Главная страница MolBiol.ru > Методы > D.melanogaster > Сбор эмбрионов D.melanogaster Rambler's Top100
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Сбор эмбрионов D.melanogaster

Павел Марданов;
Дарья Копытова
Институт Биологии Гена;
группа экспрессии генов.

    Перед началом сбора необходимо

    1. приготовить большую популяцию мух;
    2. приготовить контейнеры для мух;
    3. залить чашки с подложками, на которые будут наноситься дрожжи;
    4. пересадить мух в контейнеры.

    Приготовление контейнеров

    Контейнеры представляют из себя пластиковые цилиндры объёмом 10-15 литров с одним или двумя рукавами из капрона, через которые можно менять чашки, выпуская наружу лишь небольшое количество мух.

    Мы используем 10 литровые цилиндры с одним капроновым рукавом длиной 120cm.


    Приготовление чашек с подложками для сбора эмбрионов

    Приготовление агаровых подложек:

    1. вскипятить 1620ml воды;
    2. добавить 50 грамм сахара;
    3. добавить 70g агара, избегая образования комков;
    4. добавить 473ml яблочного сока;
    5. вскипятить;
    6. остудить до 80-90°С;
    7. разлить по чашкам.


MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 8915


    Комментарии

  • Данного количества хватает на заливку 40-45 чашек диаметром 150mm.
  • Вместо яблочного сока мы используем пиво "Очаковское оригинальное". Эффект от него не хуже, чем от яблочного сока, а по цене в два раза дешевле.
  • Чашки с подложками хранятся на +4oС. Их можно использовать несколько раз. Главное - не давать им пересохнуть.
  • Подложки используются с двумя целями: привлекают мух запахом и не дают высохнуть дрожжевой суспензии, которую на них наносят.
  • Мы собирали 12 часовых эмбрионов: в 9:00 и в 21:00. В один 10 литровый цилиндр мы сажаем по 13-15g мух. Чашки с подложками мажем дрожжевой суспензией (100g дрожжей + 30ml сока или пива). Мухи гибнут на сильно влажных дрожжах, но не могут есть сухие. Нужно что-то среднее. В один цилиндр помещаем за раз две чашки, на которых в сумме находится 25g дрожжей. Дрожжи необходимо наносить на чашки равномерно, т.к. мухи откладывают эмбрионы только на них. Чашки заменяются новыми каждые 12 часов в течение трёх суток. Чашки c уже собранными эмбрионами хранятся в это время на +4oС в условиях, когда эмбрионам трудно пересохнуть, но они могут дышать.

    Дополнения, комментарии, вопросы

    _Raduga_ /11.01.2006 22:33/
    я использовала обычный корм, разливая его по чашкам - еффект тот же и никакого геморроя с соками или пивом ( корм заказывала на дрозофилиной кухне). корм можно разогреть до жидкого состояния и разлить уже по чашкам.
    дрожжи удобно намазывать заранее - за ночь (или ранее, все достаточно долго хранится в холодильнике на +4) дрожжи более равномерно разрастаются. излишки жидкости на подложке легко удаляются при помосцши обычной промокашки (непосредственно перед сбором яиц).
    перед сбором яиц чашки с подложками необходимо нагреть до комнатной температуры (или чуть повыше).
    замечено многими, что для увеличения носкости (и некоторой синхронизации ембрионов) полезно накануне попересыпать мух в пробирки со свежими дрожжами (или, в случае больших обьемов, поставить им несколько подложек). таким способом стимулируется откладка яиц.



    Firefly76 /29.11.2006 19:36/
    Даа.. Это смотря для чего эмбрионы собирать. Если для культуры клеток, то от живых дрожжей не отмоешся, да и антибиотики на них не действуют. Кстати, дрожжи еще "работают" для D.melanogaster. А как быть с D. littoralis? D americana? etc? Не нравятся им они. Мы используем специально выделенные бактерии, которые разгоняем на глубинке. Эти бактерии, кстати, хорошо ингибируют рост плесени. Идентифицировать их, правдо, лениво.



    Гость /02.06.2008 19:07/
    А не было у кого-нибудь следующей проблемы: на 12-часовой чашке обнаруживаются личинки. Вывести из яиц на чашке они не могут, значит наползают откуда-то из контейнера, но откуда ума не приложу. Хотя я перед тем, как вынуть чашку из контейнера, легонько постукиваю ею по стенке контейнера, чтобы согнать засидевшихся мух, но при этом слежу, чтобы дрожжи и эмбрионы не сваливались с чашки, а если такое происходит, то вынимаю их.

    Кроме того, личинки начиают появляться на чашках не сразу, а примерно через неделю после пересадки мух в контейнер.

    Буду благодарен за советы!



    Гость /02.07.2008 09:30/
    говорят, что эмбриогенез у дрозофил может начаться и до откладки яиц, так что они фактически могут отложить не яйцо, а готовую личинку.








       


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
--- администрирование сервера: Intervipnet ---

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler