Практична Молекулярна Біологія - головна сторінка.
 > Протоколи > Складні розчини

Складні розчини


  Русская версия
Русская версия

  English version
English version


  Deutsche Version
Deutsche Version

Головна сторінка
Проект
Протоколи
Обчислення
BioMail
Учасники




Rambler's Top100
 

 
 
 
 
 
 
 
    Про перерахунок рецептів на довільний об'єм:



    TE

    1x; pH7.4; 7.6; 8.0; (зберігати при 4oC).

    Конц.Stock1ml5ml10ml50ml400ml
    Tris Cl10mM1M10µl50µl100µl500µl4ml
    EDTA1mM0.5M2µl10µl20µl100µl800µl
    H2O mQ988µl4.94ml9.88ml49.4ml395ml

    10x:

    Конц.Stock1ml5ml
    Tris Cl0.1M1M0.1ml0.5ml
    EDTA10mM0.5M20µl0.1ml
    H2OmQ 880µl4.4ml
  • стерилізація автоклавуванням.

  • STE

    1x; (зберігати при 4oC).

    Конц.Stock1ml5ml10ml50ml
    NaCl0.1M5M20µl100µl200µl1.0ml
    Tris Cl, pH8.010mM1M10µl50µl100µl0.5ml
    EDTA, pH8.01mM0.5M2µl10µl20µl100µl
    H2O mQ0.968ml4.84ml9.68ml48.4ml

    10x:

    Конц.Stock1ml5ml
    NaCl1.0M5M0.2ml1.0ml
    Tris Cl0.1M1M0.1ml0.5ml
    EDTA10mM0.5mM20µl0.1ml
    H2OmQ 680µl3.4ml
  • стерилізація автоклавуванням.

  • SSC

    20x; pH 7.0; (зберігати при NT).

    Конц.Stock0.5L1.5L2L
    NaCl3M58.44g/M87.66g263.0g350.6g
    Na3C6H5O7x 5.5H2O0.3M357.1g/M53.57g160.7g214.3g
    H2O mQ440.3ml1.32L1.76L

    p =1.103


    TAE

    1x pH=7.6:

    Tris-ацетат 40mM
    EDTA 1mM

    (зберігати великий запас при 4oC, робочу кількість (~100ml) при нормальній температурі)

    Конц.Stock100ml150ml200ml250ml
    Tris-основа2M121.1g/M24.22g36.33g48.44g60.55g
    EDTA0.05M372.3g/M1.862g2.792g3.723g4.654g
    Оцтова к-та~1M17.4M ~5.71ml
    ~6.00g
    ~8.57ml
    ~9.00g
    ~11.42ml
    ~12.00g
    ~14.28ml
    ~15.00g

    H2O mQ     

    p(50x)=1.0878

  • зручно спочатку розчинити Tris та EDTA, а вже потім додати кислоту для доведення рН.

  • TBE

    10x, pH ~8.3;(зберігати при нормальній температурі у прозорій пляшці)

    1x10xStock1L
    Tris основа89mM0.89M121.14g/M107.8g
    Борна кислота89mM0.89M61.83g/M55.03g
    EDTA, pH 8.02mM20mM500mM40ml
    43.84g

    H2O  mQ863.3ml
  • 10х концентрований розчин є стабільним при нормальній температурі, якщо його профільтрувати через 0.4µm фільтр;
  • для ПААГ використовують 1х розчин, для агарозного гелю - 0,5х;
  • для агарозних гелей його використовують при розділі малих (< 200п.о.) фрагментів. Звичайно вважають, що очищення фрагментів з TBE-гелей є складнішим.

  • FGRB

    50x (formaldehyde gel-running buffer), p=1.104g/ml (зберігати при +4oC):

    Конц.Stock0.5L1.0L2.0L
    MOPS (pH7.0)1.0M209.27g/M104.64g209.27g418.54g
    AcONax3H2O0.5M136.08g/M34.02g68.04g136.08g
    EDTAx2H2O50mM372.3g/M9.31g18.62g37.23g
    H2O mQ404.0ml808ml1616ml
    Конц.Stock0.5L1.0L2.0L
    MOPS (pH7.0)1.0M209.27g/M104.64g209.27g418.54g
    AcONa безводний0.5M82.04g/M20.51g41.02g82.04g
    EDTA x 2H2O50mM372.3g/M9.31g18.62g37.23g
    H2O mQ417.5ml835ml1670ml
  • довести до pH7.0 додаванням 10N NaOH (на 500ml буфера ~22ml), стерилізувати фільтруванням через 0.22µm фільтр;
  • при зберіганні на світлі розчин стає жовтим, але це не впливає на його якість.

  • GTGB

    20x /Glycerol tolerant gel buffer/ (зберігати при +4oC):

    Конц.Stock1L1.5L2.0L2.5L

    Tris основа

    1.78M121.14g/M216g324g432g540g

    Таурин

    0.56M125.15g/M72g108g144g180g

    Na2EDTAx2H2O

    10.7mM372.3 g/M4g6g8g10g

    H2O

     mQ802ml1203ml1604ml2005ml

    p=1.094

  • Таурин: C2H7NO3S; Mw=125.15g/M.

  • TGB

    Tris-Glycine buffer 5x, pH8.3, (зберігати основний запас при +4oC, робочу кількість при NT).

    1xКонц.Stock1L1.5L
    Tris-base25mM125mM121.1g/M15.1g22.71g
    Glycine250mM1.25M75.05g/M94g141g
    SDS0.1%0.5%10%50ml75ml
    H2O  mQ   

    Буфер для нанесення

    10x, (зберігати при NT).

    Конц.Stock1ml5ml10ml25ml
    Xilene cyanol0.1%твердий1.0mg5.0mg10mg25.0mg
    Bromph. blue0.1%твердий1.0mg5.0mg10mg25.0mg
    ДСН0.5%10%50µl250µl500µl1.25ml
    EDTA, pH8.00.1M0.5M0.2ml1.0ml2.0ml5.0ml
    Гліцерол50%100% 0.5ml
    0.625g
    2.5ml
    3.125g
    5.0ml
    6.25g
    12.5ml
    15.63g

    H2O mQ0.25ml1.25ml2.5ml6.25ml

    PEG-NaCl

    (зберігати при 4oC).

    Конц.Stock50ml100ml150ml200ml
    NaCl1.6M58.44g/M4.675g9.35g14.03g18.70g
    PEG-600013%твердий6.50g13.00g19.50g26.00g

    або:

    Конц.Stock50ml100ml150ml200ml
    NaCl1.6M5M 16ml
    18.97g
    32ml
    37.95g
    48ml
    56.92g
    64ml
    75.90g

    PEG-600013%40%16.25ml32.50ml48.75ml65.00ml

    SM

    (зберігати при 4oC).

    Конц.Stock10ml50ml100ml150ml
    NaCl0.1M5M200µl1.0ml2.0ml3.0ml
    MgSO4*10mM1M100µl0.5ml1.0ml1.5ml
    Tris Cl, pH7.550mM1M0.5ml2.5ml5.0ml7.5ml
    Желатин0.01%2%50µl0.25ml0.5ml0.75ml
    H2O mQ9.15ml45.75ml91.5ml137.25ml

    * - додати після автоклавування


    STM

    (зберігати при 4oC):

    Конц.Stock50ml
    NaCl10mM5M100µl
    Tris Cl pH8.050mM1M2.5ml
    MgCl210mM1M500µl
    H2O mQ46.9ml

    TM

    (зберігати при 4oC):

    Конц.Stock50ml
    Tris Cl pH8.050mM1M2.5ml
    MgCl210mM1M500µl
    H2O mQ47.0ml

    Денатуруючий буфер

    (зберігати при NT).

    Конц.Stock100ml150ml300ml500ml750ml
    NaCl1.5M58.44g/M8.766g13.15g26.30g43.83g65.75g
    NaOH0.5M10M 5ml
    6.65g
    7.5ml
    9.97g
    15ml
    19.94g
    25ml
    33.23g
    37.5ml
    49.84g

      40g/M2g3g6g10g15g

    Нейтралізуючий буфер

    (зберігати при NT).

    Конц.Stock150ml300ml500ml750ml
    Tris Cl, pH7.41M121.1g/M18.15g36.3g60.5g90.75g
    NaCl1.5M58.44g/M13.15g26.30g43.83g65.75g
    HCl~0.81M11.6M/L~10.5ml~21ml~35ml~52.5ml
    EDTA (не обов'язково)1mM0.5M0.3ml0.6ml1ml1.5ml

    Проявник Рентген-2

    (зберігати при NT у темряві).

    500ml800ml1l
    Метол1.1g1.76g2.2g
    Na2SO336.0g57.6g72.0g
    Гідрохінон4.4g7.04g8.8g
    Na2CO324.0g38.4g48.0g
    KBr2.0g3.2g4.0g
    H2O490ml784ml980ml

    розчинити у наданій послідовності; r=1.115.


    Фіксаж БКФ 2

    (зберігати при NT).

    500ml800ml1l
    Na2S2O3x 5H2O130g208g260g
    NH4Cl25g40g50g
    Піросульфіт натрію8.5g13.6g17g
    H2O398ml636.8ml796ml

    розчинити у наданій послідовності; r=1.123.


    Сцинтиляційний розчин

    (зберігати при нормальній температурі у темряві):

    0.5L1L
    PPO2.50g5.00g
    POPOP0.05g0.10g
    Толуен   

    І плазмідний розчин

    (зберігати при +4oC)

    Конц.Stock50ml100ml150ml200ml
    Глюкоза50mM2M 1.25ml
    1.41g
    2.5ml
    2.825g
    3.75ml
    4.24g
    5.0ml
    5.56g

    Tris Cl, pH 8.025mM1.0 M1.25ml2.5ml3.75ml5.0ml
    EDTA10mM0.5 M1.0ml2.0ml3.0ml4.0ml
    H2O mQ46.5ml93ml139.5ml186ml

    ІІ плазмідний розчин

    Конц.Stock0.5ml1ml2.5ml5.0ml6.5ml8.5ml11ml
    NaOH0.2N1N0.1ml0.2ml0.5ml1.0ml1.3ml1.7ml2.2ml
    ДСН1%10%0.05ml0.1ml0.25ml0.5ml0.65ml0.85ml1.1ml
    H2O mQ0.350ml0.7ml1.75ml3.5ml4.55ml5. 95ml7.7ml

    Суміш для фарбування олігонуклеотидного гелю

    (зберігати при NT).

    Конц.Stock100ml200ml300ml500ml
    AcONa(5.2)0.5M3M17ml33ml50.0ml83ml
    Met. blue0.04%0.2%20ml40ml60ml100ml
    H2O mQ73ml127ml190ml317ml

    2M розчин Mg2+

    (зберігати при NT).

    Конц.Stock200ml
    MgCl2x6H2O1M203.3g/M40.66g
    MgSO4x7H2O1M246.48g/M49.30g
    H2O mQ144.6g

    p=1.173g/ml.


    HSB (f+)

    гібридизаційний буфер з високим вмістом ДСН (зберігати основний запас при 4oC, робочу кількість при нормальній температурі)

    Конц.Stock500ml
    ДСН7%твердий35g
    Формамід50%100%250ml
    283.3g

    SSC5x20x125ml
    145.3g

    Блок. реагент2%твердий10g
    NaP (pH 7.0)50mM1M25ml
    27.6g

    N-Lauroylsarcosine Na0.1%10%5ml
    5.1g

    ДНК з молок лосося50µg/ml10µg/µl2.5ml
    H2O mQ49ml

    p=1.111

  • блокуючий реагент - порошок від "Roche Diagnostics GmBH; у минулому - Boehringer Mannheim" #1096176. Замість 2% блокуючого реагенту можна використовувати 10х розчин Денхардта або 2% розчин знежиреного сухого молока.
  • можна розчинити блокуючий реагент лише у буфері з високою іонною силою (у даному випадку, у H2O+SSC+NaP).
  • ДНК з молок лосося повинна бути подрібненою та денатурованою.

  • Буфери для рестрикції 10x

    А.

    Конц.Stock100µl1ml
    Tris Ac (pH7.9 37oC)33mM1M33µl330µl
    MgAc10mM1M10µl100µl
    KAc66mM5M13.2µl132µl
    DTT0.5mM1M0.5µl5µl
    H2O mQ43.3µl433µl

    B.

    Конц.Stock100µl1ml
    Tris Cl (pH 8.0 37oC))10mM1M10µl100µl
    MgCl25mM1M5µl50µl
    NaCl100mM5M20µl200µl
    b-Me1mM1M1µl10µl
    H2O mQ64µl640µl

    L.

    Конц.Stock100µl1ml
    Tris Cl (pH 7.5 37oC)10mM1M10µl100µl
    MgCl210mM1M10µl100µl
    DTT1mM1M1µl10µl
    H2O mQ79µl790µl

    M.

    Конц.Stock100µl1ml
    Tris Cl (pH7.5 37oC)10mM1M10µl100µl
    NaCl50mM5M10µl100µl
    MgCl210mM1M10µl100µl
    DTT1mM1M1µl10µl
    H2O mQ69µl690µl

    H.

    Конц.Stock100µl1ml
    Tris Cl (pH7.5 37oC)50mM1M50µl50µl
    MgCl210mM1M10µl100µl
    NaCl100mM5M20µl200µl
    DTT1mM1M1µl10µl
    H20 mQ19µl190µl

    Розчин Денхардта 50x

    (зберігати при -20oC)

    Конц.Stock50ml300ml1L
    Фікол 4001%твердий0.5g3.0g10g
    Полівинил піролидон1%твердий0.5g3.0g10g
    BSA (fr V)1%твердий0.5g3.0g10g
    H2O mQ46.7ml292.2ml974ml

    p=1.004

  • фільтрування;
  • можна приготувати 100x.

  • PBS

    pH(1x)=7.4, (зберігати при NT або при 4oC):

    1xКонц.Stock100ml500ml
    KH2PO41.7mM17mM136.1g/M0.231g1.157g
    Na2HPO45.2mM52mM142g/M0.738g3.692g
    NaCl150mM1.5M58.44g/M8.77g43.83g
    H2O mQ    
    1xКонц.Stock100ml500ml
    KH2PO41.7mM17mM136.1g/M0.231g1.157g
    Na2HPO4x7H2O5.2mM52mM268.1g/M1.394g6.971g
    NaCl150mM1.5M58.44g/M8.77g43.83g
    H2O mQ    
  • стерилізація автоклавуванням;
  • рН залежить від концентрації; тому перевіряйте рН лише у розведеному 1х буфері;
  • рН 10х розчину повинен бути ~6,8 (при необхідності довести додаванням NaOH).

  • SSPE

    pH 7.4

    Конц.Stock1L
    NaCl3M58.44g/M175g
    NaH2PO4xH2O200mM137.99g/M27.6g
    EDTA20mM372.24g/M7.4g
  • довести рН додаванням 10N NaOH.


  • РНКаза (що не містить ДНКази)

    (зберігати при -20oC, робочі кількості можна зберігати при 4oC)

    1. розчинити 10mg/ml у 1-50mM AcONa (pH4.5);
    2. 15хв. нагрівати у окропі, потім повільно охолодити до нормальної температури;

    Буфер для зберігання РНКази

    (зберігати при -20oC).

    Конц.Stock1ml5ml10ml
    Tris Cl, pH7.610mM1M10µl50µl100µl
    Гліцерол50%100% 0.5ml
    0.630g
    2.5ml
    3.152g
    5.0ml
    6.305g

    H2O mQ0.486g2.43g4.86g

    Протеїназа K

    (зберігати при +4oC, тривале зберігання при –20oC):
    20mg/ml розчин у 10mM Tris Cl, 1.0mM CaCl2, 30% гліцерол.


    EDTA/глікоген

    20x (зберігати при -20oC):

    Конц.Stock1.0ml
    EDTA0.2M0.5M400 µl
    глікоген1mg/ml20mg/ml50 µl
    H2O mQ550 µl

    Буфер RQ1 для ДНКази

    10x (зберігати при -20oC):

    Конц.Stock1ml
    Tris Cl (pH8.025oC)0.4M1M400µl
    NaCl0.1M5M20µl
    MgCl260mM1M60µl
    CaCl20.1M1M100µl
    H20 mQ420µl

    Буфер для зберігання ДНКази

    (зберігати при -20oC).

    Конц.Stock1ml1.5ml2.5ml5ml10ml
    Tris Cl, pH 7.020mM1M20µl30µl50µl100µl200µl
    NaCl50mM5M10µl15µl25µl50µl100µl
    DTT1mM1M1µl1.5µl2.5µl5.0µl10µl
    Гліцерол50%100% 0.5ml
    0.630g
    0.75ml
    0.9g
    1.25ml
    1.58g
    2.5ml
    3.15g
    5.0ml
    6.31g

    H2O mQ0.485g0.73g1.21g2.42g4.85g

"Практична Молекулярна Біологія" http://molbiol.ru/ukr
e-mail: editor@molbiol.ru



Line

на початок
на початок

 

 ·  Викимарт - все интернет-магазины в одном месте  ·  портал про стволовые клетки stemcellrussia.com  · 
--- сервер арендован в компании Hetzner Online, Германия ---
 ·  Доска объявлений Board.com.ua  · 
--- администрирование сервера: Intervipnet ---
 ·  безоперационная ринопластика от fantasticnos ·  естественное увеличение груди биоимплантами · 


      molbiol.ru - методы, информация и программы для молекулярных биологов    Rambler