или –20oС.


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 8566

    Дополнения, комментарии, вопросы

    Гость /11.01.2006 03:52/
    Отмыть нозерн или саузерн перед новой гибридизацией можно в растворе 0,1% SDS в воде (RNAse free).
    Нагреть 1Л раствора 0,1% SDS до кипения в химическом стакане (2Л), затем отключить нагрев, погрузить в кипящий раствор мембрану и дать остыть до комнатной температуры вместе с нагревателем.
    Для саузернов иногда необходимо повторное кипячение.
    Мембрана готова к гибридизации сразу после остывания раствора SDS. Никаких дополнительных стадий и растворов не требуется.








       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler