Главная страница MolBiol.ru > Растворы > Прописи > Однокомпонентные растворы Rambler's Top100  English version  Deutsche Version  Український варіант
ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

Однокомпонентные растворы

Плотности некоторых растворов можно посмотреть в документе "Плотности растворов кислот, оснований и органических веществ".





    Инструкция по работе с прописями растворов откроется в новом окне при нажатии на эту кнопку:


    Органические вещества

    pKa и температурная зависимость pH для обычно используемых буферов

    БуферMwpKa
    20oC
    Рабочий
    диапазон
    delta pKa
    на 10oC
    MES
    2-(N-morpholino)ethanesulfonic acid
    195.26.155.5-6.7-0.110
    Bis-Tris
    bis(2-hydroxyethyl)iminotris(hydroxymethyl)methane
    209.26.55.8-7.2 
    ADA
    N-(2-acetamido)-2-imidoacetic acid
    190.26.606.0-7.2-0.110
    PIPES
    piperasine-N,N'-bis(2-ethanesulfonic acid)
    302.46.806.1-7.5-0.085
    ACES
    2-[(2-amino-2-oxoethyl)amino]ethanesulfonic acid
    182.26.906.1-7.5-0.200
    MOPSO
    3-(N-morpholino)-2-hydroxypropanesulfonic acid
    225.36.96.2-7.6 
    Imidazol - HCl
    "Справочник Биохимика" Досон Р. и др. М:Мир,1991 /прислал Волков И.Ю., ИМГРАН/
    68.086.956.2-7.8 
    Bis-Tris Propane
    1,3-bis[tris(hydroxymethyl)methylamino]propane
    282.36.8*6.3-9.5 
    BES
    N,N-bis(2-hydroxyethyl)-2-aminoethanesulfonic acid
    213.27.156.4-7.8-0.160
    MOPS
    3-(N-morpholino)propanesulfonic acid
    209.37.206.5-7.9-0.013
    TES
    N-tris(hydroxymethyl)methyl-2-aminoethanesulfonic acid
    229.27.506.8-8.2-0.200
    HEPES
    N-(2-hydroxyethyl)piperazine-N'-(2-ethanesulfonic acid)
    238.37.556.8-8.2-0.140
    DIPSO
    3-[N,N-bis(2-hydroxyethyl)amino]-2-hydroxyprpanesulfonic acid
    243.37.67.0-8.2 
    TAPSO
    3-[N-tris(hydroxymethyl)methylamino]-2-hydroxypropanesulfonic acid
    259.37.67.0-8.2 
    HEPPSO
    N-(2-hydroxyethyl)piperazine-N'-(2-hydroxypropanesulfonic acid)
    268.37.87.1-8.5 
    POPSO
    piperazine-N,N'-bis(2-hydroxypropanesulfonic acid)
    362.47.87.2-8.5 
    TEA
    triethanolamine
    149.27.87.3-8.3 
    EPPS
    N-(2-hydroxyethyl)piperazine-N'-(3-propanesulfonic acid)
    252.38.07.3-8.7 
    Tricine
    N-tris(hydroxymethyl)methylglycine
    179.28.157.4-8.8-0.210
    Tris (TRIZMA)
    tris(hydroxymethyl)aminomethane
    121.18.307.0-9.1-0.310
    Bicine
    N,N-bis(2-hydroxyethyl)glycine
    163.28.357.6-9.0-0.180
    TAPS
    N-tris(hydroxymethyl)methyl-3-aminopropanesulfonic acid
    243.38.47.7-9.1 
    Glycylglycine 8.40 -0.280
    AMPSO
    3-[(1,1-dimethyl-2-hydroxyethyl)amino]-2-hydroxypropanesulfonic acid
    227.39.08.3-9.7 
    CHES
    1-(N-cyclohexylamino)ethanesulfonic acid
    207.39.38.6-10.0 
    CAPSO
    3-(cyclohexylamino)-2-hydroxy-1-propanesulfonic acid
    237.39.68.9-10.3 
    AMP
    2-amino-2-methyl-1-propanol
    89.19.79.0-10.5 
    CAPS
    3-(cyclohexylamino)-1-propanesulfonic acid
    221.310.49.7-11.1 

    * pKa=9.0 для второй стадии диссоциации.

    ATP

    C10H14N5O13P3Na2; Mw=551.1 g/M
    õðàíèòü ïðè -20o
    Êîíö.Ñòîê1ml
    ATP0.1M551.1g/M55.1mg
    H2O mQ  

    Íåïðîâåðåííàÿ èíôîðìàöèÿ 0.1M ATP (pH 7.2): 5.71% (w/w) ATP, 84.86% (w/w) H2O, 9.43% (w/w) 2M Tris base.

    1. доводить до pH 7.5 2M NaOH (~70-80µl);
    2. довести до объема ~700µl, развести в 2000 раз (финальное разведение, которое окажется в кювете), померить оптическую плотность:
    3. C[M]=A259/15.4x103=A259 1:2000x0.130

    4. довести финальный объём.

    Betaine

    Бетаин, monohydrate C5H11NO2xH2O; Mw=135.2g/M;
    õðàíèòü ïðè 4oC
    Êîíö.Ñòîê%(w/w)100ml200ml700ml
    Betaine135.2g/M5M63.0067.6g135.2g473.2g
    H2O mQ37.0039.74ml79.49ml278.2ml

    p~1.073g/ml


    Крезоловый красный / Cresol red (Na)

    õðàíèòü ïðè +4, -20oC
    Êîíö.Ñòîê1ml50ml
    Cresol red (Na)50mM404.4g/M20.2mg1.01g
    H2O mQ   
  • очень удобный краситель, в концентрации ~0.2mM совместим с рестрикцией, PCR, сиквенсом, а также может быть использован как цветной маркер для электрофореза;
  • цвет красителя зависит от рН (красный при рН >7.5, жёлтый при рН <7.0). Как цветовой индикатор может быть использован при денатурации двухцепочечной DNA для сиквенса, при выделении DNA из агарозного геля на silica-носителе.

  • DTT

    C4H10O2S2; Mw=154.2g/M
    õðàíèòü ïðè -20oC

    Êîíö.Ñòîê%(w/w)1ml5ml10ml20ml
    DTT154.2g/M1M14.550.155g0.773g1.55g3.09g
    AcNa, pH 5.2 10mM85.45905 µl4.53ml9.05ml18ml

    p~1.06g/ml

    Êîíö.Ñòîê1ml5ml10ml20ml
    DTT154.2g/M2.2M0.339g1.696g3.394g6.787g
    AcNa, pH 5.2 10mM     
  • стерилизовать фильтрованием;
  • нельзя обрабатывать DEPC.


Смотри также:
/ссылки на сетевые ресурсы/


    Приготовление dNTP’s

    Быстрый протокол приготовления ~100mM стока

    1. объединить все четыре dNTP’s (по 250mg) и растворить в 3.676ml H2O;
    2. + 424µl 5M NaOH;
    3. проверить рН, капнув ~0.5µl на рН-бумажку.

    Аккуратный (правильный) протокол приготовления 100mM стоков

    1. добавить необходимое количество H2O и Tris base 1M (смотри таблицу; при этом можно полагать, что объём, занятый солью ~150µl);
    2.    

      Mw

      V(H2O)V(Tris base 1M)V(final)
      dATPC10H14N5O12P3Na2x3H2O589.23.24ml850 µl4.24ml
      dGTPC10H13N5O13P3Na3x2H2O609.23.55ml400 µl4.10ml
      dCTPC9H13N3O13P3Na3x2H2O569.13.44ml800 µl4.39ml
      dTTPC10H14N2O14P3Na3x2H2O584.13.73ml400 µl4.28ml
    3. проверить рН, капнув ~0.5µl на рН-бумажку;
    4. спектрофотометрически проверить качество и концентрацию (удобно использовать финальное разведение 1:5000 (~20µM). При этом показания спектрофотометра оказываются в районе Am~0.3, а концентрация:
      с[mM]=k1:5000xAm).

    Качество:

    dATP
    pH 7.0
    A250/A260=0.80+0.03
    A280/A260=0.12+0.02
    dCTP
    pH 2.0(!)
    A250/A260=0.45+0.03
    A280/A260=2.10+0.15
    A290/A260=1.60+0.10
    dGTP
    pH 7.5
    A250/A260=1.18+0.04
    A280/A260=0.67+0.03
    A290/A260=0.28+0.03
    dTTP
    pH 7.5
    A250/A260=0.65+0.03
    A280/A260=0.73+0.03

    Концентрация:

      MwAmpHEk (для 1:5000)
    dATP[Na2]589.22597.015.2x103328.9
    dGTP[Na3]609.22537.513.7x103365.0
    dCTP[Na3]569.12802.0 (!!!)13.0x103384.6
    dTTP[Na3]584.12677.59.6x103520.8
           
    ATP [Na4]595.1259 15.4x103 
    CTP [Na4]571.1280 13.0x103 
    GTP [Na4]611.1252 13.7x103 
    UTP [Na4]572.1262 10.2x103 

    Концентрация: c[М]=Amax/E; Amax = адсорбция на максимуме поглощения.



    EDTA

    C10H14O8N2Na2x2H2O; Mw=372.3g/M; pH = 8.0
    õðàíèòü ïðè 4oC
    Êîíö.Ñòîê%(w/w)50 ml100 ml150 ml250 ml
    EDTA0.5 M372.3g/M16.989.31g18.62g27.92g46.55g
    NaOH~0.5 M40g/M1.821.014g2.028g3.042g5.07g
    H2O mQ81.1944.48ml88.95ml133.4ml222.4ml
    Êîíö.Ñòîê10 ml50 ml100 ml150 ml250 ml
    EDTA0.5 M372.3g/M1.86g9.31g18.62g27.92g46.55g
    NaOH~0.5 M10M 507µl
    0.674g
    2.535ml
    3.37g
    5.07ml
    6.74g
    7.61ml
    10.11g
    12.68ml
    16.85g

    H2O mQ8.42ml42.12ml84.24ml126.4ml210.6ml

    p~1.096g/ml

  • EDTA не растворяется в H2O, при кислом pH; при растворении нужно добавлять понемногу щелочь и контролировать pH;
  • нельзя обрабатывать DEPC.

  • EtBr

    Бромистый этидий / Ethidium bromide, C21H20N3Br; Mw=394.3g/M
    õðàíèòü ïðè NT в темноте
    Êîíö.5ml10ml50ml
    EtBr10mg/ml50mg100mg500mg
  • растворим в Н2O, EtOH, хлороформе;
  • по поводу канцерогенности EtBr. В единственном источнике с цифрами, который был в наших руках, написано, что в тесте на мутагенность (проводится на бактериях) 90µg EtBr приводили к такому же результату, как концентрат дыма от одной сигареты.

  • Gelatin

    Желатин, õðàíèòü ïðè 4oC

    Êîíö.Ñòîê10ml50ml100ml
    Gelatin2%òâ.0.2g1.0g2.0g
    H2O mQ    
  • стерилизовать автоклавированием.

  • Glucose

    Глюкоза; C6H12O6xH2O; Mw=198.17g/M
    õðàíèòü ïðè 4oC
    Êîíö.Ñòîê%(w/w)50ml100ml250ml
    Glucose2M198.17g/M34.97219.82g39.63g99.09g
    H2O mQ65.02836.85ml73.70ml184.24ml
    1000ml/
    198.17g/M1M1.5M2M
    Glucose [g]198.17
    297.255
    396.34
    H2O [ml]868.23
    802.745
    736.96
    %(w/w)18.58327.02334.972
    H2O %(w/w)81.41772.97765.028
    p (g/ml) 20oC1.06641.11.1333


    Guanidine HCl (GuHCl)

    Гуанидин хлорид; CH5N3xHCl; Mw=95.53g/M

    Молярность; 1000ml /
    12345678
    GuHCl95.53g
    191.06g
    286.59g
    382.12g
    477.65g
    573.18g
    668.71g
    764.24g
    H2O (mQ)924.2ml
    854ml
    783.7ml
    711.7ml
    639.8ml
    567.2ml
    494.3ml
    420.7ml
    GuHCl %(w/w)9.3718.2826.7834.9342.7550.2657.5064.50
    H2O %(w/w)90.6381.7273.2265.0757.2549.7442.5035.50
    p (g/ml)1.0201.0451.0701.0941.1171.1401.1631.185
  • растворимость: при 25oC - 8.54M, 5oC - >8M;
  • A260(6M в H2O)<0.03;
  • при расчётах можно принять "частичную плотность GuHCl" за 0.763.


  • HEPES

    Êîíö.Ñòîê%(w/w)1L

    C8H18N2O4S

    1M238.3g/M22.40238.3g
    H2O mQ77.60825.7ml

    p=1.064

    Приготовление 1M HEPES с различным pH

    Нужный pHKOH, 5M
    [1000ml]
    5.250ml0ml
    5.350.5ml
    5.753.5ml
    6.037ml
    6.2412ml
    6.5922ml
    6.7132ml
    6.8845ml
    7.0050ml
    7.1060ml
    7.2580ml
    7.3792.5ml

    Imidazol

    Имидазол; C3H4N2
    õðàíèòü ïðè 4oC

    Êîíö.Ñòîê50ml100ml
    Imidazole2M68.1g/M6.81g13.62g
    H2O mQ   

    Paraformaldehyde

    ПФА (параформальдегид) 37% (свежеприготовленный для иммуногистохимии).

    1. в пробирке с завинчивающейся крышкой смешать:

    ПФА (òâ.) = 0.37g,
    H2O = 1.0ml
    NaOH (1N) = 14µl;

    2. растворить в кипящей водяной бане (кипятить ~1-3'; до тех пор, пока pH не опуститься до ~7.0).


    PEG

    Полиэтиленгликоль; H(OCH2CH2)nOH
    õðàíèòü ïðè 4oC

    Êîíö.%(w/w)10ml50ml100ml150ml200ml
    PEG600040%37.214.0g20g40g60g80g
    H2OmQ62.796.75g33.75g67.5g101.25g135.0g

    p=1.075.


    PMSF

    õðàíèòü ïðè -20oC

    Êîíö.Ñòîê20ml
    C7H7FO2S100mM174.2g/M0.348g
    Isopropanol  20ml

    Retinoic acid

    all trans-Retinoic acid, Ретиноевая кислота, Витамин А, Tretinoin, светочувствителен
    õðàíèòü ïðè -20oC

    Êîíö.Ñòîê16.6ml
    C20H28O210mM300.4g/M50mg
    EtOH >96%16.6ml
  • стоковый раствор 10mM, рабочий - свежеприготовленный 1mM в EtOH; как контроль добавлять чистый EtOH.

  • Sucrose

    Сахароза; C12H22O11, Mw=342.30g/M
    õðàíèòü ïðè 20oC

    Плотности и индексы рефракции растворов сахарозы.
    Êîíö.Ñòîê%(w/w)50ml100ml250ml
    Sucrose1M342.30g/M30.33017.115g34.23g85.58g
    H2O mQ69.67039.315ml78.63ml196.58ml
    1000ml/
    342.30g/M1M2M2.5M
    Sucrose [g]342.3
    684.6
    855.75
    H2O [ml]786.3
    570.4
    460.35
    %(w/w)30.33054.55065.022
    H2O %(w/w)69.67045.45034.978
    p (g/ml) 18oC1.12861.25501.3161

    Tris Cl

    Трис-(оксиметил)-аминометан; C4H11O3N; Mw=121.1g/M
    õðàíèòü ïðè 4oC
    Êîíö.Ñòîê50 ml100 ml150ml200ml
    Tris-base1M121.1g/M6.0612.11g18.17g24.22g
    H2O до сум. веса mQ52.03g104.06g156.09g208.12g

    1M: p=1.0406

    Íåïðîâåðåííàÿ èíôîðìàöèÿ 2M Tris base: 22.90%(w/w) Tris base, 77.10%(w/w) H2O; p=1.058

  • нельзя обрабатывать DEPC, можно стерилизовать автоклавированием;
  • pH буферов на основе Tris зависит от концентрации; если считать исходным 50mM раствор, то:
  • pH(500mM) => + 0.05 ед. pH
    pH(5mM) => - 0.05 ед. pH

  • pH уменьшается на 0.028 ед. при увеличении температуры на 1oC.
  • Зависимость pH от температуры для 50mM Tris Cl.

    pH приg/50ml 1M или
    g/liter для 0.05 M
       
    5oC25oC37oC Tris HClTris BaseH2O Tris HClTris BaseH2O
    7.557.006.70 7.280.4744.28
    7.667.106.80 7.130.5744.33
    7.767.206.91 7.020.6744.34
    7.897.307.02 6.850.8044.38
    7.977.407.12 6.610.9744.45
    8.077.507.22 6.351.1844.50
    8.187.607.30 6.061.3944.58
    8.267.707.40 5.721.6644.65
    8.377.807.52 5.321.9744.74
    8.487.907.62 4.882.3044.85
    8.588.007.71 4.442.6544.94
    8.688.107.80 4.022.9745.04
    8.788.207.91 3.543.3445.15
    8.888.308.01 3.073.7045.26
    8.988.408.10 2.644.0345.36
    9.098.508.22 2.214.3645.46
    9.188.608.31 1.834.6545.55
    9.288.708.42 1.504.9045.63
    9.368.808.51 1.235.1345.67
    9.478.908.62 0.965.3245.75
    9.569.008.70 0.765.4745.80
    9.679.108.79 0.695.5345.81

    TrisCl: 250ml 1M

    V HClV HClpH
     010.44
     19.54
     29.26
     39.08
     3.78.98
    5ml 8.76
    6ml 8.67
     108.4
    11ml 8.22
     148.13
    13.5ml 8.06
    14ml 8.04
    15ml 7.97
     177.92
    16.5ml 7.82
    16.7ml 7.8
    17ml 7.77
    18.3ml 7.63
    18.6ml 7.59
     207.75
     237.4


    Tricine

    C6H13NO5; Mw=179.2g/M
    õðàíèòü ïðè 4oC
    Êîíö.Ñòîê50ml
    Tricine1M179.2g/M8.96g
    H2O mQ  

    Приготовление 1M Tricine с различным pH:   

    Нужный pH5N KOH
    [50ml]
    8.307.0ml
    8.387.5ml
    8.478.0ml
    8.58.15ml
    8.68.5ml
    8.689.0ml
    8.789.5ml
    8.9010.0ml

    Triethanolamine

    Триэтаноламин; 1M
    õðàíèòü ïðè 4oC
    Êîíö.Ñòîê%(w/w)50ml
    Triethanolamine1M149.19g/M14.697.46g
    6.66ml

    H2O mQ85.3143.34ml

    Urea

    Мочевина; CH4N2O; Mw=60.06g/M
    Молярность; 1000ml /
    12345678910

    CH4N2O
    [g]

    60.06
    120.12
    180.18
    240.24
    300.30
    360.36
    420.42
    480.48
    540.54
    600.60
    H2O
    [ml]
    950.6
    905.8
    861.3
    817.0
    771.6
    726.7
    681.2
    635.7
    590.0
    544.1
    p (g/ml)1.0111.0261.0411.0571.0721.0871.1021.1161.1311.145

    CH4N2O
    %(w/w)

    5.9411.7117.3022.7228.0233.1538.1643.0547.8152.47
    H2O %(w/w)94.0688.2982.7077.2871.9866.8561.8459.9552.1947.53
  • растворимость: при 25oC: 10.49M, 5oC: ~8M;
  • A260(6M в H2O)<0.06;
  • при расчётах можно принять "частичную плотность мочевины" за 0.763.


  • Щелочи и кислоты

    название:формула:Mw% (w/w)[M]g в-ва в 1Lp [g/ml]ml/L для 1M р-ра
    Едкий натрNaOH4050%19.17631.5352.4
    30.1%10.04001.329100
    10%2.751111.11363.6

    Едкое кали

    KOH

    56.150%13.57571.5274.1
    23.06%5.0280.61.217200
    10%1.941091.09515.5
    ГидроксиламинNH4OH35.028%14.82510.89867.6
    Уксусная кислота, ледянаяCH3COOH60.0599.5%17.410451.0557.5
    Уксусная кислота36%6.273761.045159.5
    Муравьиная кислотаHCOOH46.0290%23.410801.2042.7
    Хлористоводородная кислотаHCl36.536%11.64241.1886.2
    10%2.91051.05344.8
    Азотная кислотаHNO363.0271%15.9910081.4262.5
    67%14.99381.4067.1
    61%13.38371.3775.2
    Хлорная кислотаHClO4100.570%11.6511721.6785.8
    60%9.29231.54108.7
    Фосфорная кислотаH3PO498.085%18.114451.7155.2
    Серная кислотаH2SO498.196%18.017661.8455.6
  • см. опасные вещества.

  • NaOH

    Едкий натр; Mw=40g/M
    õðàíèòü ïðè NT
    Êîíö.Ñòîê%(w/w)50ml200ml300ml
    NaOH10M40g/M30.120g80g120g
    H2O mQ69.9046.45ml185.8ml278.7ml

    10M: 30.10%; p=1.329.

    Êîíö.Ñòîê%(w/w)50ml150ml200ml
    NaOH1M10M12.875ml
    6.645g
    15ml
    19.94g
    20ml
    26.58g

    H2O mQ87.1345ml135ml180ml
  • для хранения лучше использовать пластиковую посуду, т.к. щелочь слегка растворяет стекло.

  • KOH

    Едкий кали; Mw=56.11g/M
    õðàíèòü ïðè NT

    Êîíö.Ñòîê%(w/w)10ml50ml100ml150ml
    KOH5M56.11g/M23.052.806g14.03g28.06g42.08g
    H2O mQ76.959.363g46.81g93.63g140.4g

    5M: 23.06%; p=1.217.

  • для хранения лучше использовать пластиковую посуду, т.к. щелочь слегка растворяет стекло.

  • TCA

    Трихлоруксусная кислота (ТХУ); CCl3CO2H; Mw=163.39g/M
    õðàíèòü ïðè NT, в темноте, под тягой
    Êîíö.%(w/w)5ml10ml25ml50ml
    TCA100% (w/v)68.785.0g10.0g25.0g50.0g
    H2OmQ31.222.27ml4.54ml11.35ml22.7ml


    Детергенты

  • Детергенты - это растворимые в воде полярные липиды. Обычно они классифицируются по типу гидрофильной группы: анионные, катионные, амфотерные и неионные. Обычно неионные и амфотерные детергенты денатурируют белки в меньшей степени, чем ионные детергенты. Sodium cholate и sodium deoxycholate - самые слабые денатуранты среди обычно используемых детергентов.
  • Две важные характеристики детергентов: (i) критическая концентрация мицелообразования (CMC) - концентрация при которой мономеры детергента начинают образовывать мицелы и (ii) молекулярный вес мицелл (детергенты с высоким мол. весом мицелл сложно убрать диализом, они проскакивают сквозь гель-фильтрационные колонки). Обе характеристики зависят от используемого буферного раствора. Обычно добавление соли понижает CMC и увеличивает размер мицелл.



  • ДетергентTпл.Mw [Da]CMC
    мономермицелла%(w/v)M
    Анионные
    SDS20628818,0000.238.0 x 10-3
    Cholate2014304,3000.601.4 x 10-2
    Deoxycholate1754324,2000.215.0 x 10-3
    Катионные
    C16TAB23036562,000.041.0 x 10-3
    Амфотерные
    LysoPC-49592,0000.00047.0 x 10-6
    CHAPS1576156,1500.491.4 x 10-3
    Zwittergent 3-14-36530,0000.0113.0 x 10-4
    Неионные
    Octyl glucoside1052928,0000.732.3 x 10-2
    Digitonin2351,22970,000--
    C12E8-54265,0000.0058.7 x 10-5
    Lubrol PX-58264,0000.0061.0 x 10-4
    Triton X-100-65090,0000.0213.0 x 10-4
    Nonident P-40-60390,0000.0173.0 x 10-4
    Tween 80-1,31076,0000.0021.2 x 10-5


    CMC - критическая концентрация мицелообразования.

    Детергент123456789101112 1 - Сильно денатурирующий;
    2 - Диализуемый;
    3 - Ион-обмениваемые, не подходят для ионообменной хромотографии;
    4 - Сложные ионы;
    5 - Сильное погл. A280;
    6 - Мешает анализам;
    7 - Преципитирует на холоду;
    8 - Высокая цена;
    9 - Лёгкость очистки;
    10 - Изотоп-меченье;
    11 - Определённый состав;
    12 - Автоокисление
    Анионные
    SDS++++--+-+++-
    Cholate-+++----+++-
    Deoxycholate-+++--+-+++-
    Катионные
    C16TAB+++---+-+-+-
    Амфотерные
    LysoPC+/-------++/-++-
    CHAPS-+-----++-+-
    Zwittergent 3-14+/-+/------++-+-
    Неионные
    Octyl glucoside-+-----+-++-
    Digitonin-------++-  
    C12E8---+/----+-+-+
    Lubrol PX---+/--+/----+-+
    Triton X-100---+/-++/----+-+
    Nonident P-40---+/-++/----+-+
    Tween 80---+/--+/----+-+
    C16TAB - hexadecyl trimethylammonium bromide;
    LysoPC - lysophosphatidylcholine.
    * Sodium cholate и sodium deoxycholate нерастворимы при <pH 7.5 или при ионной силе выше 0.1%. SDS часто выпадает в осадок при температуре ниже 20oC;
    ** Ионные детергенты вызывают проблемы при изоэлектрическом фокусировании;
    *** Ионные и амфотерные детергенты обычно удаётся убрать диализом;
    **** Фенол-содержащие детергенты (например Triton X-100 и NP-40) вызывают преципитацию при Folin protein assay (но они не мешают Bradford protein assay).


    N-Lauroylsarcosine Na

    õðàíèòü ïðè NT
    Êîíö.Ñòîê%(w/w)1ml3ml5ml15ml50ml
    Sarc10%30%33.930.333ml
    0.342g
    1.00ml
    1.027g
    1.67ml
    1.712g
    5.00ml
    5.14g
    16.67ml
    17.12g

    H2O mQ66.070.667ml2.00ml3.33ml10.00ml33.33ml

    p=1.017.


    SDS

    Sodium dodecyl sulfate, sodium lauryl sulfate; [CH3(CH2)10CH2SO4]Na; Mw=288.4g/M
    õðàíèòü ïðè NT
    Êîíö.Ñòîê%(w/w)100 ml250 ml300 ml400 ml
    SDS10%(w/v)òâ.9.8210g25g30g40g
    H2O mQ90.1891.8 ml229.5 ml275.4 ml367.2 ml

    p = 1.018

  • Взвешивать под тягой, лучше в маске.
  • Чтобы растворить - нагреть до 60-80oC. Проконтролировать pH если сильно отличается от нейтрального (~7.2-7.5) - довести разбавленной кислотой (щелочью).
  • опасное вещество.


  • Органические растворители

    Фенол

    Фенол /оксибензол; карболовая кислота/, C6H5OH; Mw=94.1g/M
    p=1.054, tm= 43, tb= 182, pKa=10.0
    растворимость: 6.8 16H2O, бесконечно 66H2O; бесконечно EtOH

  • опасное вещество.

  • Приготовление "кислого" и "нейтрального" фенола

    а) начиная с перегонки:

    1. перегнать под H2O;
    2. оставить водной фазы столько, чтобы она составляла ~1/10 от объёма фенольной фазы;
    3. добавить 8-гидроксихинолин до 0.1% (относительно фенольной фазы) и ßMeEtOH (2-меркаптоэтанол) до 0.2% (относительно водной фазы = 0.02% относительно фенольной);
    4. то, что получилось на этом этапе – "кислый фенол*", õðàíèòü ïðè -20oC (~год);

    5. к свежему (или перегнанному) фенолу + равный объём 0.2 M Tris-base, смешивать ~0.5-1h;
    6. снять водную фазу;
    7. + 0.1V 0.1M Tris-Cl, pH 8.0
    8. 0.2% ßMeEtOH
    9. смешивать ~0.5-1h;
    10. õðàíèòü ïðè 4oC (в темноте) ~месяц.

    b) начиная с хорошего покупного:

    1. насытить фенол H2O (добавив приблизительно 1/5 объёма воды;
    2. далее - аналогично (а), начиная с п.2.

    ______________
    * Для экстракции RNA "кислый фенол" лучше уравновесить "буфером для уравновешивания кислого фенола" (õðàíèòü ïðè 4oC):

    Êîíö.Ñòîê100ml
    AcONa, pH 5.150mM3M1.67ml
    EDTA10mM0.5M2.0ml
    H2O mQ96.0ml
  • проверить pH, если надо, довести до pH 5.1 разбавленной уксусной кислотой (1:100).
  • Íåïðîâåðåííàÿ èíôîðìàöèÿ в методиках "Mitchell Group" написано, что кислый фенол относительно стабилен, а нейтрализованный - нет. Они рекомендуют готовить нейтральный фенол лишь на несколько недель работы.
    Íåïðîâåðåííàÿ èíôîðìàöèÿ 8-гидроксихинолин и ßMeEtOH - антиоксиданты, продлевают жизнь фенолу. Кроме того, 8-гидроксихинолин красит фенол в приятный жёлтый цвет, помогающий разобраться, где какая фаза, и, говорят, является слабым ингибитором RNase.


    EtOH

    Этанол, спирт, CH3CH2OH; Mw=46.1g/M

    плотности водных растворов этанола.
  • сильно гигроскопичен, (õðàíèòü ïðè NT в плотно закрытой посуде);
  • tпл.=-117.3oC; tкип.=78.5oC.
    Êîíö.Ñòîê300ml
    EtOH70%96%190g
    H2O mQ70ml

    Приготовление 100% EtOH.

    1. высушить в термостате (65oC, 1-2 суток) медный купорос до почти белого цвета;
    2. засыпать его на 1/4 в емкость, в которой будет находиться 100% EtOH;
    3. добавить 96% спирт, интенсивно встряхивать и оставить на 1-2 суток. CuSO4"заберёт" воду из спирта.

    Íåïðîâåðåííàÿ èíôîðìàöèÿ Тест на абсолютный спирт: добавить каплю к некоторому количеству ксилола, если появится муть - спирт не абсолютный.



MolBiol.ru: http://molbiol.ru
e-mail: redactor@molbiol.ru
просмотров: 46106

    Дополнения, комментарии, вопросы

    Redactor /08.10.2005 00:10/
    BSA;
    раствор 2mg/ml - A280 = 1.334
    http://www.piercenet.com/files/TR0006dh4-E...oefficients.pdf ( http://www.piercenet.com/files/TR0006dh4-Extinction-coefficients.pdf )



    Гость /31.01.2007 03:19/
    BSA;
    раствор 2mg/ml -кто знает, как лучше серию сделать для калибровки белка по Брэдфорду-для начин. урок.



    Гость /19.06.2007 10:44/
    как приготовить 10% спиртовой раствор йода?



    Yarl /27.07.2007 18:06/
    4 M guanidine thiocyanate, 0.2 M sodium acetate pH 5.0, 25 mM EDTA, 2.5% (w/v) PVP-40 potassiym acetate 1M помогите пожалуйста приготовить



    Гость /22.08.2007 23:49/
    EDTA, Mw- 292g, Так?
    EDTA-Na2- 372g...
    Так что же используется в таблице, EDTA-Na2 или что-то еще?



    Гость /19.10.2007 14:07/
    А как приготовить версен, пожалуйста..



    Гость /26.05.2008 15:19/
    Гриша-лучший!!!!!!!!!!!!!!



    Гость /10.04.2009 09:17/
    Вопрос от чайника. Какое количество праймера (концентрация 88 pmol/mkl, молярная масса 5530) нужно взять чтобы финальная концентрация в объеме 0,2 мкл была от 0,1 до 0,5 мкМ. Зарание благодарен








       
Дата последней модификации: 30/07/13

ГЛАВНАЯ · ПРОЕКТ · СПРАВОЧНИК · МЕТОДЫ · РАСТВОРЫ · РАСЧЁТЫ · ЛИТЕРАТУРА · ЗАДАЧИ · FULL TEXT · ОРГ.ВОПРОСЫ · WEB
ФИРМЫ · КАРТА САЙТА · COFFEE BREAK · КАРТИНКИ · РАБОТЫ И УСЛУГИ · БИРЖА ТРУДА · ФОРУМЫ · · Zbio-wiki

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  портал про стволовые клетки stemcellrussia.com  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
 ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
 ·  безоперационная ринопластика от fantasticnos ·  естественное увеличение груди биоимплантами · 

molbiol.ru  ·  redactor@molbiol.ru  ·  реклама

molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов   Rambler